Desarrollo de métodos basados ​​en LC-MS/MS para el control de las concentraciones de antibióticos en el esputo de pacientes con fibrosis quística

La terapia con antibióticos es una piedra angular en el manejo de la fibrosis quística (FQ). Sin embargo, poca investigación se centra en las concentraciones reales alcanzadas en las secreciones pulmonares de los pacientes con FQ. Dado que los patógenos que causan la disminución acelerada de la función pulmonar residen principalmente en las secreciones pulmonares, muchos médicos ahora están interesados ​​en estos datos. Por lo tanto, los investigadores han desarrollado y validado un método de espectroscopia de masas en tándem de cromatografía líquida (UPLC-MS/MS) para cuantificar los antibióticos betalactámicos ceftazidima, piperacilina y meropenem administrados por vía intravenosa, así como el aztreonam inhalado en el esputo de pacientes con FQ. Además de tener un método analítico validado, la recolección y preparación de muestras también debe estandarizarse para garantizar una medición precisa de la concentración.

En este ensayo, se estudian tres factores que pueden causar un sesgo en las mediciones de concentración en el esputo usando esputo de pacientes que reciben terapia con uno de los antibióticos intravenosos.

Un primer factor es el uso de aerosoles. Dado que los pacientes con fibrosis quística suelen utilizar aerosoles, como solución salina hipertónica, Ventolin o Pulmozyme, cabe esperar la dilución de los antibióticos en el esputo. Probablemente, será necesario tener en cuenta los momentos en los que los pacientes usan aerosoles al recolectar esputo para medir la concentración de antibióticos. Para investigar el alcance y la duración de un cambio de concentración inducido por el uso de aerosoles, se recolecta una muestra de esputo antes del uso del aerosol y justo después de completar el aerosol, así como 30 min, 1h y 2h después de completar el aerosol, se recolectan más muestras.

Un segundo factor es la homogeneidad de los antibióticos dentro de una muestra de esputo. Las muestras de esputo generalmente tienen una apariencia heterogénea. Para investigar si la distribución de antibióticos también es heterogénea, se comparará la concentración de múltiples alícuotas de la misma muestra de esputo. Se analizarán cinco alícuotas y el esputo restante también se homogeneizará y analizará.

Un tercer factor es la variabilidad entre varias muestras de esputo recolectadas durante una sesión de drenaje autógeno. Una sesión de drenaje dirigida por un fisioterapeuta dura aproximadamente 30 minutos y tiene como objetivo aflojar y eliminar las secreciones pulmonares espesas tanto como sea posible. Se puede suponer que el esputo expectorado espontáneamente en una sesión de drenaje se origina en diferentes partes del pulmón. Para verificar si los antibióticos se distribuyen de forma homogénea o heterogénea en los pulmones, se recogen muestras de esputo al principio, a la mitad y al final de la sesión de drenaje. Se compararán las concentraciones de antibiótico en las 3 muestras de esputo separadas.

Los datos provenientes de estas 3 pruebas permitirán estandarizar el momento de toma de muestras con respecto a la aerosolterapia y el drenaje autógeno, así como evaluar si es necesaria la homogeneización de las muestras recolectadas.