Modulazione del microbiota intestinale degli atleti professionisti con integrazione di crauti (KOMS)

Materiale, partecipanti, metodologia e piano di ricerca Oggetto della ricerca saranno gli interventi con i crauti per modulare il microbiota intestinale come simbiotico come sostanza il cui effetto è stato stabilito in precedenti ricerche scientifiche sull'uomo e che, a causa della bassa incidenza di effetti collaterali, sono stati valutati come generalmente sicuri. L'intervento farà riferimento all'utilizzo dei crauti. Durante 10 giorni, i soggetti consumeranno circa 250 g di crauti (Brassica oleracea v. capitata) al giorno. Il materiale di ricerca è una donazione della società Eko Bio Zrnje, Vrbovec, Croazia. Si tratta di cavolo cappuccio grattugiato prodotto mediante fermentazione in soluzione salina (NaCl) in cui la fermentazione è stata interrotta mediante pastorizzazione ed è stato confezionato in vasetti di vetro da 500 g. La composizione nutrizionale e microbiologica è stata testata dai laboratori della Facoltà di Alimenti e Biotecnologie, così come l'approccio colturale del laboratorio ha confermato la presenza di batteri che producono acido lattico (4,82·103 (±2,31) unità formanti colonie/mL) con potenziale probiotico grazie al quale questo prodotto può essere considerato un simbiotico. Inoltre, i crauti sono stati analizzati utilizzando i metodi del siero di capra normale dello stato epilettico generalizzato non convulsivo della stella guida naturale dell'acido ribonucleico ribosomiale 16s in base alla presenza di materiale genetico batterico al suo interno. Per quanto riguarda la pastorizzazione, i crauti non dovranno essere trasportati e conservati secondo il principio della catena del freddo. I risultati dell'intervento riguardanti la modulazione del microbiota intestinale saranno confrontati con quelli della ricerca precedente in cui l'oggetto della ricerca era la modulazione del microbiota intestinale da parte della fibra solubile NUTRIOSE negli atleti professionisti. NUTRIOSE sono maltodestrine resistenti, ovvero fibre solubili non viscose ottenute da grano e mais (Roquette Freres, Lestrem, Francia) con comprovata azione prebiotica.

intervistati Ai fini della ricerca, verrà formata una coorte con un minimo di nove intervistati - atleti professionisti. Per il campione di intervistati sono state determinate le condizioni tecniche, logistiche e finanziarie della ricerca e si basa sul fatto che il confronto con coorti di 9 soggetti di uno studio precedente (NCT05726435) che erano stati esposti all'intervento con prebiotici e controllati con placebo con l’obiettivo modulazione del microbiota intestinale degli atleti professionisti. Il reclutamento degli intervistati sarà effettuato in collaborazione con i partner di ricerca (HOO) e dall'ambiente sociale del ricercatore utilizzando un questionario online.

Metodologia

Metodi di lavoro: metodi dietetici, metodi antropometrici e raccolta e analisi di campioni di sangue venoso e feci. Il campione delle variabili è composto da: un campione di feci per il sequenziamento del microbiota intestinale, un campione di sangue venoso per le elaborazioni di laboratorio, misure per la valutazione delle caratteristiche morfologiche (altezza corporea, massa corporea, percentuale di tessuto adiposo e tessuto muscolare calcolate utilizzando il metodo analizzatore di composizione corporea - bioimpedenza TANITA). Verranno utilizzati metodi dietetici per controllare l'assunzione di tutti i nutrienti prima e durante l'intervento, nonché durante la fase di follow-up. Dal metodo sarà un diario alimentare (sette giorni e dieci giorni). Tutti i dati dietetici raccolti verranno elaborati attraverso l’atlante Capnutr dei prodotti alimentari e dei piatti pronti della regione dei Balcani (Glibetić et al., 2018).

