Implantáció előtti genetikai szűrés 36 év alatti nőknél egyetlen embriótranszferrel

A vizsgálat felépítése 2004 októbere és 2006 decembere között meddőségi kezelés alatt álló ovulációs nőket kértek fel, hogy vegyenek részt ebben az RCT-ben a következő felvételi kritériumok szerint: anyai életkor 36 év alatt, ICSI szükségessége és mozgékony spermiumok (spermaparaméterek: több mint 1 x 106). spermiumsejtek/ml) és mindkét partner normál kariotípussal rendelkezik. Az írásos beleegyezést követően a jogosult párokat véletlenszerűen besorolták az ICSI-be, majd blasztociszta transzfert végeztek PGS-sel vagy anélkül a nyolcsejtes stádiumú embrión. A randomizációt a járóbeteg-klinikán végezték el, és minden beteget csak egyszer lehetett bevonni. A beleegyezési űrlap megemlítette, hogy a PGS-csoportba besorolt ​​betegek beleegyeznek abba, hogy embriókat adományozzanak kutatási célokra, ha azok kromoszómálisan rendellenesek vagy nem alkalmasak transzferre vagy mélyhűtésre. A tanulmányt az Egyetemi Kórház Etikai Bizottsága hagyta jóvá. A betegek tisztában voltak a kezelés kijelölésével, és az átültetés pillanatában tájékoztatták őket a megfigyelt kromoszóma-rendellenességekről és az embriók morfológiai minőségéről.

Petefészek-stimuláció, petesejtek visszanyerése és embriótenyésztés A szabályozott petefészek-hiperstimulációt antagonista protokollban végeztük rekombináns FSH-val kombinálva GnRH antagonistával (ganirelix, Orgalutran, NV Organon) (Kolibianakis et al., 2004) vagy agonista protokollal, GnRH analógok felhasználásával. agyalapi mirigy deszenzitizálására (buserilin, Suprefact; Hoechst, Frankfurt, Németország), humán menopauzális gonadotropinokkal (hMG) (Menopur, Ferring Pharmaceuticals A/S, Koppenhága, Dánia) vagy rekombináns FSH-val (Puregon, NV Organon, Oss, Hollandia) kombinálva (Van de Velde et al., 1998). A petesejtek végső érését 10 000 NE HCG beadásával váltottuk ki. A HCG beadása után 36 órával a transzvaginális ultrahang-vezérelt petesejtek kinyerését ütemezték. ICSI-t használtunk a petesejtek megtermékenyítésére. A spermium-előkészítést, az in vitro megtermékenyítést, az intracitoplazmatikus spermium-injekciós eljárásokat és az embriótenyésztést Van Landuyt és munkatársai leírása szerint végezték. (2005).

A megtermékenyítés és az embrió értékelése A megtermékenyítést a COC-onkénti 2PN zigóta számának megfelelően értékeltük. Az embrióértékelést a 2. és 3. napon végeztük a blasztomerek számának és a fragmentáció százalékának rögzítésével. Az A fokozatú embriókat olyan embriókként határozták meg, amelyekben nincsenek magtöredékek. A B fokozatú embriók egyforma vagy nem egyenlő méretű blastomerekkel rendelkeztek, és az embrió térfogatának legfeljebb 20%-a volt tele magtöredékekkel. A C fokozatú embriókban az embrió térfogatának 20-50%-ában a magtöredékek voltak jelen. A D fokozatú embriók az embrió térfogatának több mint 50%-a tele volt magtöredékekkel. Az embriókat naponta értékelték az 5. napig. Az 5. napon az embriókat letartóztatott embriókba sorolták, amelyek az 5. napon nem mutatták a tömörülés jeleit, tömörödő embriók (C1-C2), korai blasztociszták (Bl1-Bl2) és terjeszkedő blasztociszták (Bl3-). Bl7) a Gardner és Schoolcraft (1999) által javasolt osztályozás szerint. Az embriókat csak az 5. napon vettük át a tömörítési szakasztól kezdve. Mindkét csoportban a számtalan embriókat az 5. vagy 6. napon mélyhűtöttük.

