Sahramilisä Stargardtin taudissa (STARSAF02)

Tutkimussuunnitelman tausta Stargardtin tauti (STGD/FFM) on yleisin perinnöllinen resessiivinen makuladystrofia (Blacharski, 1988), jolle on tunnusomaista nuoresta nuoreen aikuiseen alkava, keskusnäön heikkeneminen, etenevä makulan ja verkkokalvon pigmenttiepiteelin (RPE) molemminpuolinen atrofia. usein esiintyy oransseja/keltaisia ​​pilkkuja makulan ympärille ja/tai verkkokalvon keskiosaan (Noble ja Carr, 1971). Kliinisesti samanlainen verkkokalvon häiriö, fundus flavimaculatus (FFM), ilmaantuu usein myöhemmällä iällä ja etenee hitaammin. On ehdotettu ja osoitettu (Allikmets et ai., 1997), että STGD ja FFM edustavat alleelisia häiriöitä. Mutaatioiden geenissä, joka koodaa ATP:tä sitovaa kasetti (ABC) kuljettajaa (ABCR), joka kartoitetaan kromosomiin 1p13-p21, on havaittu olevan vastuussa STGD:stä (Allikmets et ai., 1997). ABCR-geeni ilmentyy yksinomaan ja korkeilla tasoilla verkkokalvossa sekä sauva- että kartiovaloreseptoreissa (Molday et ai., 2000). Weng et al.:n tuore tutkimus. (1999), jotka tutkivat fotoreseptorin rappeutumisen taustalla olevia molekyylimekanismeja ABCR-knock-out -hiirissä, ehdottivat, että fotoreseptorit kuolevat lipofussiinin kertymisen ja RPE:n tukiroolin menettämisen seurauksena RPE:n "myrkytyksestä". Fosfatydietanoliamiinin ja fotoaktivoidusta rodopsiinista vapautuvan all-trans-verkkokalvon kondensaatiosta muodostuvan yhdisteen A2E kerääntyminen RPE-soluihin (Sparrow et al., 2000) johtaa luultavasti in vivo sinisten valojen lisääntyneeseen absorptioon ja valotoksisuuteen. RPE-soluvaurio. Mutaatioiden aiheuttama sairaus voi vaikuttaa sekä sauva- että kartiovaloreseptoreihin suhteellisen varhaisessa vaiheessa. In vitro -tutkimukset (Sun ja Nathans, 2001) osoittivat myös, että ABCR itsessään on tehokas all-trans-verkkokalvovälitteisen valohapetusvaurion kohde.

Kliinisesti monet raportit ovat dokumentoineet sekä makula- että perifeeristen kartioiden sekä sauvojen epänormaalin toiminnan STGD/FFM:ssä (Moloney et ai., 1983; Lachapelle et ai., 1990). On myös näyttöä (Lois et al., 2001), että STGD/FFM voi liittyä verkkokalvon toimintahäiriöiden erilaisiin malleihin, joihin liittyy selektiivinen makulan toiminta, tai laajempi toimintahäiriö, johon liittyy kartio- ja/tai sauvatoiminto, mikä osoittaa suvunsisäistä johdonmukaisuutta. On myös kuvattu tyypillisiä pimeyden mukautumisen poikkeavuuksia (Aleman et ai., 1999), joihin liittyy viivästynyt valkaisun jälkeinen palautuminen, sopeutumiskäyrän viimeisen haaran perusviivaherkkyyteen. Samanlaisia ​​poikkeavuuksia sauvan tumma-sopeutumisessa on hiljattain löydetty hiiristä, jotka ovat heterotsygoottisia ABCR-geenin nollamutaation suhteen (Mata et ai., 2001). Kliiniset todisteet (Parisi et al., 2002) osoittavat, että myös kartion herkkyyden palautuminen valkaisun jälkeen on vakavasti heikentynyt STG/FF:ssä, mikä viittaa siihen, että syvästi muuttunut retinoidien kierrätys, joka johtaa fotooksidatiivisiin vaurioihin, tapahtuu erityisesti kartiovaloreseptoreissa.

