«Продольный анализ уровней амилина у пациентов с мигренью, проходящих лечение анти-CGRP/CGRPr»

Хотя открытие пептида, связанного с геном кальцитонина (CGRP), и его роли в развитии мигрени, дало важное понимание этого состояния и в настоящее время предлагает эффективную фармакологическую мишень для многих пациентов, оно не может объяснить вариабельность этого сложного заболевания (Ashina et al. 2021). Неудивительно, что некоторым пациентам не помогает лечение анти-CGRP (Caronna et al. 2024), гепанты и/или моноклональные антитела (mAb), что поднимает вопрос о том, чего еще нам не хватает в патофизиологии мигрени и есть ли другие целевые показатели могут дополнять текущие варианты лечения (Rees et al. 2022).

В этом контексте различные исследования указывают на широкий круг кандидатов, хотя результаты остаются неубедительными (Сильвестро и др., 2023). Одним из наиболее многообещающих кандидатов является амилин, пептид из 37 аминокислот (Hay 2017), который является членом семейства кальцитонинов, где также обнаружен CGRP. Фактически, существование связи между CGRP и амилином хорошо документировано, поскольку эти две молекулы демонстрируют некоторую беспорядочность в отношениях с рецепторами друг друга. В частности, рецептор амилина имеет такое же сродство к своему каноническому лиганду (CGRPr), что и к CGRP (Hay et al. 2018). Помимо перекрытия передачи сигналов, обнаруженного между CGRP и амилином, существуют некоторые другие особенности, указывающие на возможное участие этого эндокринного пептида в развитии мигрени. Экспрессия как лиганда, так и рецептора, хотя она в основном обнаруживается в поджелудочной железе, где амилин выполняет свою основную функцию в качестве гормона, снижающего уровень глюкозы (Lutz 2005), не ограничивается ею. Амилин и его рецептор также экспрессируются в участках, связанных с мигренью, включая сенсорные нейроны (Mulder et al. 1995) и тригеминоваскулярную систему (Hendrikse et al. 2019). Более того, амилин также участвует в обработке боли, ключевой особенности патофизиологии мигрени, несмотря на то, что его точная роль в механизмах боли плохо изучена (Hay et al. 2017). В целом, знания, которые мы в настоящее время получили об амилине, его перекрывающейся передаче сигналов, расположении и функциях, ясно указывают на степень участия этой молекулы или ее рецептора в патофизиологии приступа мигрени, хотя его точное участие остается неописанным и до сих пор остается неясным. еще много вопросов, на которые предстоит ответить.

За последние несколько лет были предприняты усилия по расширению наших знаний о значимости путей, зависимых от амилиновых рецепторов, при мигрени (Russo & Hay 2023). Провокационные исследования на мышах подтверждают роль пептида в индуцировании кожной чувствительности и фотофобии (De Logu et al. 2019; Ghanizada et al. 2021), обеспечивая доказательство того, что амилин и CGRP могут иметь перекрывающиеся функциональные роли. Когда мы сосредоточимся на людях, датское клиническое исследование показало, что введение прамлинтида, агониста амилиновых рецепторов, используемого в клинической практике для лечения диабета, у группы пациентов с диагнозом мигрень без ауры провоцировало немедленную головную боль и мигренеподобную головную боль. в очень схожих пропорциях и характеристиках с теми, которые образуются при введении CGRP тем же субъектам (Ghanizada et al. 2021). Исследование также показало, что, несмотря на то, что треть пациентов, у которых развились мигренеподобные приступы, произошли с обеими молекулами, значительная часть была чувствительна только к амилину или CGRP, но это наблюдение требует дальнейшего изучения.

В дополнение к этим данным существует исследование «случай-контроль», в котором изучались межприступные уровни амилина и CGRP в группе пациентов с эпизодической или хронической мигренью (Irimia et al. 2021). Исследование показало, что концентрации обоих пептидов были увеличены только в группе с хронической мигренью по сравнению с контрольной группой и пациентами с эпизодической мигренью. Хотя основной целью этого исследования была оценка полезности амилина в качестве биомаркера хронической мигрени, оно подняло вопрос о том, может ли амилин играть роль в хронификации мигрени, аналогично тому, что предполагалось в отношении CGRP (Torres-Ferrús et al. . 2023). На сегодняшний день не существует ни одного дополнительного исследования, которое бы подтвердило/опровергло эти выводы, поэтому к их выводам следует относиться внимательно.

