Valutazione delle prestazioni diagnostiche cliniche di un test rapido per il morbillo in Senegal

A. Prodotto in fase di valutazione

Saggio immunocromatografico a flusso laterale IgM anti-morbillo prodotto da DIATROPIX (Dakar, Senegal). Il test diagnostico rapido (RDT) sarà preparato in kit per l'uso con siero e fluido capillare, con dispositivi aggiuntivi disponibili per uso sperimentale con fluido orale.

B. Disegno dello studio

Si tratta di uno studio prospettico di valutazione diagnostica di una RDT del morbillo per uso professionale, progettato per valutare le prestazioni (sensibilità e specificità) della RDT per la conferma di casi di morbillo da parte di personale non di laboratorio ai fini del rilevamento dell'epidemia e della sorveglianza nazionale. Le prestazioni RDT utilizzando sangue capillare e fluido orale saranno confrontate con lo standard di riferimento combinato di rilevazione di IgM anti-morbillo mediante ELISA nel siero di un caso sospetto o un risultato PCR positivo per morbillo (su campione di tampone nasofaringeo o fluido orale). Dato che i campioni di siero saranno raccolti per i test di riferimento (come parte della consueta pratica di sorveglianza), il disegno dello studio incorporerà anche una valutazione dell'uso della RDT da parte del personale di laboratorio sul siero.

C. Dimensione del campione

Utilizzando un approccio di simulazione basato su 10.000 risultati, stimiamo che siano necessari un minimo di 672 casi di morbillo IgM negativi e 172 casi positivi di IgM (o PCR) (in base ai risultati dei test di riferimento) per garantire una precisione sufficiente delle stime di sensibilità e specificità per soddisfare l'obiettivo Requisiti del profilo del prodotto; con una dimensione totale del campione target di almeno 844 a seconda della percentuale di positività dei campioni testati.

D. Reclutamento

Il reclutamento si allineerà con la strategia di sorveglianza del morbillo basata su casi, per cui i pazienti idonei consecutivi che si presentano al sito dello studio saranno invitati a partecipare alla sorveglianza. Tutti i casi sospetti di morbillo potranno essere sottoposti a test in linea con l'approccio di sorveglianza nazionale basato sui casi (compresi quelli che sono casi clinici epidemiologicamente collegati).

Ai pazienti che soddisfano i criteri di inclusione nello studio verranno fornite informazioni relative allo studio e ai test diagnostici aggiuntivi coinvolti oltre a quanto richiesto per l'assistenza clinica o la sorveglianza di routine. L'inclusione seguirà una procedura di consenso informato e le persone che non desiderano partecipare continueranno a ricevere cure cliniche di routine, che possono includere attività di sorveglianza di routine.

L'assistenza clinica urgente, l'intervento o il rinvio/trasferimento a un altro sito non saranno ritardati e i pazienti sono idonei per l'inclusione solo una volta clinicamente stabili come ritenuto dall'ufficiale clinico responsabile.

E. Strategia di campionamento clinico

Tutti i partecipanti saranno sottoposti a prelievo di sangue venoso, capillare e fluido orale (a meno che non si applichino esclusioni specifiche). Il prelievo di sangue venoso è allineato alla procedura operativa standard del ministero della salute per la sorveglianza. Ai fini dello studio, il campionamento del fluido orale sostituirà il tampone nasofaringeo come tecnica equivalente per il rilevamento dell'RNA del morbillo.

Prelievo di sangue venoso/siero

Il sangue intero venoso verrà prelevato in un tubo semplice e asciutto da pazienti di tutte le età (a meno che non sia pratica corrente ottenere campioni di siero utilizzando il campionamento capillare del tallone nei bambini piccoli presso il sito dello studio). Il campione di sangue intero verrà conservato o centrifugato per facilitare la separazione del siero presso il sito partecipante in preparazione per il trasporto e il test del siero per le IgM del morbillo presso un laboratorio dell'Institut Pasteur de Dakar (IPD), utilizzando sia l'RDT (10 microlitri) che ELISA ( 100 microlitri). Questi sieri possono anche essere sottoposti a test aggiuntivi come parte della routine di sorveglianza, incluso per IgM anti-rosolia e anti-zika.

Prelievo di fluido orale

A meno che non sia idoneo (vedere i criteri di esclusione del fluido orale), un campione di fluido orale verrà prelevato da tutti i partecipanti e aggiunto al mezzo di trasporto del virus (VTM)/tampone, secondo le istruzioni del produttore. Dopo la preparazione del campione, il fluido orale verrà testato in loco per la presenza di IgM utilizzando l'RDT. Il campione liquido residuo verrà conservato e trasportato al laboratorio di riferimento nazionale per il morbillo per la PCR +/- altri test molecolari.

Oltre a valutare le prestazioni RDT con fluido orale, la raccolta di questo campione insieme al siero rafforza lo standard di riferimento rispetto al quale viene valutato il nuovo RDT. Consentirà inoltre di valutare il valore aggiunto dell'analisi molecolare dei ceppi di morbillo circolanti per informare la sorveglianza nazionale e orientare le decisioni di sanità pubblica. Pertanto, se il partecipante non è idoneo per il campionamento del fluido orale ma è fattibile un tampone nasofaringeo, questo verrà invece prelevato. Tuttavia, i campioni di tamponi nasofaringei non verranno applicati all'RDT.

Sangue capillare

A tutti i partecipanti verrà prelevato un campione di sangue capillare utilizzando la tecnica raccomandata dall'Organizzazione mondiale della sanità (OMS). Il sangue capillare (5 microlitri) verrà aggiunto direttamente al tampone del campione secondo la procedura operativa standard/istruzioni del produttore e dopo la diluizione, applicato a un RDT senza indugio. Dopo aver confermato un risultato valido sull'RDT, il sangue capillare diluito residuo verrà scartato.

