Mesenchymális őssejtek az ágyéki degeneratív porckorong betegséghez

Csontvelő aspirációs és sejttenyésztési eljárás

Fluoroszkópos irányítást használva egy koaxiális tűt továbbítanak a csontvelőbe. A belső részt eltávolítjuk, és 10-20 ml csontvelőt leszívunk.

Az MSC-ket a Case Western Reserve Egyetem Nemzeti Regeneratív Orvostudományi Központjában/Seidman Cancer Center Cellular Therapy Lab-ban izolálják és tenyésztik a folyamatban lévő IND-ben meghatározott szabványos működési eljárások alkalmazásával – a fentiek szerint.

MSC szállítási/átültetési eljárás

Fluoroszkópos irányítást használva egy tűt továbbítanak az érintett lemez(ek) külső gyűrűjéhez. A koaxiális horgonyon keresztül a tű a korong középső 1/3-ához kerül előre, és két síkban (AP és oldalsó) megerősítésre kerül.

Az infúzió napján az MSC-ket a Cellular Therapy Labból az IR-készletbe szállítják egy validált száraz szállítóeszközön. Az MSC-ket 37 °C-os vízfürdőben felolvasztják, és 1 ml-es fecskendőkbe szívják. Szállítás előtt az infúzióval bevitt termék egy alikvot részét életképességre tesztelik (tripánkék kizárás). Sejtátültetés esetén az életképességnek >70%-nak kell lennie. Az első kezelési csoport 1-2 ml 2 x 106/ml koncentrációjú MSC-oldatot, a 2. kezelési csoport pedig 1-2 ml 4 x 106/ml koncentrációjú MSC-oldatot kap. Mindkét kezelési csoportot időszakos fluoroszkópos megfigyelés mellett injekciózzák. Manométert fognak használni a tárcsanyomások figyelésére, különösen az MSC befecskendezése során, miközben a nyomást 100 psi alatt tartják. Konkrétan az injekció térfogatát három dinamikus tényező alapján határozzák meg: a diszkográfia alatti kontraszttérfogat valós idejű képalkotása, az injekció során mért psi (<100) és a beteg tünetei (ha a beteg fájdalma meghaladja a kiindulási értéket, az injekciót leállítják ) - a hozzárendelt koncentráció 2 cm3 térfogatáig.

Az infúziós készítmény egy alikvot részét benyújtják a University Hospitals Cleveland Medical Center Mikrobiológiai Laboratóriumának a mikrobiológiai szennyeződés vizsgálata céljából. Pozitív mikrobiális teszt esetén a sejtes termék beadását követően: 1) A Vezető Kutatót és megbízottját értesítik, és értesítik a résztvevőt, 2) A szennyező anyagot fajszintig azonosítják, és meghatározzák az antibiotikum érzékenységet, 3) ) A Sejtterápiás Laboratórium orvosigazgatója és/vagy a vizsgálatvezető határozza meg a legjobb intézkedést a klinikai helyzet alapján. Ez magában foglalhatja a vértenyészeteket, a profilaktikus antibiotikumok beadását és a sejtterméken végzett ismételt tenyészeteket. 4) Vizsgálatot végeznek a szennyezés forrásának meghatározására, és megteszik a megfelelő korrekciós intézkedéseket. Végül a nemkívánatos eseményt jelenteni fogják az IRB-nek és az FDA-nak a vonatkozó szövetségi és intézményi jelentéstételi követelmény, valamint a jóváhagyott adatbiztonsági felügyeleti testület alapszabálya alapján.

MRI/Kvantitatív MRI eljárás

Az ágyéki gerinc rutinfelvételei (sagittalis és axiális T1 és T2 súlyozott képek) a következő célokra készülnek: A sejtek lehetséges alternatív hatásainak megfigyelése, beleértve az oszteofiták képződését, valamint bármilyen váratlan helyi eredményt. Ezenkívül egy kvantitatív MRI, beleértve az ujjlenyomat-vételt. A mágneses rezonancia ujjlenyomat (MRF) lehetővé teszi a T1 és T2 relaxációs idők gyors és egyidejű számszerűsítését. Az MRF szekvencia többféle MR adatgyűjtési paraméteren alapul [pl. flipszög (FA) és ismétlési idő (TR)] álvéletlen módon, így a szöveti tulajdonságok minden egyes kombinációjához egyedi jelfejlődés, úgynevezett "ujjlenyomat" jön létre. Ezeket az ujjlenyomatokat összehasonlítja a szimulált ujjlenyomatok szótárával, amelyet az adott sorozathoz egy mintaillesztési eljárással generálnak. Amint megvan a mintaegyezés, a szótárbejegyzés létrehozásához használt T1 és T2 értékeket a rendszer az adott voxelhez rendeli, és felhasználja a T1 és T2 térképek létrehozásához, amelyek anatómiailag tökéletesen együtt vannak regisztrálva.

A gerinc esetében a javasolt MRF-szekvencia egy többszeletű gyors képalkotáson, folyamatos Precesszióval (FISP) alapul. A szkennelés szagittális és axiális síkban is megtörténik, többszeletű adatgyűjtéssel. A szkennelési paraméterek a következők:

FOV: 400 mm, mátrix 400 x 400 mm, TR/TE: 13-15 ms, síkbeli felbontás 1 x 1 mm, metszetvastagság 5 mm, billenési szög 5-75 fok, felvételi idő ~ 39 másodperc szeletenként, ~ 4 perc pásztázási idő egy 5 szeletes szagittális képhez. Axiális síkban a porckorongot minden csigolyaközi szinten 4-5 keresztirányú szeletben fedjük le, és minden axiális felvétel körülbelül 3 percet vesz igénybe.

Az MRF-térképeket közvetlenül DICOM-képként generálnák a Gadgetron online rekonstrukció segítségével. A képelemzést egy DICOM megtekintő szoftverrel végeznék, hogy érdekes régiókat (ROI) rajzoljanak a nucleus pulposuson a relaxációs idők közvetlen számszerűsítésére. Lehetőség van MRF térképek előállítására a Matlab nyers adataiból, amelyek ROI-k rajzolására is használhatók a T1 és T2 relaxációs idők egyidejű számszerűsítésére.

Ezeket az értékeket a kezelés előtti és utáni MRI-n számítják ki.