RCT sammenligner FET guidet af ERA vs standard timing hos patienter med tilbagevendende implantationsfejl

Forsøgsdesign Dette er et multicenter randomiseret dobbeltblindt kontrolleret forsøg, der evaluerer den kliniske effektivitet af ERA-guidet frossen embryooverførsel til at forbedre graviditetsraten for infertile kvinder med RIF. Alle deltagere vil først gennemgå en biopsicyklus for at opnå en endometriebiopsi for ERA og vil derefter blive tilfældigt fordelt i interventions- eller kontrolgruppen. Ved overførselscyklussen vil deltagerne i interventionsgruppen have frosset embryooverførsel tidsindstillet i overensstemmelse med ERA-resultatet, mens deltagerne i kontrolgruppen vil have frosset embryooverførsel i henhold til standard timing.

Screening, rekruttering og samtykke Kvinder med RIF vil blive rekrutteret fra 10 hospitaler i hele Kina. Tilbagevendende implantationsfejl er defineret som manglende graviditet efter tre embryooverførsel af både friske og frosne embryoner.3 Inklusions- og eksklusionskriterierne er opsummeret i tabel 1.

Tabel 1. Inklusions- og eksklusionskriterier Inklusionskriterier

1. Kvinder med RIF
2. Kvinder < 40 år
3. Body mass index for kvinder mellem 18,5 (inklusive) og 30 (eksklusive) kg/m²
4. Kvinder med mindst én frossen blastocyst af høj kvalitet (BB-grad eller derover) og planlægger at gennemgå en enkelt blastocystoverførsel
5. Kvinder, der vil give skriftligt informeret samtykke

Eksklusionskriterier

1. Kvinder med tilbagevendende graviditetstab (3 eller flere biokemiske eller spontane aborter)
2. Enten partner med kendte kromosomale abnormiteter, herunder afbalancerede translokationer
3. Kvinder, der gennemgår præimplantation genetisk test
4. Kvinder med endometrietykkelse < 7 mm i IVF-cyklussen
5. Kvinder med en bekræftet diagnose af stadium III-IV endometriose eller adenomyose, der påvirker livmoderhulens morfologi
6. Kvinder med en bekræftet diagnose af antiphospholipid syndrom
7. Patologier, der påvirker livmoderhulen, herunder polypper, submucosale fibromer, intramurale fibromer > 4 cm eller hydrosalpinx

Kvalificerede kvinder vil blive vejledt med hensyn til arten, formålet, procedurerne, forventet varighed, potentielle risici og fordele og eventuelle ubehag ved forsøget under rekruttering. Deltagelse er frivillig. Alle deltagere skal underskrive et skriftligt informeret samtykke, og ingen undersøgelsesrelateret procedure vil blive udført uden samtykke.

Demografiske data for alle deltagere vil blive registreret, som inkluderer deres alder, højde, vægt, kropsmasseindeks, rygning og uddannelsesniveau. Deres sygehistorie og fysiske undersøgelse vil også blive registreret, herunder indikationen for IVF, detaljer om tidligere embryooverførsel, obstetrisk historie, tidligere medicinsk, kirurgisk eller infektionshistorie. Resultaterne af laboratorietests vil også blive registreret, hvis de er tilgængelige, som omfatter grundlæggende endokrine tests såsom serum anti-mullerian hormoner niveau og skjoldbruskkirtelfunktionstest.

Biopsicyklus Alle deltagere vil gennemgå en biopsicyklus i en hormonbehandlingscyklus for at få en endometrieprøve til ERA-testning. Oral østradiol (Estrofem, Novo Nordisk A/S, Bagsværd Danmark) 2 mg tre gange dagligt vil blive påbegyndt på den første eller anden dag af deres menstruationscyklus i 10-15 dage, med et maksimum på 22 dage. Derefter vil der blive udført transvaginal ultralyd for at måle endometrietykkelsen, og blod vil blive taget for serum østradiol og progesteron niveauer. Når endometrietykkelsen er ≥ 7 mm, er serumøstradiolniveauet > 150 pg/ml (eller 500 pmol/ml), og serumprogesteronniveauet er < 1 ng/ml (eller 3,18 nmol/L), oralt dydrogesteron (Duphaston, Abbott, Illinois) , U.S.) 10 mg tre gange om dagen og vaginal progesterongel (Crinone 8%, Merck KGaA, Darmstadt, Tyskland) 90 mg dagligt vil blive startet inden for 24 timer ud over oral østradiol.

