"Amyliinitasojen pitkittäinen analyysi migreenipotilailla, jotka saavat anti-CGRP/CGRPr-hoitoa"

Vaikka kalsitoniinigeeniin liittyvän peptidin (CGRP) ja sen roolin löytäminen migreenissä on tarjonnut tärkeitä näkemyksiä sairaudesta ja tarjoaa tällä hetkellä tehokkaan farmakologisen kohteen monille potilaille, se ei pysty selittämään tämän monimutkaisen häiriön vaihtelua (Ashina et al. 2021). Ei ole yllättävää, että jotkut potilaat eivät hyödy anti-CGRP-hoitojen (Caronna et al. 2024), gepantien ja/tai monoklonaalisten vasta-aineiden (mAb) käytöstä, mikä herättää kysymyksen siitä, mitä muuta meiltä puuttuu migreenin patofysiologiassa ja onko muita tavoitteet voisivat täydentää nykyisiä hoitovaihtoehtoja (Rees et al. 2022).

Tässä yhteydessä erilaiset tutkimukset ovat osoittaneet monenlaisia ​​ehdokkaita, vaikka tulokset ovat edelleen epäselviä (Silvestro ym. 2023). Yksi lupaavimmista ehdokkaista on amyliini, 37 aminohapon peptidi (Hay 2017), joka kuuluu kalsitoniiniperheeseen, jossa myös CGRP löytyy. Itse asiassa CGRP:n ja amyliinin välisen suhteen olemassaolo on hyvin dokumentoitu, koska näillä kahdella molekyylillä on jonkin verran epäselvyyttä toistensa reseptorien kanssa. Tarkemmin sanottuna amyliinireseptorilla on sama affiniteetti kanoniseen ligandiinsa (CGRPr) kuin CGRP:hen (Hay et al. 2018). CGRP:n ja amyliinin välisen signaalin päällekkäisyyden lisäksi on joitain muita piirteitä, jotka osoittavat tämän endokriinisen peptidin mahdollisen vaikutuksen migreeniin. Sekä ligandin että reseptorin ilmentyminen, vaikka sitä esiintyy ensisijaisesti haimassa, jossa amyliini kehittää päätehtävänsä glukoosia alentavana hormonina (Lutz 2005), ei rajoitu siihen. Amyliini ja sen reseptori ilmentyvät myös migreeniin liittyvissä paikoissa, mukaan lukien sensoriset neuronit (Mulder et al. 1995) ja kolmoissuonijärjestelmä (Hendrikse et al. 2019). Lisäksi amyliini osallistuu myös kivun käsittelyyn, joka on migreenin patofysiologian keskeinen piirre, vaikka sen tarkka rooli kipumekanismeissa on huonosti ymmärretty (Hay et al. 2017). Kaiken kaikkiaan tällä hetkellä saamamme tieto amyliinista, sen päällekkäisestä signaloinnista, sijainneista ja toiminnoista osoittaa selvästi, että molekyylin tai sen reseptorin vaikutus on jossain määrin migreenikohtauksen patofysiologiassa, vaikka sen tarkka osallisuus on edelleen kuvaamaton ja sillä on edelleen paljon kysymyksiä jäljellä.

Muutaman viime vuoden aikana on pyritty edistämään tietämystämme amyliinireseptorista riippuvien reittien merkityksestä migreenissä (Russo & Hay 2023). Provokaatiotutkimukset hiirillä tukevat peptidin roolia ihon herkkyyden ja valonarkuuden aiheuttajana (De Logu et al. 2019; Ghanizada et al. 2021), mikä todistaa periaatteen, että amyliinillä ja CGRP:llä voi olla päällekkäisiä toiminnallisia rooleja. Kun keskitymme ihmisiin, tanskalainen kliininen tutkimus osoitti, että kliinisessä käytännössä diabeteksen hoidossa käytettävän amyliinireseptorin agonistin pramlintide infuusio aiheutti välittömän päänsäryn ja migreenin kaltaisen päänsäryn potilasryhmässä, jolla oli diagnosoitu migreeni ilman auraa. hyvin samankaltaisessa suhteessa ja ominaisuuksiltaan kuin ne, jotka syntyvät CGRP:n infuusiolla samoissa koehenkilöissä (Ghanizada et al. 2021). Se osoitti myös, että vaikka kolmasosa potilaista, jotka saivat migreenin kaltaisia ​​kohtauksia, teki niin molemmilla molekyyleillä, merkittävä osa oli herkkiä vain joko amyliinille tai CGRP:lle, mutta tämä havainto vaatii lisätutkimuksia.