Наконец, у нас есть данные исследований, оценивающих влияние моноклональных антител, нацеленных на свободный лиганд или CGRP. Реальные данные показывают, что эти два разных подхода имеют почти одинаковый уровень эффективности (Haghdoost et al. 2023). Первоначально это стало неожиданностью, поскольку различная направленность этих терапевтических агентов могла привести к разным показателям результатов. Блокирование CGRP само по себе действует как на канонический рецептор, так и на рецептор амилина, передача сигналов которого теперь будет зависеть исключительно от самого амилина. С другой стороны, воздействие на классический рецептор CGRP теоретически все равно допускает взаимодействие лиганда с рецептором амилина, хотя недавние исследования показали, что эренумаб также взаимодействует с этим рецептором, но с меньшей селективностью, чем с CGRPr (Garelja и др. 2024). Вопрос о том, оказывает ли это недавно описанное взаимодействие значимое влияние на передачу сигналов рецептора амилина, до сих пор остается загадкой. Более того, в нескольких исследованиях оценивались концентрации CGRP при хронической мигрени во время терапии моноклональными антителами (Alpuente et al. 2022; Raffaelli et al. 2023) и была показана связь между более высокими базальными межприступными концентрациями альфа-CGRP и тенденция к лучшему ответу на терапию независимо от механизма ее действия (Alpuente et al. 2022; Gárate et al. 2023), но отсутствует объяснение, конкретно связанное с уровнями CGRP, почему почти половина пациентов не получает пользы от лекарства. Наконец, не у всех пациентов наблюдаются повышенные уровни CGRP (Gárate et al. 2024), о чем свидетельствует большой разброс данных, обнаруженных в разных исследованиях, и, если собрать все данные вместе, правдоподобным объяснением будет то, что некоторые приступы мигрени, если а не само состояние мигрени, может быть CGRP-независимым у некоторых пациентов и, следовательно, зависеть от других молекул.

В заключение отметим, что амилин, благодаря своим перекрывающимся свойствам с CGRP и недавно опубликованным данным, является одним из наиболее многообещающих кандидатов на то, чтобы стать второй молекулой, способной объяснить гетерогенность, обнаруженную при мигрени. Тем не менее, еще предстоит понять много информации, прежде чем потенциально предложить новый вариант терапевтической цели или действовать в качестве биомаркера этого состояния. Этот процесс, несомненно, потребует исследований, поскольку это единственный способ расширить наши знания и добиться успешного перевода амилина из лабораторных исследований в клинику.

КОНКРЕТНЫЕ ЦЕЛИ И ГИПОТЕЗЫ

Наши конкретные цели заключаются в следующем:

Оцените межприступные уровни циркулирующего амилина в сыворотке в контексте лечения моноклональными антителами против CGRP/CGRPr.

Проанализируйте изменение этих концентраций после первых 6 месяцев лечения.

Оценить возможную корреляцию концентраций с клиническими показателями наших пациентов.

Сравните результаты на базальном этапе и через 6 месяцев после начала лечения с контрольной группой.

Мы предположили, что базальные уровни амилина будут повышены по сравнению с контрольной группой, как описано ранее, что эти концентрации будут меняться после 6 месяцев лечения. Эти концентрации будут меняться, и их эволюция будет коррелировать с клиническими переменными и/или ответными переменными.

МЕТОДЫ

Это проспективное моноцентрическое перекрестное пилотное исследование.

Адекватность группы

Отделение головной боли университетской больницы Маркиза де Вальдесилья имеет проверенный опыт лечения мигрени и в настоящее время принимает более 400 пациентов, получающих активное лечение моноклональными антителами против CGRP/r. Кроме того, наша группа является пионером в измерении нейропептидов, таких как CGRP, VIP или PACAP, с проверенным опытом многочисленных публикаций по этой теме в ведущих журналах (Cernuda-Morollón et al. 2014; Riesco et al. 2017; Pérez -Переда и др. 2020 г.; Иримия и др. 2021 г.; Гарате и др. 2024). В целом мы считаем, что у нас есть человеческие ресурсы, ноу-хау и опыт для реализации проекта с определенными характеристиками.

