Bereiding van iPSC voor celgenbewerking voor de behandeling van AATD

AAT wordt voornamelijk geproduceerd in de hepatocyten, daarom is correctie in de hepatocyten een veelbelovende aanpak. IHEP-cellen evenals pluripotente stamcel of mesenchymale stamcel-afgeleide hepatocytenachtige cellen bieden potentiële celbronnen voor ziektemodellering, transplantatie en weefseltechniek onafhankelijk van donororganen.

Alle onderzoeken in de literatuur, inclusief de grote screening op het gebied van geneesmiddelenbibliotheek, zijn echter gebaseerd op een of enkele AAT -variant of bij de meeste paar HIPSC -cellijnen afgeleid van AATD -patiënten. Bovendien ontwikkelde slechts een subgroep van 10% van Pi*ZZ een klinisch relevante leverziekte en er is een sterke verdachte dat genetische en/of milieumodificaties bepalen of een aangetaste homozygoot vatbaar is voor leverziekte. Bovendien is er geen onderzoek naar de werkzaamheid van het potentiële medicijn bij het verminderen van cellulaire AAT -accumulatie voor andere AAT -genotypen in plaats van PI*ZZ en voor andere zeldzame mutaties geassocieerd met leverinsluitingen en klinisch schijnbare leverziekte. Deze beperking vormt een sterke barrière bij de ontwikkeling van nieuwe therapieën. Om deze reden zullen de onderzoekers kandidaten selecteren met verschillende ziekteprofielen. De onderzoekers zijn van plan patiënten met verschillende genotypen te werven, waaronder de dragers van zeldzame pathologische varianten. IPSC zal worden gegenereerd uit perifeer bloed- en urinecellen, waarna cellen worden gekarakteriseerd en opgeslagen. De PBMC wordt bevroren en zal worden herprogrammeerd tot geïnduceerde pluripotente stamcellen. De afgeleide IPSC zal worden gekenmerkt door standaardmethoden van immunofluroscence, qRTPCR, gecombineerde genomische hybridisatie (CGH) en flowcytometrie, en zal worden gedifferentieerd met drie kiemlagen.

Verder zullen de onderzoekers IPSC differentiëren in HePathocytes (IHEP). De IPSC -afgeleide hepatocyten van de AAT -deficiënte patiënten zullen worden gekenmerkt voor de mutaties. There have been attempts to develop hepatocyte specific targeting but with limitations therefore in the current proposal the investigators aim at developing and testing two different approaches for cell specific targeting: 1) by hepatocyte specific liposome/virosome by integrating/conjugating asialofeutin on the surface of the liposome/virosomes either as protein fragments or peptides; 2) Coating van het liposoom/virosoom dat de BES draagt ​​met hepatocyten afgeleide EXOVESICLE -oppervlaktemembraan en het leveren van de BES in de AATD IHEP om de haalbaarheid van deze methode voor de behandeling van AAT -tekort te testen. Deze hepatocyten zullen worden behandeld met BES en het effect ervan zal worden geëvalueerd door diepe sequencing, immunohistochemie en secretie van AAT zullen worden bevestigd door ELISA.

Basisbewerking is een opkomende methode van precisiegeneeskunde die de onderzoekers gaan gebruiken als behandeling om AATD te genezen. Om het doelwit te bereiken, stellen de onderzoekers hier voor om extracellulaire blaasjes te gebruiken om basiseditors in de lever te leveren. Extracellulaire blaasjes worden uitgescheiden door bijna alle soorten cellen en kunnen worden gebruikt als dragers van potentiële therapeutische eiwitten. Er is aangetoond dat basisbewerking een veelbelovende techniek is om genetische mutatie te corrigeren. Verschillende uitdagingen blijven echter onopgelost en in deze subsidie ​​willen de onderzoekers aanpakken: specificiteit, stabiliteit, bio-verdeling en analyse van langetermijneffecten.