Näitä tietoja täydentää tapauskontrollitutkimus, jossa tutkittiin amyliinin ja CGRP:n interiktaalisia tasoja potilasryhmässä, jolla oli episodinen tai krooninen migreeni (Irimia et al. 2021). Tutkimuksessa havaittiin, että molemmat peptidipitoisuudet kasvoivat vain kroonista migreeniä sairastavilla potilailla verrattuna kontrolleihin ja episodista migreeniä sairastaviin potilaisiin. Vaikka tämän tutkimuksen päätavoitteena oli arvioida amyliinin käyttökelpoisuutta kroonisen migreenin biomarkkerina, se herätti kysymyksen, voisiko amyliinillä olla roolia migreenin kronistumisessa, samoin kuin CGRP:n kanssa on oletettu (Torres-Ferrús et al. 2023). Toistaiseksi ei ole olemassa mitään lisätutkimusta, joka olisi vahvistanut/kiistänyt nämä havainnot, joten niiden johtopäätökset tulee tehdä huolellisesti.

Lopuksi meillä on todisteita tutkimuksista, joissa arvioidaan vapaaseen ligandiin tai CGRP:hen kohdistuvien mAb:iden vaikutusta. Todelliset sanatiedot paljastavat, että näillä kahdella eri lähestymistavalla on lähes identtinen tehokkuusaste (Haghdoost et al. 2023). Tämä tuli alun perin yllätyksenä, koska näiden terapeuttisten aineiden erilainen kohdentaminen saattoi tarjota erilaisia ​​tulosprosentteja. Itse CGRP:n estäminen vaikuttaa sekä kanoniseen reseptoriin että myös amyliinireseptoriin, jonka signalointi riippuisi nyt yksinomaan amyliinista itsestään. Toisaalta CGRP:n klassiseen reseptoriin kohdistaminen mahdollistaisi teoriassa edelleen ligandin vuorovaikutuksen amyliinireseptorin kanssa, vaikka viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että erenumabi on vuorovaikutuksessa myös tämän reseptorin kanssa, mutta vähemmän selektiivisyydellä kuin CGRPr:n kanssa (Garelja). et ai. 2024). Kysymys siitä, onko tällä äskettäin kuvatulla vuorovaikutuksella merkittävä vaikutus amyliinireseptorin signalointiin, on edelleen mysteeri. Lisäksi useissa tutkimuksissa on arvioitu CGRP:n pitoisuuksia kroonisessa migreenissä mAb-hoitojen aikana (Alpuente et al. 2022; Raffaelli et al. 2023), ja se on osoittanut yhteyden alfa-CGRP:n korkeampien interictaalisten peruspitoisuuksien ja alfa-CGRP:n välillä. taipumus saada parempi vaste hoitoihin niiden vaikutusmekanismista riippumatta (Alpuente ym. 2022; Gárate et al. 2023), mutta CGRP-tasoihin liittyvää selitystä puuttuu, miksi lähes puolet potilaat eivät hyödy lääkkeestä. Lopuksi, kaikilla potilailla ei ole kohonneita CGRP-tasoja (Gárate et al. 2024), kuten löydettyjen tutkimusten tietojen suuri hajonta osoittaa, ja kun kaikki tiedot lasketaan yhteen, uskottava selitys olisi, että jotkin migreenikohtaukset, jos ei itse migreenitila, se voi olla CGRP-riippumaton joillakin potilailla ja siten riippuvainen muista molekyyleistä.