Пациенты и контроль

Пациентам, соответствующим критериям хронической мигрени и которым назначены эти терапевтические средства, будет предложено принять участие в этом исследовании. Клинические данные будут проспективно записываться с момента присоединения к исследованию, а также предыдущие соответствующие клинические данные, которые будут собраны путем опроса пациента и анализа его клинической истории. Контрольная группа будет состоять из субъектов, у которых в анамнезе не было мигрени или любого другого вида первичной головной боли, которые будут сопоставлены с группой мигрени по полу и возрасту. Они будут набраны из числа работников больницы и их семей, которые альтруистически добровольно примут участие.

Размер выборки

Основываясь на результатах Иримии и др., 2021 г., мы рассчитали, что при ожидаемой средней разнице 35%, альфе, равной 0,01, и мощности 80%, мы должны были включить минимум 61 участника в группу.

Сбор, обработка и хранение проб

Все образцы крови будут брать медсестры отделения головной боли нашей больницы. Следуя рекомендациям по анализу CGRP в сыворотке, изложенным в недавней статье (Gárate et al. 2024), стандартными условиями для взятия проб являются: (1) не менее 12 часов натощак; (2) кровь из локтевой вены, взятая между 9 и 12 часами утра; (3) не менее 24 часов периода отсутствия головной боли; (4) отсутствие использования каких-либо обезболивающих препаратов в течение предыдущих 24 часов. Кроме того, пациенты с мигренью не могли принимать какое-либо симптоматическое лечение для купирования приступа мигрени в течение предыдущих 24 часов. Разрешено одновременное применение профилактических средств, за исключением недавно назначенных моноклональных антител против CGRP/r.

Всем образцам дают возможность свернуться, немедленно центрифугируют, отбирают аликвоты и хранят при температуре от 4°C до 6 часов, пока сыворотка окончательно не будет перенесена в морозильную камеру при -80°C. Ни один образец не будет храниться более 4 месяцев до анализа.

Молекулярные определения

Концентрации амилина в сыворотке будут определяться с помощью проверенного флуоресцентного сэндвич-ELISA, специально разработанного для обнаружения активной формы пептида и без какой-либо заметной перекрестной реактивности с аналогами (<1%), которая уже использовалась в предыдущих работах (Irimia et al. 2021).

Анализ данных

Статистический анализ будет выполняться с помощью специального программного обеспечения GraphPad Prism и SPSS. Концентрации амилина в сыворотке будут сравниваться между контрольной группой и группой с мигренью, а также внутри группы с мигренью на протяжении всего лечения. Анализ также будет включать оценку возможных корреляций между клиническими/лечебными переменными и уровнями нейропептида и сравнение подгрупп пациентов с мигренью на основе апостериорных классификаций.

ССЫЛКИ

Альпуэнте А., Галлардо В.Дж., Аскур Л., Каронна Э., Торрес-Феррус М. и Позо-Росич П. (2022). Ответ на лечение CGRP в слюне и эренумабом: на пути к прецизионной медицине при мигрени. Анналы неврологии, 92 (5), 846–859. https://doi.org/10.1002/ana.26472

Ашина, М., Тервиндт, Г.М., Аль-Караголи, М.А.М., де Бур, И., Ли, М.Дж., Хэй, Д.Л., Шульте, Л.Х., Хаджихани, Н., Синклер, А.Дж., Ашина, Х., Шведт, Т.Дж. и Годсби, П.Дж. (2021). Мигрень: характеристика заболевания, биомаркеры и точная медицина. В «Ланцете» (т. 397, выпуск 10283, с. 1496-1504). Эльзевир Б.В. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)32162-0

Каронна, Э., Галлардо, В.Дж., Эгео, Г., Васкес, М.М., Кастельянос, К.Н., Мембрилья, Х.А., Ваги, Г., Родригес-Монтолио, Дж., Фабрегат Фабра, Н., Санчес-Кабальеро, Ф. , Хаймес Санчес, А., Муньос-Вендрел, А., Оливейра, Р., Гарате, Г., Гонсалес-Осорио, Ю., Гисадо-Алонсо, Д., Орнелло, Р., Тунстедт, К., Фернандес- Лазаро И.,… Исследовательская группа EUREKA. (2024). Новый взгляд на профилактику мигрени: раннее лечение моноклональными антителами против CGRP усиливает ответ в реальном мире. Журнал неврологии, нейрохирургии и психиатрии. https://doi.org/10.1136/jnnp-2023-333295