En endometriebiopsi vil blive udført i ambulatoriet efter brug af progesteron i 5 på hinanden følgende dage (120 + 3 timer) som start på progesteron P + 0. Endometrieprøven vil blive sendt til centrallaboratoriet (Hangzhou Yizhen Medical Laboratory, Kina) til ERA-testning.

Prøveindsamling og levering En endometriebiopsi vil blive udført med en pipelle, der er inkluderet i ERA-sættet under aseptisk teknik. Dykket vil blive trukket tilbage for at skabe et undertryk, og et stykke endometrievæv vil blive opsamlet fra fundus til det indre cervikale os. En vævsprøve på omkring 50 til 70 mg vil blive indsamlet.

Endometrieprøven overføres øjeblikkeligt til et kryorør indeholdende 1,5 ml RNA-senere stabilisatorvæske, som forhindrer RNA i at nedbrydes under transport til laboratoriet. For meget blod eller slim i prøven vil blive fjernet for at undgå RNA-nedbrydning. Opsamlingsrørene, der indeholder endometrieprøver, rystes for at sikre grundig blanding af RNA-opløsning med endometrieprøverne. Efter mærkning vil endometrieprøverne i opsamlingsrøret blive opbevaret ved 4 ℃ i køleskabet i mindst 4 timer og derefter transporteret ved stuetemperatur til det centrale laboratorium for ERA.

Endometrie-receptivitetsanalyse RNA-Seq high-throughput-sekventeringsteknologi vil blive brugt til at detektere ekspressionen af ​​næsten 250 gener relateret til endometrie-receptivitet. Endometrieimplantationsvinduet for de analyserede prøver vil blive opnået ved bioinformatisk analyse.

Overførselscyklus Deltagerne vil blive bedt om at få den frosne embryooverførsel inden for 1-3 måneder efter biopsicyklussen. Den frosne embryooverførsel udføres i en hormonbehandlingscyklus under anvendelse af det samme endometriepræparationsregime som biopsicyklussen. Tidspunktet for embryooverførsel vil være baseret på deres gruppetildeling. For deltagere i interventionsgruppen vil tidspunktet for frosset embryooverførsel blive arrangeret i henhold til ERA-resultatet. For dem i kontrolgruppen vil frossen embryooverførsel blive arrangeret i henhold til standard timing, dvs. efter 5 dages på hinanden følgende progesteronbrug. Den bedste kvalitet blastocyst vil blive optøet og overført først.

Detaljer om overførselscyklussen vil blive registreret, herunder endometrietykkelsesmåling, serumprogesteronniveau, startdato og -tidspunkt for progesteron, dato og klokkeslæt for embryooverførsel, befrugtningsmetode og Gardner-graderingen af ​​embryoet.

Opfølgning Efter 14 dages frossen embryooverførsel vil deltagerne have blodprøver for serum beta humant choriongonadotropin (β-hCG), østradiol og progesteron niveau. Undersøgelsen afsluttes, hvis deltagerne ikke er gravide.

Hvis deltageren er gravid, fortsætter opfølgningen indtil en uge efter fødslen. Ultralydsfund om antallet af fostre og føtal hjertestatus vil blive registreret 5 uger og 10-12 uger efter embryooverførsel. Fødselskomplikationer, leveringsdetaljer og neonatale oplysninger vil også blive registreret. Undersøgelsen afsluttes efter en uge efter fødslen, eller hvis der opstår graviditetstab i opfølgningsperioden.

