Opracowanie metody opartej na LC-MS/MS do monitorowania stężeń antybiotyków w plwocinie pacjentów z mukowiscydozą

Antybiotykoterapia jest kamieniem węgielnym w leczeniu mukowiscydozy (CF). Niemniej jednak niewiele badań koncentruje się na rzeczywistych stężeniach osiąganych w wydzielinach płucnych pacjentów z mukowiscydozą. Ponieważ patogeny powodujące przyspieszony spadek czynności płuc znajdują się głównie w wydzielinach płuc, wielu lekarzy jest obecnie zainteresowanych tymi danymi. Dlatego badacze opracowali i zwalidowali metodę tandemowej spektroskopii masowej z chromatografią cieczową (UPLC-MS/MS) do ilościowego oznaczania podawanych dożylnie antybiotyków beta-laktamowych ceftazydymu, piperacyliny i meropenemu, jak również wziewnego aztreonamu w plwocinie pacjentów z mukowiscydozą. Oprócz posiadania zatwierdzonej metody analitycznej, pobieranie próbek i ich przygotowanie muszą być wystandaryzowane, podobnie jak studzienka, aby zapewnić dokładny pomiar stężenia.

W tej próbie trzy czynniki, które mogą powodować błąd w pomiarach stężenia w plwocinie, są badane przy użyciu plwociny od pacjentów otrzymujących terapię jednym z antybiotyków dożylnych.

Pierwszym czynnikiem jest użycie aerozolu. Ponieważ pacjenci z mukowiscydozą często stosują aerozole, takie jak hipertoniczna sól fizjologiczna, Ventolin czy Pulmozyme, można spodziewać się rozcieńczenia antybiotyków w plwocinie. Prawdopodobnie momenty, w których pacjenci używają aerozoli, będą musiały być brane pod uwagę podczas pobierania plwociny do pomiarów stężenia antybiotyków. Aby zbadać zakres i czas trwania zmiany stężenia wywołanej użyciem aerozolu, przed użyciem aerozolu pobiera się próbkę plwociny, a zaraz po zakończeniu aerozolu oraz 30 minut, 1 godzinę i 2 godziny po zakończeniu aerozolu pobiera się więcej próbek.

Drugim czynnikiem jest jednorodność antybiotyków w jednej próbce plwociny. Próbki plwociny na ogół mają niejednorodny wygląd. Aby zbadać, czy dystrybucja antybiotyków jest również niejednorodna, porównane zostanie stężenie wielu porcji tej samej próbki plwociny. Przebadanych zostanie pięć porcji, a pozostała plwocina również zostanie poddana homogenizacji i analizie.

Trzecim czynnikiem jest zmienność między kilkoma próbkami plwociny pobranymi podczas autogenicznej sesji drenażu. Sesja drenażu prowadzona przez fizjoterapeutę trwa około 30 minut i ma na celu jak największe rozluźnienie i usunięcie gęstej wydzieliny płucnej. Można przypuszczać, że plwocina samoistnie odkrztuszona podczas drenażu pochodzi z różnych części płuca. Aby sprawdzić, czy antybiotyki są jednorodnie czy niejednorodnie rozmieszczone w płucach, próbki plwociny są pobierane na początku, w środku i na końcu sesji drenażu. Porównane zostaną stężenia antybiotyków w 3 oddzielnych próbkach plwociny.

Dane pochodzące z tych 3 badań pozwolą na standaryzację punktu czasowego pobrania próbki pod kątem aerozoloterapii i drenażu autogenicznego oraz ocenę konieczności homogenizacji pobranych próbek.