Sáfrány-kiegészítés Stargardt-kórban (STARSAF02)

A kutatási terv háttere A Stargardt-kór (STGD/FFM) a leggyakoribb örökletes recesszív makuladystrophia (Blacharski, 1988), amelyet fiatalkortól fiatal felnőttkorig terjedő kezdet, központi látáskárosodás, a makula és a retina pigment epitélium (RPE) progresszív kétoldali atrófiája jellemez. narancssárga/sárga foltok gyakori megjelenése a makula körül és/vagy a retina középső perifériáján (Noble és Carr, 1971). Egy klinikailag hasonló retina rendellenesség, a fundus flavimaculatus (FFM) gyakran későbbi korban jelentkezik és lassabb progressziót mutat. Azt javasolták és bizonyították (Allikmets et al., 1997), hogy az STGD és az FFM allél rendellenességeket jelent. Az 1p13-p21 kromoszómához illeszkedő ATP-kötő kazettás (ABC) transzportert (ABCR) kódoló gén mutációi felelősek az STGD-ért (Allikmets et al., 1997). Az ABCR gén kizárólag és magas szinten expresszálódik a retinában, mind a rúd, mind a kúp fotoreceptorokban (Molday et al., 2000). Weng et al. (1999), a fotoreceptor degeneráció hátterében álló molekuláris mechanizmusokat vizsgálva ABCR knock-out egerekben, azt javasolták, hogy a fotoreceptorok elpusztuljanak az RPE lipofuscin felhalmozódása és az RPE támogató szerepének elvesztése miatti „mérgezése” következtében. A foszfatidil-etanol-amin és a fotoaktivált rodopszinból felszabaduló all-trans-retinális kondenzációjából képződő A2E vegyület felhalmozódása az RPE sejtekben (Sparrow és mtsai, 2000) valószínűleg a kék fény fokozott abszorpciójához és fototoxikus hatáshoz vezet in vivo RPE sejtkárosodás. A mutáció által kiváltott betegség a rúd és a kúp fotoreceptorokat egyaránt érintheti, viszonylag korai stádiumban. In vitro vizsgálatok (Sun és Nathans, 2001) azt is kimutatták, hogy maga az ABCR hatékony célpontja a teljes transz-retinális közvetített fotooxidatív károsodásnak.

Klinikailag számos jelentés dokumentálta mind a makula, mind a perifériás kúpok, valamint a rudak rendellenes működését az STGD/FFM-ben (Moloney és mtsai, 1983; Lachapelle és mtsai, 1990). Arra is van bizonyíték (Lois et al., 2001), hogy az STGD/FFM összefüggésbe hozható a retina diszfunkció különböző mintázataival, a makulafunkció szelektív érintettségével, vagy szélesebb körben elterjedt diszfunkcióval, amely a kúp- és/vagy rúdfunkciót is magában foglalja, családon belüli konzisztenciát mutatva. Leírták a sötét adaptáció jellegzetes rendellenességeit is (Aleman és mtsai, 1999), amelyek az adaptációs görbe utolsó ágának alapvonali érzékenységéhez képest késleltetett fehérítés utáni felépüléssel járnak. Hasonló rendellenességeket találtak a pálcás sötét adaptációban a közelmúltban olyan egerekben, amelyek heterozigóta az ABCR gén nullmutációja miatt (Mata és mtsai, 2001). Klinikai bizonyítékok (Parisi et al., 2002) azt mutatják, hogy a fehérítés utáni kúpérzékenység helyreállítása is súlyosan károsodik az STG/FF-ben, ami arra utal, hogy a mélyen megváltozott retinoid-újrahasznosítás, ami fotooxidatív károsodáshoz vezet, kifejezetten a kúp fotoreceptorokban fordul elő.