Сернуда-Мороллон Э., Мартинес-Камблор П., Рамон К., Ларроса Д., Серрано-Пертьерра Э. и Паскуаль Дж. (2014). Уровни CGRP и VIP как предикторы эффективности онаботулотоксина типа А при хронической мигрени. Головная боль, 54 (6), 987–995.

де Логу Ф., Ландини Л., Джанал М. Н., Ли Пума С., де Сезарис Ф., Джеппетти П. и Нассини Р. (2019). Вещества, провоцирующие мигрень, вызывают у мышей периорбитальную аллодинию. Журнал головной боли и боли, 20 (1). https://doi.org/10.1186/s10194-019-0968-1

Дебби Хэй, К.Л., Хэй, Д.Л., Гареля, М.Л., Пойнер, Д.Р., и Уокер, К.С. (2018). Обновленная информация о фармакологии семейства пептидов кальцитонина/CGRP: Обзор IUPHAR 25. Британский журнал фармакологии, 175(3), 3-17. https://doi.org/10.1111/bph.13878/full

Гарате Г., Гонсалес-Кинтанилья В., Гонсалес А., Паскуаль М., Перес-Переда С., Мадера Дж. и Паскуаль Дж. (2023). Уровни сывороточного альфа- и бета-CGRP у пациентов с хронической мигренью до и после введения моноклональных антител против CGRP или его рецептора. Анналы неврологии, 94 (2). https://doi.org/10.1002/ana.26658

Гарате, Г., Паскуаль, Дж., Паскуаль-Мато, М., Мадера, Дж., Мартин, М.М.С., и Гонсалес-Кинтанилья, В. (2024). Распутывание путаницы с уровнями CGRP как биомаркера мигрени: углубленный обзор литературы и анализ нашего экспериментального опыта. Журнал головной боли и боли, 25 (1). https://doi.org/10.1186/s10194-024-01769-4

Гареля, М.Л., Александр, Т.И., Бенни, А., Нимик, М., Петерсен, Дж., Уокер, К.С., и Хэй, Д.Л. (2024). Фармакологическая характеристика эренумаба, Аймовига, на двух рецепторах, чувствительных к пептидам, связанным с геном кальцитонина. Британский журнал фармакологии, 181(1), 142-161. https://doi.org/10.1111/bph.16218

Ганизада, Х., Аль-Караголи, М.А.М., Уокер, К.С., Арнгрим, Н., Рис, Т., Петерсен, Дж., Сиоу, А., Мёрх-Расмуссен, М., Тан, С., О'Кэрролл , С.Дж., Харрис, П., Сковгаард, Л.Т., Йоргенсен, Н.Р., Бримбл, М., Уэйт, Дж. С., Ри, Б. Дж., Сауэрс, Л. П., Руссо, А. Ф., Хэй, Д. Л., и Ашина, М. (2021). Аналог амилина прамлинтид вызывает приступы мигрени у пациентов. Анналы неврологии, 89 (6), 1157–1171. https://doi.org/10.1002/ana.26072

Хагдуст Ф., Пуледда Ф., Гарсиа-Азорин Д., Хюсслер Э.М., Мессина Р. и Позо-Розич П. (2023). Оценка эффективности моноклональных антител CGRP и гепантов для профилактического лечения мигрени: систематический обзор и сетевой метаанализ рандомизированных контролируемых исследований фазы 3. В Цефалгии (т. 43, выпуск 4). SAGE Publications Ltd. https://doi.org/10.1177/03331024231159366

Хэй, DL (2017). Амилин. Головная боль, 57, 89-96. https://doi.org/10.1111/head.13077

Хендрикс, Э.Р., Бауэр, Р.Л., Хэй, Д.Л., и Уокер, К.С. (2019). Молекулярные исследования CGRP и семейства пептидов CGRP в центральной нервной системе. В Цефалгии (т. 39, выпуск 3, с. 403-419). SAGE Publications Ltd. https://doi.org/10.1177/0333102418765787

