Schnelle Charakterisierung von Paucibacillary TB entlang der Tex/Mex-Grenze

Globale Herausforderungen für die Kontrolle der Tuberkulose (TB) sind multiresistente TB (MDR-TB) und die erhöhte Anfälligkeit von Bevölkerungsgruppen wie älteren Menschen, Menschen mit HIV-Infektion, Typ-2-Diabetes und anderen immunsuppressiven chronischen Krankheiten. Das erste primäre Studienziel ist die Untersuchung des Potenzials des neuen DNA-Extraktions-/qPCR-Protokolls der Forscher als nicht-invasives Instrument zur Untersuchung der Pathogenese in einer Reihe von paucibacillary-Proben. Die Prüfärzte werden ihre DNA-Extraktions-/qPCR-Assays prospektiv in Proben von Patienten mit paucibazillärer TB, einschließlich extrapulmonaler TB (EPTB) und ausstrichnegativer pulmonaler TB, auswerten. Die Ermittler werden die Anzahl der mykobakteriellen Genome, das Vorhandensein intakter Mykobakterien und die genaue Position im Plasma, PBMCs oder PMNs im Blut oder anderen Flüssigkeiten oder Zellen in einer Reihe von Proben bestimmen. Das zweite primäre Studienziel ist die Standardisierung und Validierung eines qPCR-Assays zur Früherkennung von Mycobacterium tuberculosis (MTB)-Medikamentenresistenzen direkt aus Proben. Die Forscher werden ferner die Durchführbarkeit der Verwendung dieses hochempfindlichen Assays zur Bestimmung des Verhältnisses von Rifampin (RIF)-resistenten zu RIF-empfindlichen Bakterien in einer bestimmten Probe feststellen. Die Forscher werden eine einfache und effektive Methode, ähnlich ihrer qPCR-Technologie, zum Nachweis von Mutationen im rpoB-Gen anpassen. MTB-positive Proben, die entweder durch qPCR oder direkten Abstrich identifiziert wurden, werden unter Verwendung von Molecular Beacons als Sonden in qPCR auf RIF-Resistenz untersucht. Die Übereinstimmung zwischen den Molecular Beacon-qPCR-Assays und dem Resistenzphänotyp aus der Kultur wird hergestellt. Die Forscher werden dann die Kapazität von qPCR nutzen, um die Verhältnisse von RIF-resistenten zu -sensitiven Mykobakterien in einer klinischen Probe zu quantifizieren. Die Forscher gehen davon aus, dass derzeitige Assays darauf beschränkt sind, das „Vorhandensein“ einer Arzneimittelempfindlichkeit anzuzeigen, aber beim Patienten ist die Situation komplexer, mit dynamischen Mischungen aus resistenten und empfindlichen Bakterien, abhängig von der lokalen Exposition gegenüber Arzneimitteln. Die Entwicklung eines Instruments, das kleinere Populationen von Arzneimittelresistenzzellen erkennt, wird neue Untersuchungsmöglichkeiten eröffnen, um die Entwicklung von Resistenzen und Behandlungsversagen zu verstehen. Zu den primären Studienergebnissen gehören: Erwartung, dass die qPCR in Blut-WBCs eine wesentlich verbesserte Sensitivität und Präzision (Informationen über mykobakterielle Arten) bei der Diagnose von pauzibakterieller TB, insbesondere tuberkulöser Lymphadenitis, pleuraler TB und negativer (früher) pulmonaler TB im Abstrich, im Vergleich zu bieten wird mikrobiologische und klinische Standarddiagnostik; Erwartung, dass Molecular Beacon-qPCR die RIF-Resistenz mit 100 % Sensitivität und mindestens 86 % Sensitivität an ihrem Studienort vorhersagen wird, wodurch ein neues Instrument für den frühen Verdacht auf MDR und damit eine sofortige Änderung des Behandlungsplans des Patienten bereitgestellt wird; und Forscher lernen die Biologie der Entstehung von RIF-Resistenz in einer Population von Mykobakterien anhand von seriellen Patientenproben kennen. Die Proben werden von Patienten aus 3 Standorten mit überwiegend hispanischer Bevölkerung in Südtexas, dem angrenzenden Nordosten Mexikos und Kolumbien entnommen. Es werden maximal 780 Männer und Frauen im Alter von 18 bis 85 Jahren eingestellt. Die Studienpopulation besteht aus 390 Personen mit Tuberkulose (62 mit TB-Lymphadenitis und höchstens 164 mit Pleura-TB und 164 mit Abstrich-negativer Lungen-TB) und 390 Kontrollen (entweder gesunde Kontrollen oder mit einer Krankheit, von der ursprünglich angenommen wurde, dass sie eine der ist drei TB-Formen für Fälle beschrieben, dann aber ausgeschlossen). Die Probanden haben 1 studienbezogenen Besuch. Die Patienten werden nur zu Beginn ihrer Untersuchung auf mögliche TB kontaktiert, zur Teilnahme eingeladen und befragt. Das Studienteam wird sich mit dem Gesundheitsamt in Verbindung setzen, um festzustellen, ob bei dem Patienten tatsächlich TB diagnostiziert wurde, und mit dem Labor, um die Ergebnisse des seriellen direkten Abstrichs, der Kultur und der Empfindlichkeit bei der Diagnose und im Verlauf der Behandlung zu bestimmen.