A legújabb kísérleti eredmények (Maccarone et al., 2008) azt mutatják, hogy a Crocus Sativus bibéiből származó sáfrány szerepet játszhat a retina neuroprotektánsaként az oxidatív károsodásokkal szemben. Valójában a sáfrányról bebizonyosodott, hogy mind a morfológiája, mind a funkciója szempontjából védelmet nyújt a fény által kiváltott fotoreceptor-degeneráció patkánymodelljében. Ebben a modellben úgy gondolják, hogy a sejthalál az oxigénfeszültség és a fotooxidáció hosszan tartó növekedése által kiváltott oxidatív stressz következménye. A sáfrány vonzó jelölt a tesztelésre, mivel a Crocus sativus stigmái biológiailag magas koncentrációban tartalmaznak érdekes kémiai vegyületeket, beleértve a krocint, a krocetint (Giaccio, 2004), amelyek többszörös C=C kötései antioxidáns potenciált biztosítanak. Arról nem is beszélve, hogy több évszázados fűszerként való használata, ismert káros hatások nélkül, növeli a biztonságos alkalmazhatóságba vetett bizalmat. Ezenkívül a közelmúltban beszámoltak arról (Ochiai és mtsai, 2007), hogy a krocinok képesek aktiválni az anyagcsere utakat, hogy megvédjék a sejteket az apoptózistól és csökkentsék a fény által kiváltott halált izolált fotoreceptorokban (Laabich és mtsai, 2006), míg a krocetin (Giaccio) , 2004) növeli az oxigén diffúzióját folyadékokon, például plazmán keresztül. Figyelembe véve a fotoreceptorok magas metabolikus sebességét, az oxigén elérhetősége kritikus tényező lehet a haláltól való megvédésükben. Ezenkívül Kanakis et al. (Kanakis és mtsai, 2007) kimutatták, hogy az antioxidáns flavonoidok metabolitjai közvetlenül kötődnek a DNS-hez, és indukálják annak részleges konformációját béta-DNS-vé, ezáltal megvédik a sejtet a károsodástól. Ezen megfigyelések alapján világossá válik, hogy a sáfránykivonat nem működik egyszerű antioxidánsként. A sáfrány komponenseinek sajátos jellemzői alátámasztják azt a hipotézist, hogy nagyon különböző hatásmódok jelennek meg az antioxidáns hatástól a génexpresszió közvetlen szabályozásáig. Ezek a komponensek az emberben védőszerként működhetnek az öregedő retina oxidatív károsodásával szemben, és helyreállíthatják az STG/FF-hez kapcsolódó korai fotoreceptor-károsodást, amelynek betegségének patofiziológiáját kísérleti vizsgálatok (Mata és mtsai, 2001) a fény- oxidatív károsodást okoz a külső retinában. STG/FF szemekben a betegség korai stádiumában a kúpos fotoreceptorok normál száma részben megmarad, bár a sejtek működésképtelenné válhatnak. A Sáfrány megmentő hatásának eredményeként a sérült, de életképes fotoreceptorok készlete fokozhatja a válaszreakciót, ami javítja a retina érzékenységét.

Jelen projekt célja annak felmérése, hogy a sáfrány kiegészítésnek van-e kedvező neuroprotektív hatása az ABCR mutáció-STD/FF következtében károsodott retinára.

Klinikai protokollban részt vevő betegek Ebben a vizsgálatban 30 STG/FF-betegből álló csoport (14 férfi, 16 nő, életkor: 15-68 év) fog részt venni. A betegeknek a következő felvételi kritériumoknak kell megfelelniük: 1. Macula és perifériás retina degeneráció tipikus szemfenéki léziókkal (retina foltokkal) és a retina diszfunkciójának kúp alakú mintázatával, a standard Ganzfeld elektroretinográfiával és a sötéthez adaptált szemfenék perimetriával, valamint a szemfenék klasszikus megjelenésével. , 2. Viszonylag megőrzött központi retinafunkció (Goldmann V/4e látótér > 30°, korrigált EDTRS látásélesség > 20/80) és stabil centrális rögzítés Visuskope által meghatározott módon, 3. Ismert genotípus vagy vizsgált genotípus, 4. Legalább négy követéses klinikai vizsgálat az elmúlt három évben, 5. Nincs vagy minimális a szemközeg átlátszatlansága, 6. Nincs egyidejű okuláris (pl. glaukóma, amblyopia) vagy szisztémás betegségek. A vizsgálat céljainak és eljárásainak részletes ismertetése után minden beteg és kontrollcsoport tájékozott beleegyezését kérik.

