Développement de méthodes basées sur LC-MS/MS pour la surveillance des concentrations d'antibiotiques dans les expectorations des patients atteints de fibrose kystique

L'antibiothérapie est une pierre angulaire de la prise en charge de la mucoviscidose (FK). Néanmoins, peu de recherches se concentrent sur les concentrations réelles atteintes dans les sécrétions pulmonaires des patients atteints de mucoviscidose. Comme les agents pathogènes à l'origine du déclin accéléré de la fonction pulmonaire résident principalement dans les sécrétions pulmonaires, de nombreux médecins s'intéressent désormais à ces données. Par conséquent, les chercheurs ont développé et validé une méthode de spectroscopie de masse en tandem par chromatographie liquide (UPLC-MS/MS) pour quantifier les antibiotiques bêta-lactamines administrés par voie intraveineuse, la ceftazidime, la pipéracilline et le méropénème, ainsi que l'aztréonam inhalé dans les expectorations des patients atteints de mucoviscidose. En plus d'avoir une méthode d'analyse validée, la collecte et la préparation des échantillons doivent être normalisées tout comme le puits pour garantir une mesure précise de la concentration.

Dans cet essai, trois facteurs pouvant entraîner un biais dans les mesures de concentration dans les expectorations sont étudiés à l'aide d'expectorations de patients recevant un traitement avec l'un des antibiotiques IV.

Un premier facteur est l'utilisation d'aérosols. Comme les patients atteints de mucoviscidose utilisent souvent des aérosols, tels que la solution saline hypertonique, la ventoline ou le pulmozyme, on peut s'attendre à une dilution des antibiotiques dans les expectorations. Il est probable que les moments auxquels les patients utilisent des aérosols devront être pris en compte lors de la collecte des crachats pour les mesures de concentration d'antibiotiques. Pour étudier l'étendue et la durée d'un changement de concentration induit par l'utilisation d'aérosols, un échantillon d'expectoration est prélevé avant l'utilisation d'aérosols et juste après la fin de l'aérosol ainsi que 30 min, 1h et 2h après la fin de l'aérosol, d'autres échantillons sont prélevés.

Un deuxième facteur est l'homogénéité des antibiotiques dans un échantillon d'expectoration. Les échantillons de crachats ont généralement un aspect hétérogène. Pour déterminer si la distribution des antibiotiques est également hétérogène, la concentration de plusieurs aliquotes du même échantillon d'expectoration sera comparée. Cinq aliquotes seront testées et les crachats restants seront également homogénéisés et analysés.

Un troisième facteur est la variabilité entre plusieurs échantillons de crachats recueillis lors d'une séance de drainage autogène. Une séance de drainage dirigée par un kinésithérapeute dure environ 30 minutes et vise à détacher et éliminer au maximum les sécrétions pulmonaires épaisses. On peut supposer que les crachats spontanément expectorés lors d'une séance de drainage proviennent de différentes parties du poumon. Pour vérifier si les antibiotiques sont distribués de manière homogène ou hétérogène dans les poumons, des échantillons de crachats sont prélevés au début, au milieu et à la fin de la séance de drainage. Les concentrations d'antibiotiques dans les 3 échantillons d'expectorations distincts seront comparées.

Les données issues de ces 3 tests permettront de standardiser le moment de prélèvement des échantillons par rapport à l'aérosolthérapie et au drainage autogène ainsi que d'évaluer si une homogénéisation des échantillons collectés est nécessaire.