Señalización de IL13 en asma alérgica

OBJETIVO 1. Evaluar críticamente el transcriptoma, el fosfoproteoma y el secretoma regulados por dupilumab de las células epiteliales de las vías respiratorias nasales aisladas de pacientes obesos con asma alérgica frente a no alérgica y obesidad comórbida. OBJETIVO 2. Determinar el efecto de dupilumab sobre la expresión y la actividad de señalización de IL-4Ra, IL-13Ra1 e IL-13Ra2 en células epiteliales de las vías respiratorias nasales aisladas de pacientes con asma alérgica frente a no alérgica y obesidad comórbida.

Diseño del estudio: El objetivo es inscribir a 16 adultos con asma alérgica y obesidad y 16 adultos con asma y obesidad no alérgica. Los sujetos de cada grupo se someterán a una visita de selección inicial (V0) para establecer los grupos de sujetos según el estado alérgico. El asma "alérgica" se definirá como la presencia de una prueba cutánea positiva, recuento absoluto de eosinófilos > 150/uL e IgE sérica > 100 UI/ml, ya que estos criterios han diferenciado fenotipos de pacientes con asma y obesidad en estudios previos. Los sujetos se someterán a pruebas de alergia en la piel y muestras de sangre en V0. Los sujetos regresarán dentro de las 2 semanas posteriores a la selección inicial y recolectaremos cepillados frescos del cornete inferior sinonasal de los participantes utilizando cepillos de citología estériles.

Población de estudio: Adultos obesos con asma alérgica y no alérgica.

Plan de análisis:

El efecto de dupilumab en los patrones de expresión transcriptómicos y proteómicos, incluido el cambio de veces de la señalización de IL-13Ra2, se comparará entre pacientes obesos con asma alérgicos y obesos con asma no alérgicos. Cada conjunto de datos se evaluará críticamente en cuanto a la calidad de los datos y luego se procesará utilizando flujos de trabajo estándar de campo. Para los datos mRNA-seq, se utilizará el paquete DESeq2 para identificar transcripciones expresadas diferencialmente, y para los datos proteómicos emplearemos modelos lineales utilizando una estadística de prueba moderada. Además de identificar transcritos individuales y proteínas que están reguladas de manera diferencial, se realizará un análisis de vías de ingenio para identificar vías desreguladas. La tasa de falsos descubrimientos se utilizará para corregir múltiples pruebas de hipótesis dentro de cada uno de los análisis realizados. Biomarcadores adicionales que incluyen IgE sérica, periostina e IL-33; superficie celular IL-4Ra e IL-13Ra1, espirometría y mediciones de IOS; recuentos de eosinófilos en sangre; metacolina PC20; Las puntuaciones de ACQ y las mediciones de FeNO se compararán mediante la prueba t de Student o la prueba de suma de rangos de Wilcoxon, según la normalidad del conjunto de datos específico. Se utilizará SAS versión 9.4 o superior (SAS Institute, Inc., Cary, NC) y el entorno de programación estadística R, versión 4.0 o superior, para todos los análisis y un valor de p ajustado <0,05 se considerará estadísticamente significativo.

Tamaño de la muestra: Los cálculos del tamaño de la muestra se basan en estimaciones de diferencias medias clínicamente significativas y desviaciones estándar. Se midió el cambio de línea base de la expresión de IL-13RA2 en fibroblastos humanos de las vías respiratorias cultivados para 6 sujetos en un grupo de asma delgado (0,312 ± 0,289) y 7 sujetos en un grupo de asma obeso (5,285 ± 3,944). Los tamaños de muestra de grupo de 8 dentro de cada grupo (16 en total) logran un poder del 86,2 % para rechazar la hipótesis nula de medias iguales con un nivel de significancia (alfa) de 0,050 utilizando una prueba t de varianza desigual de dos muestras bilaterales.

El tamaño del efecto para esta comparación, basado en datos históricos, es de aproximadamente 1,75 (tamaño del efecto bastante grande). Por lo tanto, aumentar el tamaño de la muestra a 16 pacientes por grupo ofrecería la posibilidad de detectar un tamaño del efecto más bajo de 1,07 a 1,21 con una potencia del 80 % al 90 %. Suponiendo una desviación estándar similar en cada grupo, esto se traduce en la capacidad de detectar una diferencia entre los grupos de asma de al menos 3,0. Para permitir una tasa potencial de abandono de pacientes del 15 %, el plan es reclutar un total de 36 participantes.