Kezelési és vizsgálati ütemterv A betegeket két csoportra osztják: 15 beteget napi adag Sáfrány szájon át történő kiegészítésével kezelnek 90 napon keresztül, és 15 beteget ugyanebben az időszakban placebo-kezelésben. A 90 napos periódus végén a betegeket áthúzzák, és placebót vagy sáfrány-kiegészítést kapnak. Minden betegnél klinikai vizsgálatot kell végezni, beleértve a kalibrált standard Snellen-diagrammal végzett látásélesség-tesztet és a szemfenék direkt és indirekt szemészeti vizsgálatát, valamint a FERG-tesztet a vizsgálat megkezdésekor (alapvonal) és 180 napos kezelés vagy placebo után. A megfelelést minden esetben telefonos interjú és tablettaszámlálás alapján ítélik meg. A mellékhatásokról beszámolunk.

Elektrofiziológiai módszerek A FERG-tesztelés egy korábban publikált technika szerint történik (Falsini et al., 2000). Röviden, az ERG-ket egy körkörös egyenletes tér (18° átmérőjű, 80 cd/m2 átlagos fénysűrűség, domináns hullámhossz: 630 nm) LED által generált szinuszos fénysűrűség modulációja váltja ki, amely 41 Hz-es frekvencián jelenik meg a hátoldalon. egy ganzfeld-tál, amelyet az ingerrel azonos átlagos fénysűrűséggel világítanak meg. Egy sor FERG-választ gyűjtünk össze különböző modulációs mélységekben [a Michelson-féle fénysűrűség-kontraszt képlettel számszerűsítve: 100%*(Lmax -Lmin)/(Lmax +Lmin), ahol Lmax és Lmin a maximális, illetve a minimális fénysűrűség] 16,5 között % és 93,8% 0,1-0,3 log egység lépésekben. A FERG jelek szekvenciában kerülnek begyűjtésre hat, 16,5 és 93,5% közötti modulációs mélységi értékhez, növekvő sorrendben. Minden egyes páciens FERG log amplitúdója a log modulációs mélység függvényében kerül ábrázolásra. Az eredményül kapott függvény meredeksége lineáris regresszióval lesz meghatározva. Ugyanebből a regressziós egyenesből a FERG küszöbértéket a log modulációs mélység értékéből becsüljük meg, ami egy 3-as S/N aránynak megfelelő kritérium amplitúdót ad.

Pszichofizika Egy növekményes küszöbtechnikát kell alkalmazni a kúprendszer érzékenységének helyreállítása a fehérítés után. A pszichofizikai küszöb meghatározása a paracentrális látótér helyein megőrzött látásérzékenységgel történik, 0,5 mp-es villogó fény bemutatásával 20 cd/nm fényadaptáló háttéren. Az alapvonal értékelését követően megmérik a felvillanó fény küszöbintenzitását, és az idő függvényében ábrázolják, 30 másodpercig alkalmazkodó fénnyel való expozíciót követően (a Maxwell-nézetben kalibrált indirekt ophthalmoszkóppal), amelynek becsült intenzitása fehérítő körülbelül 30 a kúp fotopigment %-a. Az eredményül kapott dinamikus helyreállítási függvény, amely egy exponenciális függvénnyel van felszerelve, leírja a fotopikus rendszer érzékenységének helyreállítását a fehérítés után, és vagy a szabad opszin inaktiválásának sebességét vagy a fotopigment szintézist tükrözi. A kúpos rendszer fehérítési adaptációjának mérésére egy számítógéppel vezérelt rendszert fejlesztettek ki kereskedelmi forgalomban kapható berendezéssel (Fadda et al., 2001).

Statisztikai elemzés A betegek mintanagyságának becslése ebben a vizsgálatban korábbi vizsgálatokon (Parisi et al., 2001) alapul, ahol a FERG-paraméterek alanyok közötti és azon belüli variabilitását (SD-ként kifejezve) STG/FF-betegeknél határozták meg. Feltételezve, hogy az alanyok közötti és az alanyokon belüli SD-k FERG amplitúdója és fázisa 0,1 logmicroV, illetve 20 fok, a betegek mintanagysága mind a Saffronhoz, mind a placebóhoz 80%-os teljesítményt ad alfa = 0,05 mellett az egyes esetekben történő kimutatáshoz. csoportosítsa a teszt-újrateszt különbséget (azaz 90 nap mínusz alapvonal teszt) 0,1 logmicroV (SD: 0,1) és 30 fokos (SD: 20) amplitúdó és fázis között. Az eredményeket többváltozós statisztika segítségével elemzik (multivariate varianciaanalízis ismételt mérésekhez, MANOVA). Az összes elemzésben a p < 0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.