Embrióbiopszia A legalább öt blasztomerrel rendelkező A, B vagy C fokozatú embriókból biopsziát vettünk (Joris et al., 2003) az ICSI utáni 3. nap reggelén. Ezek a kiválasztási kritériumok annak eldöntésére, hogy az embrió alkalmas-e biopsziára, megegyeztek azokkal, amelyeket annak eldöntésére használtak, hogy az embrió átvihető-e a 3. napon a normál ICSI programban PGD nélkül. Az egyik blasztomer biopsziája előtt a blastomereket magok jelenlétére ellenőriztük. Ha ennek következtében nem találtak nukleáris anyagot a rögzítés során, egy második blastomer eltávolításra került. Az embrióbiopsziát HEPES-pufferolt tápközegben, olaj alatt végeztük lézertechnológia (Fertilase) alkalmazásával, a korábban részletesen leírtak szerint (Staessen et al., 2004).

Az interfázisos magok szétterítése és a FISH-eljárás Szájpipettával az egyes blasztomereket először közegben öblítettük, majd 1 µl-es 0,01 N HCl/0,1% Tween 20 oldatba (Coonen és mtsai, 1994) Superfroston helyeztük át. Plusz üvegcsúszda (Kindler GmbH, Freiburg, Németország). Kétkörös FISH-eljárást végeztünk, amely lehetővé tette az X, Y, 13, 18, 21 (1. kör) és 16, 22 (2. kör) kromoszómák detektálását, amint azt korábban részletesen leírtuk (Staessen et al., 2004).

FISH pontozási kritériumok Az adott blasztomerben észlelt specifikus FISH-jeleket a következőképpen értelmeztük: (i) a blasztomert akkor tekintettük diploidnak, ha a két gonoszóma és két kromoszóma 13-, 16-, 18-, 21- és 22-specifikus jele ajándék; (ii) a blasztomert haploidnak, triploidnak vagy tetraploidnak tekintették, ha a vizsgált kromoszómákra vonatkozóan egy, három vagy négy jel volt jelen; (iii) a blasztomert aneuploidnak tekintették, ha az egyik kromoszómához extra (triszómiás) vagy hiányzó (monoszómás) jelet figyeltek meg, a többi elemzett kromoszómára vonatkozó két jel jelenlétében; (iv) a blasztomer kombinált abnormálisnak tekinthető, ha nem volt sem diploid, sem haploid, triploid, tetraploid vagy aneuploid. A FISH analízist követően csak a megfelelő biopsziás blasztomerben kromoszómálisan normálisnak talált embriókat vittük át az 5. napon. A FISH analízist tapasztalt citogenetikusok végezték, akik képzettek citogenetikában és FISH elemzésben. Az első és a második kör eredményeit két megfigyelő elemezte Zeiss Axioplan 2 fluoreszcens mikroszkóp segítségével.

Embriótranszfer A PGS csoportban a transzfert az 5. napon végeztük, ha legalább egy tömörödő embriót vagy korai blasztocisztát nyertünk a genetikailag normálisnak talált embriókból. A kontrollcsoportban az átvitelt akkor is elvégeztük, ha az 5. napon legalább egy tömörödő embriót vagy korai blasztocisztát kaptunk; 4 embriótranszfert hajtottak végre a 3. napon.

Terhesség A biokémiai terhesség két egymást követő pozitív emelkedő (> 15 NE/ml) szérum hCG szintet jelent. A preklinikai vetélést úgy határozták meg, hogy két egymást követő pozitívan emelkedő (> 15 NE/ml) szérum hCG-szint, de nem volt FHB legalább 6 héttel az embriótranszfer után. Klinikai terhességet úgy határoztak meg, mint egy méhen belüli terhességi zsák pozitív magzati szívműködéssel, amelyet az embriótranszfer után legalább 6 héttel végzett ultrahangvizsgálattal észleltek. A vetélést a terhesség 20. hete előtt bekövetkezett elvesztéseként határozták meg. Az élveszületési arányt az élve születések számaként határozták meg 100 megkezdett ciklusonként, aspirációs ciklusonként vagy embriótranszfer ciklusonként (Zeghers-Hochschild et al., 2006).

Végpont Az elsődleges eredmény az élve születési arány volt. Statisztikai elemzés Az elemzést a kezelési szándéknak megfelelően végeztük. A leíró statisztikákhoz átlag±SD-t használtunk. A folyamatos változókat t-próbával elemeztük független mintákra. A kategorikus változókat khi-négyzet teszttel elemeztük. Minden teszt kétoldalú volt, és a 0,05-nél kisebb P-érték statisztikai szignifikanciát jelent. Csoportos szekvenciális módszerekkel kiszámítottuk, hogy az egyes csoportokba 447 beteg bevonása 80%-os statisztikai erőt adna a vizsgálatnak arra, hogy 10%-os abszolút különbséget észleljen a csoportok szállítási arányában 0,05 alfa-szinten a használat mellett. egy kétoldalas z-próba.