F. Test diagnostici rapidi

Per ogni test rapido (siero, sangue capillare, fluido orale), i risultati verranno letti e interpretati come positivi o negativi da due operatori indipendenti di laboratorio (per siero) o non di laboratorio (per sangue capillare e fluido orale). Verranno documentate sia l'interpretazione qualitativa che l'intensità delle linee di controllo e di test secondo una scheda di riferimento, insieme alla tempistica della lettura.

Dopo la lettura del risultato, verrà scattata una fotografia e l'RDT utilizzato con sangue capillare o fluido orale sarà essiccato, conservato con essiccante e trasportato all'IPD per ulteriori analisi molecolari.

Il personale riceverà una formazione sull'uso della RDT durante l'implementazione dello studio e riceverà il protocollo e le informazioni sul prodotto/istruzioni per l'uso del produttore.

Queste informazioni includeranno la temperatura di conservazione, il contenuto del kit, la temperatura operativa, il tempo minimo e massimo di incubazione, la stabilità dei prodotti dopo l'apertura, l'attrezzatura aggiuntiva o i materiali di consumo richiesti ma non forniti nel kit e il numero di fasi della procedura.

G. Variabilità inter-lettore

Tutti gli RDT eseguiti saranno letti da un secondo investigatore ei risultati saranno confrontati per valutare la variabilità inter-lettore. Eventuali discrepanze saranno risolte da una terza lettura indipendente da parte di un membro del team di studio qualificato. Il nome del membro del personale che registra ogni risultato RDT sarà documentato. Il gruppo di studio in ciascun sito/laboratorio partecipante sarà addestrato per garantire che ogni lettura sia intrapresa in modo indipendente. L'RDT verrà eseguito e interpretato prima che il risultato ELISA sia noto.

H. Durata dello studio

Lo studio durerà per il tempo necessario per includere la dimensione del campione stimata richiesta (numero minimo di casi sospetti positivi e negativi), con un obiettivo di completamento entro 6 mesi e la possibilità di estenderlo a 9 mesi. Il personale del laboratorio di test di riferimento per la virologia presso l'IPD, che sarà all'oscuro dei risultati RDT, monitorerà il numero di casi positivi e negativi (come da test di riferimento) ogni settimana. Il team dello studio esaminerà l'avanzamento complessivo del reclutamento su base settimanale, con il contributo del team del laboratorio di riferimento ogni due mesi.

Dato l'elevato numero di casi negativi richiesti e per evitare inutili ritardi nelle potenziali presentazioni di approvazione normativa, sarà condotta una revisione intermedia dei risultati da parte del team di dati e dei ricercatori dello studio quando saranno stati reclutati 172 casi positivi. Gli investigatori valuteranno se è già stata raggiunta una precisione sufficiente intorno alla stima per la specificità ai fini dell'approvazione normativa e se è necessario un reclutamento aggiuntivo.

I. Questionario sulla facilità d'uso

All'inizio (dopo la formazione) e alla fine dello studio, a tutto il personale responsabile dell'esecuzione degli RDT verrà chiesto di rispondere a un breve questionario di facile utilizzo. Le domande cercheranno di catturare la facilità d'uso percepita dell'RDT, compresa la chiarezza delle istruzioni per l'uso e l'etichettatura della confezione, la procedura di campionamento clinico, il tempo di lettura, il volume del campione da utilizzare, la facilità/difficoltà dei passaggi per eseguire il test (compresa la preparazione e l'applicazione del campione), la facilità di lettura e interpretazione dei risultati e la biosicurezza percepita.

J. Inserimento dati

I dati saranno raccolti utilizzando un modulo elettronico di segnalazione del caso (eCRF) prima della raccolta del campione e corrisponderanno ai dati raccolti sul modulo cartaceo obbligatorio per la sorveglianza nazionale. I dati verranno inseriti in TERANGA Mobile, il sistema di sorveglianza sicura e di raccolta dei dati clinici dell'Institut Pasteur de Dakar, sul quale il team dello studio verrà addestrato durante l'implementazione dello studio. Il facilitatore dello studio in ogni sede avrà la responsabilità di garantire che la eCRF sia correttamente completata e salvata. Oltre al colloquio con il paziente o con il caregiver, ulteriori informazioni possono essere integrate attraverso il modulo di sorveglianza cartaceo nazionale o i registri delle vaccinazioni (ad esempio per ottenere le date delle vaccinazioni).

K. Controllo qualità (monitoraggio) e assicurazione (audit)

Il controllo di qualità verrà eseguito in ogni fase dell'elaborazione dei dati per garantire che tutti i dati siano affidabili e siano stati elaborati correttamente. I siti dello studio saranno responsabili del controllo regolare della qualità dei dati che generano, incluso se tutti i pazienti inclusi hanno moduli di consenso e sono stati sottoposti a tutte le procedure di campionamento richieste.

IPD condurrà il monitoraggio basato sul rischio dello studio e i relativi controlli di qualità come descritto nel piano di monitoraggio dettagliato. I monitor dello studio esamineranno e verificheranno i dati di origine per confermare che i dati inseriti siano accurati e completi e possano essere verificati nei documenti di origine; che la sicurezza ei diritti dei partecipanti siano tutelati; e che lo studio è condotto in conformità con l'attuale protocollo autorizzato, Good Clinical Practice (GCP) e tutti i requisiti normativi applicabili. Il piano di monitoraggio descriverà in dettaglio la frequenza delle visite di monitoraggio e degli audit presso il sito dello studio.