Иримия, П., Мартинес-Вальбуэна, И., Мингес-Олаондо, А., Домингес-Виверо, К., Санчес-Ариас, Х.А., Мартинес-Вила, Э., Лукин, М.Р., и Лейра, Р. (2021 г.) ). Интериктальные уровни амилина у пациентов с хронической мигренью: исследование «случай-контроль». Цефалгия, 41(5), 604-612. https://doi.org/10.1177/0333102420977106

Лутц, Т.А. (2005). Панкреатический амилин как гормон насыщения центрального действия. В текущих целях борьбы с наркотиками (Vol. 6).

Малдер Х., Лекстриим А., Уддман Р., Экблад Э., Пер В. и Сандиет Ф. (1995). Островковый амилоидный полипептид (амилин) экспрессируется в сенсорных нейронах. В Журнале Нейронауки (Vol. 75, выпуск 11).

Перес-Переда С., Ториелло-Суарес М., Осехо-Виньялс Г., Гираль-Фос С., Кастильо-Обесо Х., Монтес-Гомес С., Мартинес-Ньето Р.М., Иглесиас, Ф., Гонсалес-Кинтанилья В. и Отерино А. (2020). Полезность сывороточных CGRP, VIP и PACAP при мигрени: исследование «случай-контроль» у пациентов с хронической мигренью в реальной клинической практике. Отчеты о молекулярной биологии, 47 (9), 7125-7138. https://doi.org/10.1007/s11033-020-05781-0

Раффаэлли Б., Терхарт М., Фитцек М.П., ​​Ланге К.С., Мекленбург Дж., Оверим Л.Х., Зиберт А., Сторч Э. и Рейтер У. (2023). Изменение концентрации CGRP в плазме при мигрени после прекращения приема моноклональных антител к CGRP-(рецептору). Фармацевтика, 15(1), 1-9. https://doi.org/10.3390/pharmaceutics15010293

Рис, Т.А., Хендрикс, Э.Р., и Уокер, К.С. (2022). За пределами CGRP: Семейство пептидов кальцитонина как мишени при мигрени и боли. Британский журнал фармакологии, 179, 381–398. https://doi.org/10.1111/bph.15605

Риеско Н., Сернуда-Мороллон Э., Мартинес-Камблор П., Перес-Альварес А.И., Верано Л., Гарсиа-Кабо К., Серрано-Пертьерра Э. и Паскуаль Х. ( 2017). Взаимосвязь между уровнями VIP в сыворотке крови, но не CGRP, и краниальными вегетативными парасимпатическими симптомами: исследование на пациентах с хронической мигренью. Цефалгия, 37(9), 823-827. https://doi.org/10.1177/0333102416653232

Руссо, А.Ф., и Хэй, Д.Л. (2023). Физиология, фармакология и терапевтические цели CGRP: мигрень и не только. В «Физиологических обзорах» (т. 103, выпуск 2, с. 1565-1644). НЛМ (Медлайн). https://doi.org/10.1152/physrev.00059.2021

Сильвестро М., Янноне Л. Ф., Орологио И., Тесситоре А., Тедески Г., Джеппетти П. и Руссо А. (2023). Лечение мигрени: на пути к новым фармакологическим целям. В Международном журнале молекулярных наук (том 24, выпуск 15). Многопрофильный институт цифровых издательств (МДПИ). https://doi.org/10.3390/ijms241512268

Торрес-Феррус М., Урситти Ф., Альпуэнте-Руис А., Брунелло Ф., Кьяппино Д., де Врис Т., ди Марко С., Ферлизи С., Герриторе Л. , Гонсалес-Гарсия Н., Гонсалес-Мартинес А., Хуторов Д., Крицилис, М., Киру А., Макеева Т., Мингес-Олаондо А., Пилати Л., Серриен А., Цуркаленко О.,… Лампл, К. (2020). От трансформации к хронизации мигрени: Патофизиологические и клинические аспекты. В журнале головной боли и боли (т. 21, выпуск 1). ООО «БиоМед Централ» https://doi.org/10.1186/s10194-020-01111-8