Evaluación del rendimiento del diagnóstico clínico de una prueba rápida de sarampión en Senegal

A. Producto en evaluación

Ensayo inmunocromatográfico de flujo lateral IgM antisarampión fabricado por DIATROPIX (Dakar, Senegal). La prueba de diagnóstico rápido (RDT) se preparará en kits para usar con suero y fluido capilar, con dispositivos adicionales disponibles para uso experimental con fluido oral.

B. Diseño del estudio

Este es un estudio prospectivo de evaluación diagnóstica de una PDR de sarampión de uso profesional, diseñado para evaluar el rendimiento (sensibilidad y especificidad) de la PDR para la confirmación de casos de sarampión por parte de personal ajeno al laboratorio con el propósito de detección de brotes y vigilancia nacional. El rendimiento de la RDT utilizando sangre capilar y fluido oral se comparará con el estándar de referencia combinado de detección de IgM antisarampionosa por ELISA en el suero de un caso sospechoso o un resultado positivo de PCR para sarampión (en muestra de hisopo nasofaríngeo o fluido oral). Dado que se recolectarán muestras de suero para pruebas de referencia (como parte de la práctica habitual de vigilancia), el diseño del estudio también incorporará una evaluación del uso de la RDT por parte del personal del laboratorio en suero.

C. Tamaño de la muestra

Usando un enfoque de simulación basado en 10,000 resultados, estimamos que se requieren un mínimo de 672 casos de sarampión IgM-negativos y 172 IgM-(o PCR) positivos (por resultados de pruebas de referencia) para garantizar la precisión suficiente de las estimaciones de sensibilidad y especificidad para cumplir con el objetivo. requisitos del perfil del producto; con un tamaño de muestra objetivo total de al menos 844 dependiendo del % de positividad de las muestras analizadas.

D. Reclutamiento

El reclutamiento se alineará con la estrategia de vigilancia del sarampión basada en casos, mediante la cual se invitará a participar en la vigilancia a los pacientes elegibles consecutivos que se presenten en el sitio del estudio. Todos los casos sospechosos de sarampión serán elegibles para la prueba de acuerdo con el enfoque nacional de vigilancia basada en casos (incluidos aquellos que son casos clínicos vinculados epidemiológicamente).

Los pacientes que cumplan con los criterios de inclusión del estudio recibirán información sobre el estudio y las pruebas de diagnóstico adicionales involucradas más allá de lo que se requiere para la atención clínica o la vigilancia de rutina. La inclusión seguirá un procedimiento de consentimiento informado y las personas que no deseen participar seguirán recibiendo atención clínica de rutina, que puede incluir actividades de vigilancia de rutina.

La atención clínica urgente, la intervención o la remisión/transferencia a otro sitio no se retrasarán, y los pacientes solo son elegibles para su inclusión una vez que estén clínicamente estables según lo considere el funcionario clínico responsable.

E. Estrategia de muestreo clínico

Todos los participantes se someterán a muestras de sangre venosa, capilar y de fluidos orales (a menos que se apliquen exclusiones específicas). La extracción de sangre venosa está alineada con el procedimiento operativo estándar del ministerio de salud para la vigilancia. A los efectos del estudio, el muestreo de fluidos orales reemplazará al hisopado nasofaríngeo como técnica equivalente para la detección del ARN del sarampión.

Muestreo de sangre venosa/suero

Se tomará sangre completa venosa en un tubo simple y seco de pacientes de todas las edades (a menos que sea una práctica actual obtener muestras de suero mediante muestreo capilar por punción en el talón en bebés pequeños en el sitio del estudio). La muestra de sangre completa se almacenará o centrifugará para facilitar la separación del suero en el sitio participante en preparación para el transporte y la prueba del suero para detectar IgM contra el sarampión en un laboratorio del Institut Pasteur de Dakar (IPD), utilizando tanto RDT (10 microlitros) como ELISA ( 100 microlitros). Estos sueros también pueden someterse a pruebas adicionales como parte de la rutina de vigilancia, incluso para rubéola y zika IgM.

Muestreo de fluidos orales

A menos que no sea elegible (consulte los criterios de exclusión de fluidos orales), se tomará una muestra de fluido oral de todos los participantes y se agregará al medio de transporte de virus (VTM)/tampón, según las instrucciones del fabricante. Después de la preparación de la muestra, el fluido oral se analizará en el sitio para detectar la presencia de IgM utilizando la RDT. La muestra de líquido residual se almacenará y transportará al laboratorio nacional de referencia de sarampión para PCR +/- otras pruebas moleculares.

Además de evaluar el desempeño de la PDR con fluido oral, la recolección de esta muestra junto con el suero fortalece el estándar de referencia contra el cual se evalúa la nueva PDR. También permitirá evaluar el valor agregado del análisis molecular de las cepas de sarampión circulantes para informar la vigilancia nacional y guiar las decisiones de salud pública. Por lo tanto, si el participante no es elegible para la muestra de fluidos orales pero es factible un frotis nasofaríngeo, se tomará este en su lugar. Sin embargo, las muestras de hisopos nasofaríngeos no se aplicarán a la RDT.

sangre capilar

A todos los participantes se les tomará una muestra de sangre capilar utilizando la técnica recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS). La sangre capilar (5 microlitros) se agregará directamente al tampón de muestra según el procedimiento operativo estándar/instrucciones del fabricante y después de la dilución, se aplicará a una RDT sin demora. Después de confirmar un resultado válido en la RDT, se desechará la sangre capilar diluida residual.