Yhteenvetona voidaan todeta, että amyliini on CGRP:n kanssa päällekkäisten ominaisuuksiensa ja äskettäin julkaistujen tietojen vuoksi yksi lupaavimmista ehdokkaista tulla toiseksi molekyyliksi, joka pystyy selittämään migreenin heterogeenisyyden. Paljon tietoa on kuitenkin vielä ymmärrettävä, ennen kuin se mahdollisesti tarjoaa uuden terapeuttisen kohdevaihtoehdon tai toimii biomarkkerina tälle sairaudelle. Tämä prosessi vaatii epäilemättä tutkimusta, koska se on ainoa tapa laajentaa tietämystämme ja saavuttaa onnistunut amyliinin käännös penkiltä klinikalle.

ERITYISET TAVOITTEET JA HYPOTEESI

Erityistavoitteemme ovat seuraavat:

Arvioi seerumin amyliinin välissä kiertävät tasot anti-CGRP/CGRPr-mAb-hoidon yhteydessä.

Analysoi näiden pitoisuuksien kehitys ensimmäisen 6 kuukauden hoidon jälkeen.

Arvioi pitoisuuksien mahdollista korrelaatiota potilaidemme kliinisten parametrien kanssa.

Vertaa tuloksia perustason ja 6 kuukauden kuluttua hoidon aloittamisesta kontrolliryhmän kanssa.

Oletimme, että amyliinin perustasot ovat kohonneet verrattuna kontrolliryhmään, kuten aiemmin on kuvattu, että nämä pitoisuudet vaihtelevat 6 kuukauden hoidon jälkeen, nämä pitoisuudet vaihtelevat ja niiden kehitys korreloi kliinisten ja/tai vastemuuttujien kanssa.

MENETELMÄT

Tämä on prospektiivinen, yksikeskinen, poikkileikkaus, pilottitutkimus.

Ryhmän riittävyys

Yliopistosairaalan Marqués de Valdecillan päänsärkyosastolla on todistetusti migreenin hallinta, ja sillä on tällä hetkellä yli 400 potilasta, joilla on aktiivinen anti-CGRP/r-mAb-hoito. Lisäksi ryhmämme on edelläkävijä neuropeptidien, kuten CGRP:n, VIP:n tai PACAP:n mittauksessa, ja sillä on todistetusti useita julkaisuja tästä aiheesta huipputason aikakauslehdissä (Cernuda-Morollón ym. 2014; Riesco ym. 2017; Pérez). - Pereda et ai. 2021; Kaiken kaikkiaan uskomme, että meillä on henkilöresurssit ja osaaminen ja kokemus toteuttaa määritellyt ominaisuudet vastaavan projektin.

Potilaat ja kontrollit

Potilaita, jotka täyttävät kroonisen migreenin kriteerit ja joille on määrätty näitä terapeuttisia aineita, pyydetään ilmoittautumaan tähän tutkimukseen. Kliiniset tiedot tallennetaan prospektiivisesti tutkimukseen liittymishetkestä alkaen sekä aikaisemmat relevantit kliiniset tiedot, jotka kerätään haastattelemalla potilasta ja tarkastelemalla hänen kliinistä historiaansa. Kontrolliryhmä koostuu koehenkilöistä, joilla ei ole migreenihistoriaa tai muita ensisijaisia ​​päänsärkyjä, jotka yhdistetään migreeniryhmään sukupuolen ja iän mukaan. Nämä rekrytoidaan sairaalan työntekijöistä ja heidän perheistään, jotka altruistisesti vapaaehtoisesti osallistuvat.

Näytteen koko

Irimian et al 2021 tulosten perusteella laskimme, että kun odotettu erokeskiarvo oli 35 %, alfa 0,01 ja potenssi 80 %, meidän oli otettava mukaan vähintään 61 osallistujaa ryhmää kohden.

