Разработка метода на основе ЖХ-МС/МС для мониторинга концентрации антибиотиков в мокроте больных муковисцидозом

Антибиотикотерапия является краеугольным камнем в лечении кистозного фиброза (МВ). Тем не менее, мало исследований посвящено фактическим концентрациям, достигаемым в секрете легких пациентов с муковисцидозом. Поскольку возбудители, вызывающие быстрое снижение функции легких, в основном находятся в секрете легких, многие врачи в настоящее время заинтересованы в этих данных. Поэтому исследователи разработали и утвердили метод жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектроскопией (UPLC-MS/MS) для количественного определения внутривенно вводимых бета-лактамных антибиотиков цефтазидима, пиперациллина и меропенема, а также ингаляционного азтреонама в мокроте пациентов с муковисцидозом. Помимо наличия утвержденного аналитического метода, сбор и подготовка проб должны быть стандартизированы, чтобы обеспечить точное измерение концентрации.

В этом испытании три фактора, которые могут вызвать систематическую ошибку при измерении концентрации в мокроте, изучаются с использованием мокроты пациентов, получающих терапию одним из внутривенных антибиотиков.

Первый фактор – использование аэрозолей. Поскольку больные муковисцидозом часто используют аэрозоли, такие как гипертонический раствор, Вентолин или Пульмозим, можно ожидать растворения антибиотиков в мокроте. Вероятно, при сборе мокроты для измерения концентрации антибиотиков необходимо будет учитывать моменты, когда пациенты используют аэрозоли. Чтобы исследовать степень и продолжительность изменения концентрации, вызванного использованием аэрозоля, образец мокроты собирают перед использованием аэрозоля и сразу после завершения аэрозоля, а также через 30 минут, 1 час и 2 часа после завершения аэрозоля, собирают дополнительные образцы.

Вторым фактором является однородность антибиотиков в одном образце мокроты. Образцы мокроты обычно имеют неоднородный вид. Чтобы выяснить, является ли распределение антибиотиков также неоднородным, будет сравниваться концентрация нескольких аликвот одного и того же образца мокроты. Будут протестированы пять аликвот, а оставшаяся мокрота также будет гомогенизирована и проанализирована.

Третьим фактором является вариабельность между несколькими образцами мокроты, собранными во время сеанса аутогенного дренирования. Сеанс дренирования под руководством физиотерапевта занимает около 30 минут и направлен на максимальное разжижение и удаление густых легочных выделений. Можно предположить, что мокрота, самопроизвольно отхаркивающаяся при сеансе дренирования, происходит из разных отделов легкого. Для проверки гомогенного или гетерогенного распределения антибиотиков в легких образцы мокроты собирают в начале, середине и в конце сеанса дренирования. Концентрации антибиотиков в 3 отдельных образцах мокроты будут сравниваться.

Данные, полученные в результате этих трех тестов, позволят стандартизировать момент времени сбора образцов в отношении аэрозольной терапии и аутогенного дренажа, а также оценить необходимость гомогенизации собранных образцов.