Malattia residua minima come possibile fattore predittivo di recidiva in pazienti con amiloidosi AL

Questo protocollo valuterà i pazienti con amiloidosi AL che ottengono una CR o VGPR alla terapia di prima linea per l'evidenza di MRD mediante Q-PCR, NGS e analisi delle proteine ​​plasmatiche mediante spettrometria di massa utilizzando cellule del midollo ottenute annualmente ai tempi delle valutazioni cliniche standard.

Verrà utilizzato un campione di aspirato di midollo osseo dalla diagnosi per creare un profilo di base della malattia di ciascun paziente. Questo campione consentirà agli investigatori di creare i set di primer-sonda richiesti per il test MRD mediante Q-PCR, che sarà condotto dopo che il paziente ha raggiunto un CR o VGPR. Un campione di biopsia del midollo osseo di base verrà prelevato al momento del consenso o può essere prelevato dalla conservazione se il paziente ha precedentemente acconsentito alla conservazione delle cellule del midollo per scopi di ricerca. Verranno prelevati altri 15 ml di aspirato dalla loro biopsia diagnostica del midollo osseo, che viene regolarmente condotta su pazienti di nuova diagnosi per scopi clinici. Gli aspirati annuali di midollo osseo non verranno prelevati a scopo di ricerca fino a quando il paziente non avrà risposto. I pazienti rimarranno nel protocollo, ma inizieranno il test MRD solo dopo aver raggiunto una CR o VGPR per la terapia di prima linea, a quel punto inizieranno le raccolte annuali di midollo per il test MRD. Nel caso in cui il paziente non raggiunga una CR o una VGPR alla terapia di prima linea, l'aspirato midollare basale dalla diagnosi verrà scartato.

I pazienti che scelgono di consentire l'utilizzo del proprio midollo in questo studio firmeranno un modulo di consenso specifico per questo studio. Al momento del consenso, saranno ottenute tre provette verdi di sangue periferico per WGS di cellule non tumorali. Non saranno richiesti ulteriori campioni di sangue per questo studio. Dopo aver raggiunto una CR o una VGPR, i pazienti verranno completamente riorganizzati come standard di cura a intervalli annuali. I campioni per testare la presenza di MRD nei loro midolli saranno ottenuti in questi tempi di ri-stadiazione clinica fino a 3 anni dopo la loro risposta alla terapia. Entrambi i campioni di sangue e midollo osseo per questo studio verranno immediatamente portati in un laboratorio in loco dove verranno conservati brevemente prima del test. Ciò garantirà che nessun campione di studio interferisca con le cure cliniche di routine.

Per testare la presenza di MRD verranno utilizzate tre tecniche: Q-PCR, WGS e analisi delle proteine ​​plasmatiche mediante spettrometria di massa. Sia Q-PCR che WGS utilizzeranno DNA genomico da campioni di aspirato midollare. Per creare set di primer-sonda per Q-PCR, verranno utilizzati campioni di midollo osseo dal basale per creare set di primer-sonda individualizzati in grado di riconoscere il gene LC geneticamente unico che causa la malattia di ciascun paziente. Per eseguire WGS, il DNA genomico verrà fornito al laboratorio di genetica principale per la creazione di una libreria e il sequenziamento multiplex di nuova generazione. Per eseguire l'analisi delle proteine ​​plasmatiche, il plasma sarà isolato da una porzione di sangue periferico e campioni di aspirato di midollo osseo di ciascun soggetto in un laboratorio in loco. La sequenza del gene LC deidentificato di ciascun soggetto e i loro campioni di plasma deidentificati verranno quindi inviati al Memorial Sloan-Kettering Cancer Center (MSKCC) per la spettrometria di massa per cercare sequenze proteiche frammentarie associate al gene LC colpevole di ciascun soggetto.

Dopo aver raggiunto una CR o una VGPR, alle valutazioni annuali per un massimo di 3 anni, il DNA genomico del campione di ricerca di midollo osseo raccolto durante le procedure cliniche standard di cura verrà utilizzato per confermare il mantenimento della risposta testando la presenza di MRD con ciascuna dei 3 metodi (Q-PCR, WGS e analisi delle proteine ​​plasmatiche) indicati sopra. Il materiale del midollo raccolto per gli scopi di questo studio non verrà conservato dopo l'analisi e la progettazione del set di primer-sonda sarà condotta interamente all'interno del Tufts Medical Center. Eventuali campioni di midollo non completamente consumati durante l'analisi verranno distrutti.

Utilizzando questi tre metodi, questo protocollo determinerà se un metodo è superiore agli altri e se i tre metodi producono risultati correlati tra loro. La decisione di interrompere la partecipazione al test MRD sarà presa dal paziente e dal medico su base individuale. I pazienti che presentano recidiva o progressione ematologica della malattia durante il periodo di tre anni mediante esami standard del sangue e delle urine non saranno più sottoposti a test per la MRD.