Näytteiden kerääminen, käsittely ja varastointi

Sairaalatilojemme päänsärkyyksikön sairaanhoitajat ottavat kaikki verinäytteet. Noudattamalla äskettäin julkaistussa artikkelissa (Gárate et al. 2024) asetettuja ohjeita seerumin CGRP:n analysoinnille, näytteenoton standardiolosuhteet ovat: (1) vähintään 12 tunnin paasto; (2) veri kyynärlaskimosta, joka on otettu klo 9-12 välillä; (3) vähintään 24 tuntia ilmaista päänsärkyjaksoa; (4) ei ole käytetty minkäänlaisia ​​kipulääkkeitä edellisen 24 tunnin aikana. Lisäksi migreenipotilaat eivät ole voineet ottaa oireenmukaista hoitoa migreenikohtauksen keskeyttämiseksi edellisen 24 tunnin aikana. Ennaltaehkäisevien lääkkeiden samanaikainen käyttö äskettäin määrätyn anti-CGRP/r-mAb:n lisäksi on sallittua.

Kaikkien näytteiden annetaan hyytyä, sentrifugoidaan välittömästi, jaetaan eriin ja säilytetään 4 oC:ssa 6 tuntia, kunnes seerumi siirretään lopulta pakastimeen -80 oC:ssa. Näytettä ei säilytetä yli 4 kuukautta ennen analysointia.

Molekyylimääritykset

Seerumin amyliinipitoisuudet määritetään validoidulla fluoresoivalla sandwich-ELISA:lla, joka on erityisesti suunniteltu peptidin aktiivisen muodon havaitsemiseen ja ilman merkittävää ristireaktiivisuutta analogien kanssa (<1 %), jota on jo käytetty aikaisemmissa töissä (Irimia et ai. 2021).

Tietojen analysointi

Tilastollinen analyysi suoritetaan tietyllä ohjelmistolla, GraphPad Prism ja SPSS. Seerumin amyliinipitoisuuksia verrataan kontrollien ja migreeniryhmän välillä sekä migreeniryhmän sisällä koko hoidon ajan. Analyysi sisältää myös kliinisten/hoitomuuttujien ja neuropeptiditasojen välisten mahdollisten korrelaatioiden arvioinnin sekä migreenipotilaiden alaryhmien välisen vertailun post-hoc-luokittelun perusteella.

VIITTEET

Alpuente, A., Gallardo, V. J., Asskour, L., Caronna, E., Torres-Ferrus, M. ja Pozo-Rosich, P. (2022). Syljen CGRP- ja erenumabihoitovaste: Kohti migreenin täsmälääkettä. Annals of Neurology, 92(5), 846-859. https://doi.org/10.1002/ana.26472

Ashina, M., Terwindt, G. M., Al-Karagholi, M. A. M., de Boer, I., Lee, M. J., Hay, D. L., Schulte, L. H., Hadjikhani, N., Sinclair, A. J., J Ashina, H., Schwedt, T. , & Goadsby, P. J. (2021). Migreeni: taudin karakterisointi, biomarkkerit ja tarkkuuslääketiede. Lancetissa (Vol. 397, numero 10283, s. 1496-1504). Elsevier B.V. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)32162-0

Caronna, E., Gallardo, V. J., Egeo, G., Vázquez, M. M., Castellanos, C. N., Membrilla, J. A., Vaghi, G., Rodríguez-Montolio, J., Fabregat Fabra, N., Sánchez-Caballero, F. , Jaimes Sánchez, A., Muñoz-Vendrell, A., Oliveira, R., Gárate, G., González-Osorio, Y., Guisado-Alonso, D., Ornello, R., Thunstedt, C., Fernández-Lázaro, I., … EUREkA-tutkimusryhmä. (2024). Migreenin ehkäisyn uudelleenmäärittely: varhainen hoito monoklonaalisilla anti-CGRP-vasta-aineilla tehostaa vastetta todellisessa maailmassa. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. https://doi.org/10.1136/jnnp-2023-333295

Cernuda-Morollón, E., Mart\'\inez-Camblor, P., Ramón, C., Larrosa, D., Serrano-Pertierra, E., & Pascual, J. (2014). CGRP- ja VIP-tasot tyypin A onabotulinumtoksiinin tehokkuuden ennustajina kroonisessa migreenissä. Päänsärky, 54(6), 987-995.

