Приготовление IPSC для редактирования клеточных генов для лечения AATD

Поэтому AAT в основном производится в гепатоцитах, поэтому коррекция в гепатоците является наиболее перспективным подходом. Клетки IHEP, а также плюрипотентные стволовые клетки или мезенхимальные стволовые клетки, связанные с гепатоцитаминоподобными клетками, обеспечивают потенциальные клеточные источники для моделирования, трансплантации и тканевой инженерии, независимо от органов доноров.

Тем не менее, все исследования, зарегистрированные в литературе, включая большой скрининг библиотеки лекарств, основаны на одном или немногих варианте AAT или не менее немногих клеточных линиях HIPSC, полученных от пациентов с AATD. Более того, только подгруппа из 10% Pi*ZZ разработала клинически значимое заболевание печени, и есть сильный подозреваемый, что генетические и/или окружающие модификаторы определяют, подвержена ли пораженная гомозигота к заболеваниям печени. Более того, нет никаких исследований об эффективности потенциального лекарственного средства в снижении накопления клеточных AAT для других генотипов AAT, а не Pi*ZZ и для других редких мутаций, связанных с включениями печени и клинически очевидным заболеванием печени. Это ограничение представляет собой сильный барьер в разработке новых методов лечения. По этой причине следователи выберут кандидатов с различными профилями заболеваний. Исследователи планируют рекрутировать пациентов с различными генотипами, включая носителей редких патологических вариантов. IPSC будет генерироваться из периферической крови и клеток мочи, затем клетки будут охарактеризованы и хранятся. PBMC будет заморожен и будет перепрограммирован в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки. Полученный IPSC будет характеризоваться стандартными методами иммунофлюроскок, QRTPCR, комбинированной геномной гибридизации (CGH) и потока, и будет дифференцирована до трех слоев зародышей.

Кроме того, следователи будут дифференцировать IPSC в гепатоциты (IHEP). Гепатоциты IPSC, полученные из пациентов с дефицитом AAT, будут охарактеризоваться для мутаций. Были предприняты попытки разработать специфическое нацеливание на гепатоциты, но с ограничениями, поэтому в нынешнем предложении исследователи стремятся развивать и тестировать два различных подхода для специфического нацеливания клеток: 1) специфическими гепатоцитами липосомы/виросомы путем интегрирования/сопряжения асиалеофетина на поверхности липосомы/виросомов как фрагментов или пептидов; 2) Покрытие липосомы/виросомы, несущей BES с помощью поверхностной мембраны экзовезикул гепатоцитов, и доставка BES в AATD IHEP, чтобы проверить выполнимость этого метода для лечения дефицита AAT. Эти гепатоциты будут рассматриваться с помощью BES, и его эффект будет оцениваться с помощью глубокого секвенирования, иммуногистохимия и секреция AAT будет подтверждена ELISA.

Редактирование база - это новый метод точной медицины, который исследователи собираются использовать в качестве лечения для лечения AATD. Чтобы достичь цели, исследователи предлагают здесь использовать внеклеточные пузырьки для доставки базовых редакторов в печень. Внеклеточные везикулы секретируются практически всеми типами клеток и могут использоваться в качестве носителей потенциальных терапевтических белков. Было показано, что базовое редактирование является очень многообещающей техникой для исправления генетической мутации. Тем не менее, несколько проблем остаются нерешенными, и в этом гранте следователи хотят решить: специфичность, стабильность, биологическое распределение и анализ долгосрочных эффектов.