Viimeaikaiset kokeelliset löydökset (Maccarone et al., 2008) osoittavat, että Crocus Sativus -lajin emistä saadulla sahramilla voi olla rooli verkkokalvon hermostoa suojaavana aineena oksidatiivisia vaurioita vastaan. Todellakin, sahramin on osoitettu suojaavan sekä morfologian että toiminnan suhteen valon aiheuttaman fotoreseptorin rappeutumisen rottamallissa. Tässä mallissa solukuoleman uskotaan johtuvan oksidatiivisesta stressistä, jonka aiheuttaa pitkäaikainen happijännityksen lisääntyminen ja valohapetus. Sahrami on houkutteleva testattava kandidaatti, koska Crocus sativusin leimakkeet sisältävät biologisesti korkeita pitoisuuksia mielenkiintoisia kemiallisia yhdisteitä, kuten krosiinia, kroketiinia (Giaccio, 2004), joiden useat C=C-sidokset antavat antioksidanttipotentiaalin. Puhumattakaan siitä, että sen vuosisatoja jatkunut käyttö mausteena ilman tunnettuja haittavaikutuksia lisää luottamusta turvalliseen käytettävyyteen. Lisäksi on äskettäin raportoitu (Ochiai et al., 2007), että krosiinit pystyvät aktivoimaan aineenvaihduntareittejä suojellakseen soluja apoptoosilta ja vähentäen valon aiheuttamaa kuolemaa eristetyissä fotoreseptoreissa (Laabich et al., 2006), kun taas kroketiini (Giaccio) , 2004) lisää hapen diffuusiota nesteiden, kuten plasman, läpi. Ottaen huomioon fotoreseptoreiden korkea aineenvaihduntanopeus, hapen saatavuus voi olla kriittinen tekijä niiden suojelemisessa kuolemalta. Lisäksi Kanakis et ai. (Kanakis et al, 2007) osoittivat, että antioksidanttisten flavonoidien metaboliitit sitoutuvat suoraan DNA:han ja indusoivat sen osittaisen konformaation beeta-DNA:ksi ja suojaavat siten solua vaurioilta. Näiden havaintojen perusteella käy selväksi, että sahramiuute ei toimi yksinkertaisena antioksidanttina. Sahramin komponenttien omituiset ominaisuudet tukevat hypoteesia hyvin erilaisista toimintatavoista antioksidanttiaktiivisuudesta geeniekspression suoraan hallintaan. Nämä komponentit voivat toimia ihmisissä suojaavina aineina ikääntyvän verkkokalvon oksidatiivisia vaurioita vastaan, ja ne voivat korjata STG/FF:n varhaisia ​​fotoreseptorivaurioita, joiden sairauden patofysiologia on kokeellisissa tutkimuksissa (Mata et al, 2001) liitetty valoon. aiheutti ulkoisen verkkokalvon oksidatiivisen vaurion. STG/FF-silmissä taudin varhaisessa vaiheessa normaali määrä kartiovaloreseptoreja säilyy osittain, vaikka solut saattavat olla toimintahäiriöitä. Saffronin pelastavan vaikutuksen seurauksena vaurioituneiden mutta elävien fotoreseptorien joukko voi lisätä sen vastetta, mikä johtaa verkkokalvon herkkyyden paranemiseen.

Tämän projektin tavoitteena on arvioida, onko sahramilisällä hyödyllistä hermostoa suojaavaa vaikutusta vaurioituneisiin verkkokalvoihin ABCR-mutaatio-STD/FF:n seurauksena.

Kliinisen tutkimussuunnitelman potilaat Tähän tutkimukseen otetaan mukaan 30 STG/FF-potilaan ryhmä (14 miestä, 16 naista, ikähaarukka: 15-68 vuotta). Potilaat täyttävät seuraavat sisällyttämiskriteerit: 1. Makulaarinen ja perifeerinen verkkokalvon rappeuma, jossa on tyypillisiä silmänpohjan vaurioita (verkkokalvon pilkkuja) ja kartiomainen verkkokalvon toimintahäiriö, joka on määritetty standardi Ganzfeldin elektroretinografialla ja pimeään mukautetulla silmänpohjan perimetrialla, ja klassinen silmänpohjan ulkonäkö , 2. Suhteellisen säilynyt keskusverkkokalvon toiminta (Goldmann V/4e:n näkökenttä > 30°, korjattu EDTRS-näöntarkkuus > 20/80) ja vakaa keskuskiinnitys Visuskopella määritettynä, 3. Tunnettu genotyyppi tai tutkittava genotyyppi, 4. Vähintään neljä kliinistä seurantatutkimusta viimeisen kolmen vuoden aikana, 5. Ei lainkaan tai vain vähän silmämedian sameutta, 6. Ei samanaikaista silmää (esim. glaukooma, amblyopia) tai systeemiset sairaudet. Tietoinen suostumus kaikille potilaille ja kontrolleille saadaan sen jälkeen, kun tutkimuksen tavoitteet ja menettelytavat on selitetty yksityiskohtaisesti.