de Logu, F., Landini, L., Janal, M. N., Li Puma, S., de Cesaris, F., Geppetti, P., & Nassini, R. (2019). Migreenia aiheuttavat aineet aiheuttavat hiirillä periorbitaalista allodyniaa. Journal of Headache and Pain, 20(1). https://doi.org/10.1186/s10194-019-0968-1

Debbie Hay, C. L., Hay, D. L., Garelja, M. L., Poyner, D. R. ja Walker, C. S. (2018). Päivitys kalsitoniinin/CGRP-perheen peptidien farmakologiaan: IUPHAR Review 25. British Journal of Pharmacology, 175(3), 3-17. https://doi.org/10.1111/bph.13878/full

Gárate, G., González-Quintanilla, V., González, A., Pascual, M., Pérez-Pereda, S., Madera, J., & Pascual, J. (2023). Seerumin alfa- ja beeta-CGRP-tasot kroonisilla migreenipotilailla ennen ja jälkeen monoklonaalisia vasta-aineita CGRP:tä tai sen reseptoria vastaan. Annals of Neurology, 94(2). https://doi.org/10.1002/ana.26658

Gárate, G., Pascual, J., Pascual-Mato, M., Madera, J., Martín, M. M. S., & González-Quintanilla, V. (2024). CGRP-tasojen sotkujen purkaminen migreenin biomarkkerina: syvällinen kirjallisuuskatsaus ja analyysi kokeellisista kokemuksistamme. Journal of Headache and Pain, 25(1). https://doi.org/10.1186/s10194-024-01769-4

Garelja, M. L., Alexander, T. I., Bennie, A., Nimick, M., Petersen, J., Walker, C. S., & Hay, D. L. (2024). Erenumabin, Aimovigin, farmakologinen karakterisointi kahdella kalsitoniinigeeniin liittyvällä peptidiresponsiivisella reseptorilla. British Journal of Pharmacology, 181(1), 142-161. https://doi.org/10.1111/bph.16218

Ghanizada, H., Al-Karagholi, M. A. M., Walker, C. S., Arngrim, N., Rees, T., Petersen, J., Siow, A., Mørch-Rasmussen, M., Tan, S., O'Carroll , S. J., Harris, P., Skovgaard, L. T., Jørgensen, N. R., Brimble, M., Waite, J. S., Rea, B. J., Sowers, L. P., Russo, A. F., Hay, D. L. ja Ashina, M. (2021). Amylin Analog Pramlintide aiheuttaa migreenin kaltaisia ​​kohtauksia potilailla. Annals of Neurology, 89(6), 1157-1171. https://doi.org/10.1002/ana.26072

Haghdoost, F., Puledda, F., Garcia-Azorin, D., Huessler, E. M., Messina, R. ja Pozo-Rosich, P. (2023). CGRP-mAb:iden ja gepantien tehokkuuden arviointi migreenin ennaltaehkäisevässä hoidossa: Vaiheen 3 satunnaistettujen kontrolloitujen kokeiden systemaattinen katsaus ja verkkometa-analyysi. In Cefalalgia (Vo. 43, numero 4). SAGE Publications Ltd. https://doi.org/10.1177/03331024231159366

Hay, D. L. (2017). Amylin. Päänsärky, 57, 89-96. https://doi.org/10.1111/head.13077

Hendrikse, E. R., Bower, R. L., Hay, D. L. ja Walker, C. S. (2019). CGRP:n ja CGRP-peptidiperheen molekyylitutkimukset keskushermostossa. In Cefalalgia (Vo. 39, numero 3, s. 403-419). SAGE Publications Ltd. https://doi.org/10.1177/0333102418765787

Irimia, P., Martínez-Valbuena, I., Mínguez-Olaondo, A., Domínguez-Vivero, C., Sánchez-Arias, J. A., Martínez-Vila, E., Luquin, M. R., & Leira, R. (2021) ). Interictal amyliinitasot kroonisilla migreenipotilailla: Tapaus-verrokkitutkimus. Cefalalgia, 41(5), 604-612. https://doi.org/10.1177/0333102420977106

Lutz, T. A. (2005). Haiman amyliini keskushermostovaikutteisena kyllästävänä hormonina. Kirjassa Current Drug Targets (Vol. 6).