F. Pruebas de diagnóstico rápido

Para cada prueba rápida (suero, sangre capilar, fluido oral), los resultados serán leídos e interpretados como positivos o negativos por dos miembros del personal de laboratorio independientes (para suero) o personal externo al laboratorio (para sangre capilar y fluido oral). Se documentará tanto la interpretación cualitativa como la intensidad de las líneas de control y test según una ficha de referencia, así como el momento de la lectura.

Luego de la lectura del resultado, se tomará una fotografía y la RDT utilizada con sangre capilar o fluido oral se secará, almacenará con desecante y se transportará a IPD para análisis moleculares adicionales.

El personal recibirá capacitación sobre el uso de la RDT durante la implementación del estudio y se le proporcionará el protocolo y la información del producto/instrucciones de uso del fabricante.

Esta información incluirá la temperatura de almacenamiento, el contenido del kit, la temperatura de funcionamiento, el tiempo de incubación mínimo y máximo, la estabilidad de los productos después de abrirlos, los equipos o consumibles adicionales necesarios pero no incluidos en el kit y el número de pasos del procedimiento.

G. Variabilidad entre lectores

Un segundo investigador leerá todas las PDR realizadas y los resultados se compararán para evaluar la variabilidad entre lectores. Cualquier discrepancia se resolverá mediante una tercera lectura independiente por parte de un miembro capacitado del equipo de estudio. Se documentará el nombre del miembro del personal que registra cada resultado de RDT. El equipo de estudio en cada sitio/laboratorio participante estará capacitado para garantizar que cada lectura se realice de forma independiente. El RDT se realizará e interpretará antes de que se conozca el resultado de ELISA.

H. Duración del estudio

El estudio tendrá la duración necesaria para incluir el tamaño de muestra requerido estimado (número mínimo de casos sospechosos positivos y negativos), con un objetivo de finalización en 6 meses, y la posibilidad de extenderlo a 9 meses. El personal del laboratorio de pruebas de referencia de virología del IPD, que no conocerá los resultados de la RDT, controlará la cantidad de casos positivos y negativos (según la prueba de referencia) cada semana. El equipo de estudio revisará el progreso general del reclutamiento semanalmente, con aportes del equipo del laboratorio de referencia cada dos meses.

Dada la gran cantidad de casos negativos requeridos y para evitar demoras innecesarias en las posibles presentaciones de aprobación regulatoria, el equipo de datos y los investigadores del estudio realizarán una revisión intermedia de los resultados cuando se hayan reclutado 172 casos positivos. Los investigadores evaluarán si ya se ha logrado suficiente precisión en torno a la estimación de la especificidad para fines de aprobación regulatoria y si se requiere reclutamiento adicional.

I. Cuestionario de facilidad de uso

Al principio (después de la formación) y al final del estudio, se pedirá a todo el personal responsable de realizar las PDR que responda un breve cuestionario de fácil uso. Las preguntas buscarán capturar la facilidad de uso percibida de la RDT, incluida la claridad de las instrucciones de uso y el etiquetado del paquete, el procedimiento de muestreo clínico, el tiempo de lectura, el volumen de muestra que se utilizará, la facilidad/dificultad de los pasos para realizar la prueba (incluida la preparación de la muestra y la aplicación de la muestra), la facilidad de lectura e interpretación de los resultados y la bioseguridad percibida.

J. Entrada de datos

Los datos se recopilarán utilizando un formulario de informe de caso electrónico (eCRF) antes de la recolección de muestras y coincidirán con los datos recopilados en el formulario en papel de vigilancia nacional obligatorio. Los datos se ingresarán en TERANGA Mobile, el sistema seguro de recopilación de datos clínicos y vigilancia del Institut Pasteur de Dakar, en el cual se capacitará al equipo del estudio durante la implementación del estudio. El facilitador del estudio en cada sitio tendrá la responsabilidad de garantizar que el eCRF se complete y guarde correctamente. Además de la entrevista con el paciente o el cuidador, se puede complementar información adicional mediante el formulario de vigilancia nacional en papel o los registros de vacunación (p. ej., para obtener fechas de vacunación).

K. Control de calidad (seguimiento) y aseguramiento (auditoría)

Se realizará un control de calidad en cada etapa del procesamiento de datos para garantizar que todos los datos sean confiables y hayan sido procesados ​​correctamente. Los sitios de estudio serán responsables de verificar regularmente la calidad de los datos que generan, incluso si todos los pacientes incluidos tienen formularios de consentimiento y se han sometido a todos los procedimientos de muestreo requeridos.

IPD llevará a cabo un seguimiento del estudio basado en el riesgo y los controles de calidad asociados, tal como se describe en el plan de seguimiento detallado. Los monitores del estudio revisarán y verificarán los datos de origen para confirmar que los datos ingresados ​​sean precisos y completos y que puedan verificarse en los documentos de origen; que la seguridad y los derechos de los participantes estén protegidos; y que el estudio se lleva a cabo de acuerdo con el protocolo autorizado actual, las Buenas Prácticas Clínicas (GCP) y todos los requisitos reglamentarios aplicables. El plan de monitoreo detallará la frecuencia de las visitas de monitoreo y auditorías en el sitio de estudio.