Randomisering og blinding Randomisering Randomisering vil blive udført i Hangzhou Yizhen Medical Laboratory, Kina efter modtagelse af endometrieprøverne og før videre til ERA. Kvinder vil blive tilfældigt tildelt enten interventionsgruppen eller kontrolgruppen i et forhold på 1:1. Randomisering vil blive stratificeret efter centrene og kvindernes alder (<35 vs ≥35 år) ved hjælp af en tilfældig taltabel.16 Hver kvinde vil kun blive inkluderet og randomiseret én gang i undersøgelsen.

Blindning Dette er et dobbeltblindt studie, og hverken deltagerne eller forskerne vil være opmærksomme på gruppetildelingen. Forskere i hvert deltagende center vil blive underrettet af laboratoriet om det anbefalede tidspunkt for embryooverførsel for hver deltager. Rapporten vil angive følgende: "det anbefales, at denne kvinde gennemgår frossen blastocystoverførsel ved P+X timer."

Afblænding Afblænding vil ske, når deltageren får taget blodprøver for β-hCG, østradiol og progesteronniveauer 14 dage efter embryooverførsel. Både deltager og forskere vil blive informeret om gruppeopgaven. Deltagere i kontrolgruppen, som ikke bliver gravide, kan vælge at erstatte de resterende frosne blastocyster i efterfølgende cyklusser baseret på ERA-resultaterne.

Undersøgelsesresultat Primært resultat Det primære resultat er den igangværende graviditetsrate defineret som graviditet med føtal pulsering efter 10-12 uger.

Sekundært resultat Sekundære udfald er endometrie-receptivitetsstatus, biokemisk graviditetsrate, klinisk graviditetsrate, biokemisk abortrate, tidlig abortrate, ektopisk graviditetsrate og levende fødselsrate. Deres definitioner er anført i tabel 2. Obstetriske resultater omfatter forekomsten af ​​svangerskabsdiabetes mellitus, præeklampsi, placenta previa, placentaabruption og leveringsmåden. Neonatale resultater omfatter svangerskabsalder, fødselsvægt, Apgar-score, præmature rate, misdannelsesrate og neonatal dødelighed.

Prøvestørrelse Det primære resultatmål er den igangværende graviditetsrate, som forventes at være 35 % i interventionsgruppen og 25 % i kontrolgruppen. Med et tosidet testniveau α = 0,05 og effekt (1-β) = 80 %, ved brug af PASS15-software og baseret på Fishers eksakte test, er den beregnede stikprøvestørrelse 660 kvinder (330 i interventionsgruppen og 330 i kontrolgruppen ). I betragtning af en frafaldsrate på 10 % kræves en samlet stikprøvestørrelse på 734 deltagere (367 i interventionsgruppen og 367 i kontrolgruppen).

Dataanalyse Fuldt analysesæt, pr. protokolsæt og sikkerhedsanalysesæt vil blive analyseret. Fuldt analysesæt refererer til dem, der har modtaget mindst én test og mindst én evaluering af effektivitet. Pr. protokolsæt refererer til alle sager i det fulde analysesæt, som har gennemført de protokolspecificerede cyklusser og ikke har haft større protokolbrud. Sikkerhedssæt refererer til dem, der modtog mindst én test efter tilmelding og havde mindst én sikkerhedsevaluering.

Optællingsdata vil blive præsenteret som frekvenser og procenter, mens måledata vil blive præsenteret med middelværdi, standardafvigelse, median, maksimum og minimum. De primære og sekundære resultater blandt forskellige grupper vil blive direkte sammenlignet.

De igangværende graviditetsrater blandt tre grupper vil også blive sammenlignet: overførsel med justeret timing baseret på ERA-nonreceptive resultater, overførsel med standard timing baseret på ERA-receptive resultater og overførsel med standard timing hos kvinder med ERA-nonreceptive resultater.