Mulder, H., Leckstriim, A., Uddman, R., Ekblad, E., 'Per, W.: & Sundiet-', F. (1995). Saaristoamyloidipolypeptidi (amyliini) ilmentyy aistineuroneissa. Julkaisussa The Journal of Neuroscience (Vol. 75, numero 11).

Pérez-Pereda, S., Toriello-Suárez, M., Ocejo-Vinyals, G., Guiral-Foz, S., Castillo-Obeso, J., Montes-Gómez, S., Martínez-Nieto, R. M., Iglesias, F., González-Quintanilla, V., & Oterino, A. (2020). Seerumin CGRP-, VIP- ja PACAP-hyödyllisyys migreenissä: tapauskontrollitutkimus kroonisista migreenipotilaista todellisessa kliinisessä käytännössä. Molecular Biology Reports, 47(9), 7125-7138. https://doi.org/10.1007/s11033-020-05781-0

Raffaelli, B., Terhart, M., Fitzek, M. P., Lange, K. S., Mecklenburg, J., Overeem, L. H., Siebert, A., Storch, E., & Reuter, U. (2023). CGRP-plasman pitoisuuksien muutos migreenissä CGRP-(reseptori) monoklonaalisten vasta-aineiden lopettamisen jälkeen. Pharmaceutics, 15(1), 1-9. https://doi.org/10.3390/pharmaceutics15010293

Rees, T. A., Hendrikse, E. R. ja Walker, C. S. (2022). Beyond CGRP: Kalsitoniinipeptidiperhe migreenin ja kivun kohteina. British Journal of Pharmacology, 179, 381-398. https://doi.org/10.1111/bph.15605

Riesco, N., Cernuda-Morollón, E., Martínez-Camblor, P., Pérez-Alvarez, A. I., Verano, L., García-Cabo, C., Serrano-Pertierra, E., & Pascual, J. ( 2017). Suhde seerumin VIP-tasojen, mutta ei CGRP:n, ja kallon autonomisten parasympaattisten oireiden välillä: Tutkimus kroonisilla migreenipotilailla. Cefalalgia, 37(9), 823-827. https://doi.org/10.1177/0333102416653232

Russo, A. F. ja Hay, D. L. (2023). CGRP-fysiologia, farmakologia ja terapeuttiset kohteet: migreeni ja muut. Fysiologisissa katsauksissa (Vol. 103, numero 2, s. 1565-1644). NLM (Medline). https://doi.org/10.1152/physrev.00059.2021

Silvestro, M., Iannone, L. F., Orologio, I., Tessitore, A., Tedeschi, G., Geppetti, P., & Russo, A. (2023). Migreenin hoito: kohti uusia farmakologisia tavoitteita. Julkaisussa International Journal of Molecular Sciences (Vol. 24, Issue 15). Monitieteinen Digital Publishing Institute (MDPI). https://doi.org/10.3390/ijms241512268

Torres-Ferrús, M., Ursitti, F., Alpuente-Ruiz, A., Brunello, F., Chiappino, D., de Vries, T., di Marco, S., Ferlisi, S., Guerritore, L. , Gonzalez-Garcia, N., Gonzalez-Martinez, A., Khutorov, D., Kritsilis, M., Kyrou, A., Makeeva, T., Minguez-Olaondo, A., Pilati, L., Serrien, A. ., Tsurkalenko, O., … Lampl, C. (2020). Muutoksista migreenin kronisointiin: Patofysiologiset ja kliiniset näkökohdat. Julkaisussa Journal of Headache and Pain (Vol. 21, numero 1). BioMed Central Ltd. https://doi.org/10.1186/s10194-020-01111-8