Minimale Resterkrankung als möglicher prädiktiver Faktor für einen Rückfall bei Patienten mit AL-Amyloidose

Dieses Protokoll bewertet AL-Amyloidose-Patienten, die eine CR oder VGPR bis zur Erstlinientherapie erreichen, auf den Nachweis einer MRD durch Q-PCR, NGS und Plasmaproteinanalyse durch Massenspektrometrie unter Verwendung von Markzellen, die jährlich zu Zeiten klinischer Standardbewertungen entnommen werden.

Eine Knochenmarksaspiratprobe aus der Diagnose wird verwendet, um ein Grundlinienprofil der Krankheit jedes Patienten zu erstellen. Diese Probe ermöglicht es den Forschern, die Primer-Sonden-Sets zu erstellen, die für MRD-Tests durch Q-PCR erforderlich sind, die durchgeführt werden, nachdem der Patient eine CR oder VGPR erreicht hat. Eine Basis-Knochenmarkbiopsieprobe wird entweder zum Zeitpunkt der Einwilligung entnommen oder kann aus der Lagerung entnommen werden, wenn der Patient zuvor eingewilligt hat, dass seine Markzellen zu Forschungszwecken in einer Bank aufbewahrt werden. Zusätzliche 15 ml Aspirat werden aus ihrer diagnostischen Knochenmarkbiopsie entnommen, die routinemäßig bei neu diagnostizierten Patienten für klinische Zwecke durchgeführt wird. Jährliche Knochenmarksaspirate werden nicht zu Forschungszwecken entnommen, bis der Patient angesprochen hat. Die Patienten bleiben im Protokoll, beginnen jedoch erst mit MRD-Tests, nachdem sie eine CR oder VGPR für die Erstlinientherapie erreicht haben. Zu diesem Zeitpunkt beginnt die jährliche Knochenmarkentnahme für MRD-Tests. Für den Fall, dass der Patient kein CR oder VGPR für die Erstlinientherapie erreicht, wird das Ausgangs-Knochenmarkaspirat aus der Diagnose verworfen.

Patienten, die sich für die Verwendung ihres Knochenmarks in dieser Studie entscheiden, müssen eine Einverständniserklärung speziell für diese Studie unterschreiben. Zum Zeitpunkt der Zustimmung werden drei Röhrchen mit grünem Verschluss mit peripherem Blut für WGS von Nicht-Tumorzellen erhalten. Für diese Studie sind keine weiteren Blutproben erforderlich. Nach Erreichen einer CR oder VGPR werden die Patienten in jährlichen Abständen vollständig neu eingeteilt, wie es der Behandlungsstandard ist. Proben zum Testen auf das Vorhandensein von MRD in ihrem Knochenmark werden zu diesen Zeitpunkten der klinischen Re-Staging für bis zu 3 Jahre nach ihrem Ansprechen auf die Therapie entnommen. Sowohl Blut- als auch Knochenmarkproben für diese Studie werden sofort in ein Labor vor Ort gebracht, wo sie vor dem Test kurz gelagert werden. Dadurch wird sichergestellt, dass keine Studienproben die routinemäßige klinische Versorgung beeinträchtigen.

Um das Vorhandensein von MRD zu testen, werden drei Techniken verwendet: Q-PCR, WGS und Plasmaproteinanalyse durch Massenspektrometrie. Sowohl Q-PCR als auch WGS verwenden genomische DNA aus Knochenmarksaspiraten. Um Primer-Sonden-Sets für die Q-PCR herzustellen, werden Knochenmarksproben von der Basislinie verwendet, um individualisierte Primer-Sonden-Sets zu erstellen, die das genetisch einzigartige LC-Gen erkennen können, das die Krankheit jedes Patienten verursacht. Zur Durchführung von WGS wird genomische DNA an das Kerngenetiklabor zur Erstellung einer Bibliothek und Multiplex-Sequenzierung der nächsten Generation geliefert. Um eine Plasmaproteinanalyse durchzuführen, wird Plasma aus einem Teil der peripheren Blut- und Knochenmarksaspiratproben jedes Probanden in einem Labor vor Ort isoliert. Die anonymisierte LC-Gensequenz jeder Person und ihre anonymisierten Plasmaproben werden dann zur Massenspektrometrie an das Memorial Sloan-Kettering Cancer Center (MSKCC) gesendet, um nach fragmentarischen Proteinsequenzen zu suchen, die mit dem schuldigen LC-Gen jeder Person assoziiert sind.

Nach Erreichen einer CR oder VGPR wird bei jährlichen Bewertungen für bis zu 3 Jahre die genomische DNA aus der Forschungsprobe des Knochenmarks, die während klinischer Standardverfahren entnommen wurde, verwendet, um die Aufrechterhaltung des Ansprechens zu bestätigen, indem bei jedem auf das Vorhandensein von MRD getestet wird der 3 oben genannten Methoden (Q-PCR, WGS und Plasmaproteinanalyse). Das für die Zwecke dieser Studie gesammelte Knochenmarkmaterial wird nach der Analyse nicht gelagert, und das Design des Primer-Sonden-Sets wird vollständig im Tufts Medical Center durchgeführt. Alle Markproben, die während der Analyse nicht vollständig verbraucht wurden, werden vernichtet.

Durch die Verwendung dieser drei Methoden bestimmt dieses Protokoll, ob eine Methode den anderen überlegen ist und ob die drei Methoden Ergebnisse liefern, die miteinander korrelieren. Die Entscheidung, die Teilnahme an MRD-Tests einzustellen, wird individuell vom Patienten und dem Arzt getroffen. Patienten, die während des Dreijahreszeitraums einen Rückfall oder ein hämatologisches Fortschreiten der Krankheit durch standardmäßige Blut- und Urintests aufweisen, werden nicht länger auf MRD getestet.