Herstellung von IPSC für die Bearbeitung von Zellgen zur Behandlung von AATD

AAT wird in den Hepatozyten hauptsächlich produziert, weshalb die Korrektur in der Hepatozyten ein vielversprechender Ansatz ist. IHEP-Zellen sowie pluripotente Stammzellen oder mesenchymale Stammzellen stammen abgeleitete Hepatozyten-ähnliche Zellen für potenzielle Zellquellen für die Modellierung, Transplantation und das Tissue Engineering unabhängig von Spenderorganen.

Alle in der Literatur berichteten Studien, einschließlich des Screening von großer Arzneimittelbibliotheken, basieren jedoch auf einer oder wenigen AAT -Varianten oder höchstens HIPSC -Zelllinien, die von AATD -Patienten stammen. Darüber hinaus entwickelte nur eine Untergruppe von 10% von PI*ZZ eine klinisch relevante Lebererkrankung, und es besteht ein starker Verdächtiger, dass genetische und/oder Umweltmodifikatoren feststellen, ob eine betroffene Homozygote für Lebererkrankungen anfällig ist. Darüber hinaus gibt es keine Studie über die Wirksamkeit des potenziellen Arzneimittels bei der Verringerung der zellulären AAT -Akkumulation für andere AAT -Genotypen anstelle von PI*ZZ und für andere seltene Mutationen, die mit Lebereinschlüssen und klinisch offensichtlichen Lebererkrankungen verbunden sind. Diese Einschränkung ist eine starke Barriere bei der Entwicklung neuer Therapien. Aus diesem Grund werden die Ermittler Kandidaten mit unterschiedlichen Krankheitsprofilen auswählen. Die Forscher planen, Patienten mit unterschiedlichen Genotypen zu rekrutieren, einschließlich der Träger seltener pathologischer Varianten. IPSC wird aus peripheren Blut- und Urinzellen erzeugt, dann werden die Zellen charakterisiert und gespeichert. Das PBMC wird gefroren und wird zu induzierten pluripotenten Stammzellen neu programmiert. Das abgeleitete IPSC wird durch Standardmethoden der Immunfluroskulose, QRTPCR, kombinierter genomischer Hybridisierung (CGH) und Flowcytometrie charakterisiert und wird zu drei Keimschichten differenziert.

Darüber hinaus werden die Ermittler IPSC in Hepatocyten (IHEP) unterscheiden. Die IPSC -abgeleiteten Hepatozyten aus den AAT -Mangelpatienten werden für die Mutationen charakterisiert. Es gab Versuche, Hepatozytenspezifische Targeting zu entwickeln, aber mit Einschränkungen im aktuellen Vorschlag zielen die Forscher darauf ab, zwei verschiedene Ansätze für das zellspezifische Targeting zu entwickeln und zu testen: 1) durch Hepatozyten -Liposom/Virosom durch Integration/Konjugieren von Asialofeutin auf der Oberfläche des Liposoms/Virosomes entweder als Protein -Fragmente oder Peptide. 2) Überschichten des Liposoms/Virosomens mit der BES -mit Hepatozyten -abgeleitete Exovesikaloberflächenmembran und lieferte die BES -AATD -IHEP, um die Machbarkeit dieser Methode zur Behandlung von AAT -Mangel zu testen. Diese Hepatozyten werden mit BES behandelt und ihre Wirkung wird durch tiefe Sequenzierung, Immunhistochemie und Sekretion von AAT von ELISA bestätigt.

Basisbearbeitung ist eine aufkommende Methode zur Präzisionsmedizin, die die Ermittler als Behandlung zur Heilung von AATD verwenden werden. Um das Ziel zu erreichen, schlagen die Ermittler hier vor, extrazelluläre Vesikel zu verwenden, um Basisredakteure in der Leber zu liefern. Extrazelluläre Vesikel werden von fast allen Arten von Zellen sekretiert und können als Träger potenzieller therapeutischer Proteine ​​verwendet werden. Es wurde gezeigt, dass die Basisbearbeitung eine sehr vielversprechende Technik zur Korrektur der genetischen Mutation ist. Mehrere Herausforderungen bleiben jedoch ungelöst, und in diesem Zuschuss wollen die Ermittler sich ansprechen: Spezifität, Stabilität, Bioverteilung und Analyse von Langzeiteffekten.