Desenvolvimento de método baseado em LC-MS/MS para monitoramento de concentrações de antibióticos no escarro de pacientes com fibrose cística

A terapia com antibióticos é uma pedra angular no tratamento da fibrose cística (FC). No entanto, poucas pesquisas se concentram nas concentrações reais alcançadas nas secreções pulmonares de pacientes com FC. Como os patógenos que causam o declínio acelerado da função pulmonar residem principalmente nas secreções pulmonares, muitos médicos agora estão interessados ​​nesses dados. Portanto, os pesquisadores desenvolveram e validaram um método de espectroscopia de massa tandem de cromatografia líquida (UPLC-MS/MS) para quantificar os antibióticos beta-lactâmicos administrados por via intravenosa ceftazidima, piperacilina e meropenem, bem como aztreonam inalado no escarro de pacientes com FC. Além de ter um método analítico validado, a coleta e preparação de amostras também precisam ser padronizadas para garantir uma medição de concentração precisa.

Neste estudo, três fatores que podem causar um viés nas medições de concentração no escarro são estudados usando escarro de pacientes recebendo terapia com um dos antibióticos IV.

Um primeiro fator é o uso de aerossol. Como os pacientes com fibrose cística costumam usar aerossóis, como solução salina hipertônica, Ventolin ou Pulmozyme, pode-se esperar a diluição dos antibióticos no escarro. Provavelmente, os momentos em que os pacientes usam aerossóis precisarão ser considerados na coleta de escarro para medições da concentração de antibióticos. Para investigar a extensão e a duração de uma mudança de concentração induzida pelo uso do aerossol, uma amostra de escarro é coletada antes do uso do aerossol e logo após a conclusão do aerossol, bem como 30 min, 1h e 2h após a conclusão do aerossol, mais amostras são coletadas.

Um segundo fator é a homogeneidade dos antibióticos dentro de uma amostra de escarro. As amostras de escarro geralmente têm uma aparência heterogênea. Para investigar se a distribuição dos antibióticos também é heterogênea, serão comparadas as concentrações de múltiplas alíquotas da mesma amostra de escarro. Cinco alíquotas serão testadas e o restante do escarro também será homogeneizado e analisado.

Um terceiro fator é a variabilidade entre várias amostras de escarro coletadas durante uma sessão de drenagem autógena. Uma sessão de drenagem conduzida por um fisioterapeuta leva aproximadamente 30 minutos e visa soltar e remover ao máximo as secreções pulmonares espessas. Pode-se supor que o escarro expectorado espontaneamente em uma sessão de drenagem se origina de diferentes partes do pulmão. Para verificar se os antibióticos estão distribuídos de forma homogênea ou heterogênea nos pulmões, amostras de escarro são coletadas no início, meio e final da sessão de drenagem. As concentrações de antibióticos nas 3 amostras de escarro separadas serão comparadas.

Os dados provenientes destes 3 testes permitirão padronizar o momento da colheita das amostras relativamente à aerossolterapia e drenagem autógena, bem como avaliar se é necessária a homogeneização das amostras recolhidas.