Preparação de iPSC para edição de genes celulares para o tratamento de AATD

O AAT é produzido principalmente nos hepatócitos, portanto, a correção no hepatócito é uma abordagem mais promissora. As células IHEP, bem como células-tronco pluripotentes ou células do tipo hepatócitos derivadas de células-tronco mesenquimais, fornecem fontes celulares potenciais para modelagem de doenças, transplante e engenharia de tecidos, independentemente dos órgãos doadores.

No entanto, todos os estudos relatados na literatura, incluindo a triagem da biblioteca de medicamentos grandes, são baseados em uma ou pouca variante AAT ou no máximo poucas linhas celulares HIPSC derivadas de pacientes com AATD. Além disso, apenas um subgrupo de 10% do PI*ZZ desenvolveu uma doença hepática clinicamente relevante e há um forte suspeito de que modificadores genéticos e/ou ambientais determinam se um homozigoto afetado é suscetível à doença hepática. Além disso, não há estudo sobre a eficácia do medicamento potencial na redução do acúmulo de AAT celular para outros genótipos de AAT, em vez de Pi*ZZ e para outras mutações raras associadas a inclusões hepáticas e doença hepática clinicamente aparente. Essa limitação representa uma forte barreira no desenvolvimento de novas terapias. Por esse motivo, os pesquisadores selecionarão candidatos com diferentes perfis de doenças. Os pesquisadores planejam recrutar pacientes com diferentes genótipos, incluindo os portadores de raras variantes patológicas. O iPSC será gerado a partir de sangue periférico e células de urina, então as células serão caracterizadas e armazenadas. O PBMC será congelado e será reprogramado para células -tronco pluripotentes induzidas. O iPSC derivado será caracterizado por métodos padrão de imunofluroscência, qRTPCR, hibridação genômica combinada (CGH) e citometria de fluxo e será diferenciada para três camadas germinativas.

Além disso, os investigadores diferenciarão o iPSC nos patins (IHEP). Os hepatócitos derivados do iPSC dos pacientes com deficiência de AAT serão caracterizados para as mutações. Houve tentativas de desenvolver segmentação específica de hepatócitos, mas com limitações, portanto, na proposta atual, os investigadores visam desenvolver e testar duas abordagens diferentes para direcionamento específico de células: 1) por lipossomo/virossomo específico para hepatócitos, integrando/conjugando asialofeuutinas nos fragmentos de lipossoma/virossoma, como protestos, como fragmentos de proteína; 2) Caminhar o lipossomo/virossomo que transporta o BES com a membrana da superfície da exovesícula derivada de hepatócitos e entregando o BES no AATD IHEP para testar a viabilidade desse método para tratamento da deficiência de AAT. Esses hepatócitos serão tratados com BES e seu efeito será avaliado por sequenciamento profundo, imuno -histoquímica e secreção de AAT será confirmado por ELISA.

A edição básica é um método emergente de medicina de precisão que os pesquisadores usarão como tratamento para curar a AATD. Para atingir o alvo, os investigadores propõem aqui o uso de vesículas extracelulares para fornecer editores base no fígado. As vesículas extracelulares são secretadas por quase todos os tipos de células e podem ser usadas como portadores de possíveis proteínas terapêuticas. Foi demonstrado que a edição básica é uma técnica muito promissora para corrigir a mutação genética. No entanto, vários desafios permanecem não resolvidos e, nesta concessão, os investigadores desejam enfrentar: especificidade, estabilidade, biistribuição e análise de efeitos a longo prazo.