Hoito- ja testausaikataulu Potilaat jaetaan kahteen ryhmään: 15 potilasta hoidetaan suun kautta annettavalla sahramiannoksella 90 päivän ajan, ja 15 potilasta saa lumelääkityksen samana ajanjaksona. 90 päivän jakson lopussa potilaat siirretään ja heille määrätään lumelääke tai sahramilisä. Kaikille potilaille suoritetaan kliininen tutkimus, mukaan lukien näöntarkkuuden testaus kalibroidulla standardinmukaisella Snellen-kaaviolla ja silmänpohjan tutkimus suoralla ja epäsuoralla oftalmoskopialla sekä FERG-testi tutkimuksen alkaessa (perustaso) ja 180 päivän hoidon tai lumelääkkeen jälkeen. Kaikissa tapauksissa noudattaminen arvioidaan puhelinhaastattelun ja pillerimäärien perusteella. Haitalliset sivuvaikutukset raportoidaan.

Elektrofysiologiset menetelmät FERG-testaus suoritetaan aiemmin julkaistun tekniikan mukaisesti (Falsini et al., 2000). Lyhyesti sanottuna ERG:t saadaan aikaan pyöreän yhtenäisen kentän (18° halkaisija, 80 cd/m2 keskiluminanssi, hallitseva aallonpituus: 630 nm) LED-generoidulla sinimuotoisella luminanssimodulaatiolla, joka esitetään taajuudella 41 Hz ganzfeld-malja, joka on valaistu samalla keskimääräisellä luminanssilla kuin ärsyke. Sarja FERG-vasteita kerätään eri modulaatiosyvyyksillä [kvantifioitu Michelsonin luminanssikontrastikaavalla: 100%*(Lmax -Lmin)/(Lmax +Lmin), jossa Lmax ja Lmin ovat vastaavasti maksimi- ja minimiluminanssi] välillä 16,5 % ja 93,8 % 0,1 - 0,3 logaritmiyksikön askelin. FERG-signaalit hankitaan peräkkäin kuudelle modulaatiosyvyyden arvolle välillä 16,5 - 93,5 %, jotka esitetään kasvavassa järjestyksessä. Jokaisen potilaan FERG-logiamplitudit piirretään logarin modulaatiosyvyyden funktiona. Tuloksena olevan funktion kaltevuus määritetään lineaarisella regressiolla. Samasta regressioviivasta FERG-kynnys arvioidaan logaritmissyvyyden arvosta, jolloin saadaan kriteeriamplitudi, joka vastaa S/N-suhdetta 3.

Psykofysiikka Inkrementtikynnystekniikkaa käytetään arvioimaan kartiojärjestelmän herkkyyden palautumista valkaisualtistuksen jälkeen. Psykofyysinen kynnys määritetään paracentraalisten näkökentän paikoissa, joissa näköherkkyys säilyy, esittämällä 0,5 sekunnin vilkkuva valo valoon mukautuvalle taustalle 20 cd/m². Perustason arvioinnin jälkeen välähdysvalon kynnysvoimakkuus mitataan ja piirretään ajan funktiona 30 sekunnin altistuksen jälkeen mukautuvalle valolle (toimitettu Maxwellin-näkymässä kalibroidun epäsuoran oftalmoskoopin avulla), jonka intensiteetin arvioitu valkaisuaine on noin 30 % kartiofotopigmentistä. Tuloksena oleva dynaaminen palautumisfunktio, joka on sovitettu eksponentiaalisella funktiolla, kuvaa fotooptisen järjestelmän herkkyyden palautumista valkaisun jälkeen ja heijastaa joko vapaan opsiinin inaktivoitumisen tai fotopigmenttisynteesin nopeutta. Tietokoneohjattu järjestelmä, jossa käytetään kaupallisesti saatavaa laitetta, on kehitetty (Fadda et ai., 2001) kartiojärjestelmän valkaisun mukautumisen mittaamiseksi.

Tilastollinen analyysi Tämän tutkimuksen potilaiden otoskokoarviot perustuvat aikaisempiin tutkimuksiin (Parisi et al., 2001), joissa FERG-parametrien koehenkilöiden välinen ja sisäinen vaihtelu (ilmaistuna datana SD) määritettiin STG/FF-potilailla. Olettaen, että koehenkilöiden väliset ja sisäiset SD:t FERG:n amplitudissa ja vaiheessa ovat 0,1 logmicroV ja 20 astetta, sekä Saffronille että lumelääkettä saaneiden potilaiden otoskoot antavat 80 %:n tehon, kun alfa = 0,05, havaitsemiseksi kummassakin. ryhmittele testi-uudelleentestausero (eli 90 päivää miinus perusviivatesti) 0,1 logmicroV (SD: 0,1) ja 30 astetta (SD: 20) amplitudissa ja vaiheessa, vastaavasti. Tulokset analysoidaan monimuuttujatilastoilla (monimuuttujavarianssianalyysi toistetuille mittauksille, MANOVA). Kaikissa analyyseissä p < 0,05 katsotaan tilastollisesti merkitseväksi.