Préparation de l'iPSC pour l'édition du gène cellulaire pour le traitement de l'AATD

L'AAT est principalement produit dans les hépatocytes, donc la correction de l'hépatocyte est une approche des plus prometteuses. Les cellules IHEP ainsi que les cellules souches pluripotentes ou les cellules hépatocytaires dérivées de cellules souches mésenchymateuses fournissent des sources cellulaires potentielles pour la modélisation, la transplantation et l'ingénierie tissulaire des maladies indépendantes des organes donneurs.

Cependant, toutes les études rapportées dans la littérature, y compris le dépistage de la grande bibliothèque de médicaments, sont basées sur une ou quelques variantes AAT ou au plus quelques lignées cellulaires HIPSC dérivées de patients AATD. De plus, seul un sous-groupe de 10% de pi * zz a développé une maladie hépatique cliniquement pertinente et il existe un fort suspect que les modificateurs génétiques et / ou environnementaux déterminent si un homozygote affecté est sensible aux maladies hépatiques. De plus, il n'y a aucune étude sur l'efficacité du médicament potentiel dans la réduction de l'accumulation cellulaire de l'AAT pour d'autres génotypes AAT plutôt que sur le pi * zz et pour d'autres mutations rares associées aux inclusions hépatiques et aux maladies hépatiques cliniquement apparentes. Cette limitation représente une forte barrière dans le développement de nouvelles thérapies. Pour cette raison, les enquêteurs sélectionneront des candidats avec différents profils de maladies. Les enquêteurs prévoient de recruter des patients avec différents génotypes, y compris les porteurs de variantes pathologiques rares. L'IPSC sera généré à partir du sang périphérique et des cellules d'urine, puis les cellules seront caractérisées et stockées. Le PBMC sera gelé et sera reprogrammé en cellules souches pluripotentes induites. L'IPSC dérivé sera caractérisé par des méthodes standard d'immunofluroscence, le QRTPCR, l'hybridation génomique combinée (CGH) et la flowcytométrie, et sera différenciée en trois couches germinales.

De plus, les enquêteurs différencieront l'IPSC en hépathocytes (IHEP). Les hépatocytes dérivés de l'IPSC des patients déficients en AAT seront caractérisés pour les mutations. Il y a eu des tentatives pour développer un ciblage spécifique aux hépatocytes, mais avec des limites donc dans la proposition actuelle, les enquêteurs visent à développer et à tester deux approches différentes pour le ciblage spécifique des cellules: 1) par des liposomes / virosomes spécifiques aux hépatocytes en intégrant / conjuchant des asiments de l'asiation à la surface du liposome / des virosomes, soit des fragments de protéines ou des peptides; 2) Enrobage du liposome / virosome portant le BES avec une membrane de surface exoésicule dérivée des hépatocytes et en fournissant le BES dans l'AATD IHEP pour tester la faisabilité de cette méthode de traitement de la carence en AAT. Ces hépatocytes seront traités avec BES et son effet sera évalué par séquençage profond, l'immunohistochimie et la sécrétion de l'AAT seront confirmés par ELISA.

L'édition de base est une méthode émergente de médecine de précision que les enquêteurs vont utiliser comme traitement pour guérir l'AATD. Afin d'atteindre la cible, les enquêteurs proposent ici d'utiliser des vésicules extracellulaires pour livrer des éditeurs de base dans le foie. Les vésicules extracellulaires sont sécrétées par presque tous les types de cellules et peuvent être utilisées comme porteurs de protéines thérapeutiques potentielles. Il a été démontré que l'édition de base est une technique très prometteuse pour corriger la mutation génétique. Cependant, plusieurs défis ne sont pas résolus et, dans cette subvention, les enquêteurs souhaitent relever: spécificité, stabilité, bio-distribution et analyse des effets à long terme.