Piano di ricerca La ricerca è stata progettata come uno studio prospettico di coorte. La ricerca sarà condotta in conformità con le norme della Dichiarazione di Helsinki e in conformità con l'approvazione del Comitato Etico della Facoltà di Medicina dell'Università di Zagabria del 27.3.2023. La ricerca sarà condotta in due fasi: nella prima fase i soggetti verranno integrati con crauti per dieci giorni, nella seconda fase di un mese verrà monitorato il microbiota intestinale senza tentare di modulare il microbiota intestinale ("wash -fuori"). In collaborazione con HOO e partner accademici e commerciali, gli atleti professionisti saranno invitati a compilare il modulo virtuale "Atleti e microbioma intestinale", ovvero un questionario sulla conoscenza degli atleti riguardo al microbioma intestinale. Il trattamento dei dati identificherà potenziali candidati alla Ricerca. I candidati verranno contattati telefonicamente, informati sulla ricerca e valutati in una breve conversazione riguardante i criteri di attivazione e disattivazione. I candidati che soddisfano i criteri saranno inclusi nella coorte. Dopo la costituzione della coorte verranno presi gli accordi logistici e il piano degli studi. Lo studio sarà suddiviso in tre fasi: prima, durante e dopo l'intervento. Innanzitutto, i soggetti verranno informati sul piano di studi (tempo, numero di visite, logistica) per il quale è stato ottenuto il consenso informato. Nella fase pre-intervento è previsto un incontro nel quale verrà spiegato più volte il piano e lo svolgimento dello studio, definite le scadenze e distribuite le attrezzature per il prelievo del campione e l'invio della modulistica prevista (Excel, Microsoft Office, USA). Nella continuazione della prima fase, gli intervistati registreranno l'assunzione giornaliera di cibo, la durata e l'intensità dell'attività fisica, nonché la durata del sonno. Allo stesso modo, questionari sulla qualità della dieta (DQQ), un questionario sulla conoscenza della nutrizione e un questionario sul cronotipo. Il giorno prima dell'inizio dell'intervento, i soggetti forniranno un campione di feci e di sangue, quindi completeranno l'assunzione giornaliera accettabile. Durante l'intervento gli intervistati sono in continua comunicazione con il team di ricercatori. In un modulo appositamente predisposto, registrano l'aderenza all'intervento (dati i tempi di assunzione di cavolo, ad esempio) e gli eventuali effetti collaterali (cambiamenti nelle feci, flatulenza, flatulenza) nonché il tipo di feci secondo la scala Bristol . Durante l'intervento i soggetti continuano a tenere un diario della dieta, dell'esercizio fisico e del sonno. Dopo l'intervento, viene nuovamente prelevato un campione di sangue e un campione della prima seduta dopo l'intervento, secondo lo stesso principio di prima dell'intervento. Allo stesso modo, gli intervistati compileranno nuovamente l'ADI. Nella seconda fase di ricerca i soggetti rimangono in comunicazione con i ricercatori, e due mesi dopo l'ultimo campione di feci viene prelevato nuovamente un campione di feci dal soggetto e viene eseguita nuovamente l'analisi del microbiota intestinale. Durante l'elaborazione dei dati, i risultati di questa ricerca verranno confrontati con i risultati della ricerca precedente, che è diversa da questa ricerca che ha utilizzato prebiotici e non simbiotici nell'intervento. Ricerche precedenti registrate su ClinicalTrials.gov Il registro n. NCT05726435 è stato progettato come uno studio di intervento randomizzato controllato con placebo. Gli intervistati, atleti professionisti, durante le 4 settimane, un gruppo ha ricevuto prebiotici, fibre NUTRIOSE o un placebo nella quantità di 20 g suddivisi in due dosi da 10 g ciascuna. Le analisi del microbiota intestinale sono state eseguite in più occasioni durante l'intervento descritto. I risultati di questa ricerca verranno confrontati specificamente con i risultati dell'analisi del microbiota intestinale in due momenti: dopo 2 settimane dall'intervento e 8 settimane dall'inizio dell'intervento, quando i soggetti erano 4 settimane senza prebiotici o placebo dopo la intervento stesso.

Modalità del trattamento dei dati:

Le differenze tra le variabili categoriali verranno testate utilizzando il test del chi quadrato. Verranno esaminate le differenze tra variabili non categoriche, a seconda della distribuzione e del numero di gruppi, del t-test per dati appaiati nonché del test U di Kruskal-Wallis e Mann-Whitney e quindi del test di Bonferoni per l'analisi post hoc.

Al fine di esaminare possibili correlazioni verrà utilizzato il calcolo dei coefficienti di correlazione di Pearson tra parametri di stato nutrizionale, composizione corporea e dieta. I questionari saranno validati calcolando il coefficiente alfa di Cronbach per ciascuno dei loro elementi e attraverso un'analisi esplorativa a un fattore, e la coerenza interna sarà determinata calcolando i coefficienti di correlazione di Pearson tra i singoli elementi del questionario. Le quote relative delle singole categorie tassonomiche verranno utilizzate per calcolare l'indice di diversità di Shannon-Wiener al fine di confrontare la diversità tra il gruppo di campioni prima e dopo l'intervento. L'analisi dei cluster verrà eseguita utilizzando il programma BioNumerics (Applied Maths, Belgio) basato sui modelli di polimorfismo della lunghezza dei frammenti di restrizione I di Haemophilus haemolyticus e dei polimorfismi della lunghezza dei frammenti di restrizione T di MSPi. I valori P inferiori a 0,05 saranno considerati statisticamente significativi. Per l'elaborazione statistica dei dati verrà effettuata utilizzando il programma SPSS 19.0 (IBM, Chicago, USA).