Influencias virales y epigenéticas en CRSwNP

ANTECEDENTES Y FUNDAMENTOS DE LA INVESTIGACIÓN

La rinosinusitis crónica (RSC) puede manifestarse como patrones de inflamación T2 y/o no T2, independientemente de la presencia o ausencia de pólipos nasales (PN). Ciertos aspectos de la CRS, como la formación de NP, se han asociado con procesos epigenéticos. Numerosos estudios respaldan el papel de la epigenética en el desarrollo y la cronicidad de otras enfermedades T2, p. asma y rinitis alérgica (North, Ann Allergy Asthma Immunol, 2011).

Es posible que las experiencias del "mundo real" durante la pandemia de COVID19 hayan proporcionado una idea de la patogénesis de la enfermedad T2. Las medidas de contención viral implementadas en 2020 previsiblemente redujeron la frecuencia de los virus respiratorios más comunes, reduciendo las infecciones respiratorias invasivas junto con las exacerbaciones del asma y la EPOC, que generalmente se desencadenan por infecciones respiratorias virales (Linden, Eur Respir Rev, 2019; Mikhail, Ann Allergy Asthma Inmunol, 2019). Inesperadamente, también se redujo la inflamación crónica de las vías respiratorias superiores. La otitis media crónica con efusión y la adenoiditis se desplomaron, y más de la mitad de los niños en lista de espera para cirugía fueron retirados por los investigadores debido a una mejoría espontánea. Esto fue acompañado por observaciones anecdóticas de una reducción en las consultas por rinosinusitis crónica con poliposis nasal (CRSwNP).

Por lo tanto, los investigadores proponen que la enfermedad T2 representa una faceta única del espectro de la enfermedad inflamatoria en la que se desarrolla una disfunción después de la interacción con un patógeno viral que mantiene efectos persistentes a través de mecanismos epigenéticos o infección crónica.

Plan de investigación detallado La comprensión actual de la fisiopatología de la enfermedad T2 deja en gran parte sin explicar los primeros pasos de la patogénesis. Los investigadores creen que la enfermedad T2 es el resultado de la impronta epigenética que reduce la respuesta T1 a lesiones o patógenos a través del deterioro de los componentes de señalización del interferón (IFN), lo que lleva a la señalización T2 sin oposición.

Además, los investigadores sospechan que esta disfunción se produce por una infección vírica, que puede persistir en el huésped de forma latente, o que puede seguir ejerciendo sus efectos a través de modificaciones epigenéticas del genoma del huésped. En consecuencia, los investigadores proponen caracterizar de manera integral las modulaciones epigenéticas presentes en la inflamación T2, centrándose en demostrar el vínculo con las infecciones virales. Para alcanzar nuestro objetivo, los investigadores caracterizarán la enfermedad T2 combinando el estado de metilación del ADN, la accesibilidad de la cromatina y el perfil de expresión génica para determinar los genes y los cambios epigenéticos potencialmente importantes en la patogenia de la enfermedad T2. Los investigadores aprovecharán el cambio masivo en la exposición viral social impuesta por las medidas pandémicas como una condición experimental única al comparar los resultados contemporáneos con un biobanco de material anterior a la pandemia. Además de arrojar nueva luz sobre la patogenia, definir el retrato epigenético y de viroma de la enfermedad T2 mejorará nuevos objetivos diagnósticos y terapéuticos y, potencialmente, identificará los virus implicados.

Estrategia de investigación Los investigadores identificarán patrones epigenéticos y virus asociados con pacientes T2 CRSwNP. Aprovechando un biobanco existente y extenso de células de muestras de tejidos y biopsias, los investigadores compararán la epigenética y los virus presentes antes del confinamiento y durante la pandemia en CRS y pacientes sanos. La población (detallada en la siguiente sección) incluye sujetos sanos, pacientes con RSC en tratamiento en remisión y pacientes enfermos sometidos a cirugía endoscópica de senos paranasales (CEE). El objetivo de los investigadores es evaluar un número igual de ambos sexos biológicos para analizar posibles diferencias. El tamaño de la muestra se basa en la experiencia previa en transcriptómica. Este estudio observacional no requerirá ningún tratamiento adicional a los pacientes.

Diseño experimental

I) TIPO 2 Y METILACIÓN:

Células epiteliales primarias de muestras de biopsia de CRSwNP (N=24) y células epiteliales nasales primarias de control de pacientes sometidos a cirugía hipofisaria endoscópica (N=16) Población: los investigadores utilizarán células disociadas congeladas de nuestro biobanco en el formato más temprano posible (P0 o P1) para preservar los virus originales y las marcas epigenéticas. Las muestras de pólipos de T2 CRSwNP se seleccionarán según el fenotipo clínico junto con análisis de sangre e histología.

II) PACIENTES EN REMISIÓN Métodos: Los experimentos A, B y C utilizarán todos el siguiente método para analizar muestras de cepillado de la cavidad nasal. (N=36) A) Establecimiento del perfil de viroma y metilación en células sanas de las vías respiratorias superiores. (N=12) B) ¿Cómo se ven los senos sanos bajo tratamiento médico? (N=12) C) ¿La reducción de la inflamación T2 con dupilumab funciona aumentando la actividad del IFN o reduciendo la metilación en la vía del IFN?

III) ¿CÓMO EJERCE UN EFECTO LA CIRUGÍA EN EL TIPO 2? Análisis transversal primario y luego comparado con la evolución a los 4 meses postoperatorios Población: Pacientes sometidos a ESS por CRSwNP, incluyendo al menos el 30% de los sujetos con sensibilidad a la aspirina.

Fase I: En el momento de la ESS (n= 24, más 6 para la validación del cepillado) Métodos: Los pacientes serán sometidos a una biopsia del seno etmoidal anterior. Estos se someterán a una evaluación utilizando herramientas transcriptómicas, incluidos los multíomas de células individuales.

Fase II: 4 meses post-ESS (n=los mismos 24 sujetos emparejados. La misma cohorte de pacientes se evaluará en el punto de tiempo de cuatro meses. La evolución de la enfermedad se evaluará de acuerdo con los estándares CSO HNS en resultados "Óptimos", "Subóptimos" o "Inaceptables". Se utilizará un cepillado para el muestreo y se someterá a los mismos análisis que el anterior.