Modulação da microbiota intestinal de atletas profissionais com suplementação de chucrute (KOMS)

Material, participantes, metodologia e plano de pesquisa O tema da pesquisa serão intervenções com chucrute para modular a microbiota intestinal como simbiótico como substância cujo efeito foi estabelecido em pesquisas científicas anteriores em humanos, e que, devido à baixa incidência de efeitos colaterais, foram avaliados como geralmente seguros. A intervenção se referirá ao uso de chucrute. Durante 10 dias, os sujeitos consumirão aproximadamente 250 g de chucrute (Brassica oleracea v. capitata) diariamente. O material de pesquisa é uma doação da empresa Eko Bio Zrnje, Vrbovec, Croácia. Trata-se de picles de repolho ralado produzido por fermentação em solução salina (NaCl) cuja fermentação foi interrompida por pasteurização e acondicionado em potes de vidro de 500g. A composição nutricional e microbiológica foi testada pelos laboratórios da Faculdade de Alimentos e Biotecnologia, bem como pela abordagem laboratorial cultural confirmou a presença de bactérias produtoras de ácido láctico (4,82·103 (±2,31) unidades formadoras de colônia/mL) com potencial probiótico devido ao qual este produto pode ser considerado um simbiótico. Além disso, o chucrute foi analisado usando ácido ribossômico ribonucleico 16s, estrela guia natural, sequenciamento de próxima geração, estado epiléptico generalizado não convulsivo, métodos normais de soro de cabra quanto à presença de material genético de bactérias dentro dele. No que diz respeito à pasteurização, o chucrute não necessitará de transporte e armazenamento de acordo com o princípio da cadeia de frio. Os resultados da intervenção quanto à modulação da microbiota intestinal serão comparados com os da pesquisa anterior em que o tema da pesquisa foi a modulação da microbiota intestinal pela fibra solúvel NUTRIOSE em atletas profissionais. NUTRIOSE são maltodextrina resistente, ou seja, fibras solúveis não viscosas obtidas de trigo e milho (Roquette Freres, Lestrem, França) com ação prebiótica comprovada.

respondentes Para fins da pesquisa, será formada uma coorte com no mínimo nove respondentes – atletas profissionais. A amostra de entrevistados foi determinada pelas condições técnicas, logísticas e financeiras da pesquisa, e se baseia no fato de que a comparação com coortes de 9 sujeitos de um estudo anterior (NCT05726435) que foram expostos à intervenção com prebióticos e controlados por placebo com o objetivo modulação da microbiota intestinal de atletas profissionais. O recrutamento dos entrevistados será realizado em cooperação com parceiros de pesquisa (HOO) e no meio social do pesquisador por meio de um questionário online.

Metodologia

Métodos de trabalho: métodos dietéticos, métodos antropométricos e colheita e análise de amostras de sangue venoso e fezes. A amostra de variáveis ​​é composta por: amostra de fezes para sequenciamento da microbiota intestinal, amostra de sangue venoso para processamento laboratorial, medidas para avaliação de características morfológicas (altura corporal, massa corporal, percentual de tecido adiposo e de tecido muscular calculado pelo analisador de composição corporal - bioimpedância TANITA). Métodos dietéticos serão utilizados para controlar a ingestão de todos os nutrientes antes e durante a intervenção, bem como durante a fase de acompanhamento. Do método será feito um diário alimentar (sete dias e dez dias). Todos os dados dietéticos recolhidos serão processados ​​através do atlas Capnutr de alimentos e refeições prontas da região dos Balcãs (Glibetić et al., 2018).

Plano de pesquisa A pesquisa foi desenhada como um estudo de coorte prospectivo. A pesquisa será realizada em conformidade com os regulamentos da Declaração de Helsinque e de acordo com a aprovação do Comitê de Ética da Faculdade de Medicina da Universidade de Zagreb em 27.3.2023. A pesquisa será realizada em duas fases: na primeira fase, os sujeitos serão suplementados com chucrute por dez dias, e na segunda fase de um mês serão monitorados a microbiota intestinal sem tentativa de modular a microbiota intestinal ("lavar -fora"). Em cooperação com a HOO e parceiros académicos e empresariais, os atletas profissionais serão convidados a preencher o formulário virtual “Atletas e microbioma intestinal”, ou seja, um questionário sobre o conhecimento dos atletas sobre o microbioma intestinal. O processamento de dados identificará potenciais candidatos para pesquisa. Os candidatos serão contatados por telefone, informados sobre a pesquisa e avaliados em breve conversa quanto aos critérios de ativação e desativação. Os candidatos que atenderem aos critérios serão incluídos na coorte. Após a constituição da coorte, serão feitos arranjos logísticos e plano de estudos. O estudo será dividido em três fases: antes, durante e depois da intervenção. Primeiramente, os sujeitos serão informados sobre o plano de estudo (tempo, número de visitas, logística) para o qual o consentimento informado foi obtido. Na fase de pré-intervenção, haverá uma reunião em que mais uma vez será explicado o plano e andamento do estudo, definidos os prazos e distribuídos os equipamentos para coleta da amostra e enviado os formulários fornecidos (Excel, Microsoft Office, EUA). Na continuação da primeira fase, os entrevistados registrarão a ingestão diária de alimentos, a duração e a intensidade da atividade física, bem como o tempo de sono. Da mesma forma, questionários sobre a questão da qualidade da dieta (DQQ), um questionário sobre conhecimentos sobre nutrição e questionário de cronotipo. No dia anterior ao início da intervenção, os sujeitos fornecerão uma amostra de fezes e sangue e, em seguida, preencherão a ingestão diária aceitável. Durante a intervenção os entrevistados estão em comunicação contínua com a equipe de pesquisadores. Em formulário especialmente fornecido, registram a adesão à intervenção (dados do horário de ingestão do repolho, por exemplo) e possíveis efeitos colaterais (alterações nas fezes, flatulência, gases), bem como o tipo de fezes de acordo com a escala de Bristol . Durante a intervenção, os sujeitos continuam a manter um diário de dieta, exercícios e sono. Após a intervenção, dão novamente uma amostra de sangue e uma amostra da primeira cadeira após a intervenção, seguindo o mesmo princípio de antes da intervenção. Da mesma forma, os respondentes preencherão novamente a ADI. Na segunda fase, os sujeitos da pesquisa permanecem em comunicação com os pesquisadores, e dois meses após a última amostra de fezes é coletada novamente uma amostra de fezes do sujeito e a análise da microbiota intestinal é realizada novamente. Durante o processamento dos dados, os resultados desta pesquisa serão comparados com os resultados da pesquisa anterior, que é diferente desta pesquisa utilizou prebióticos e não simbióticos na intervenção. Pesquisa anterior registrada no ClinicalTrials.gov registro sob o número NCT05726435 foi concebido como um estudo de intervenção randomizado controlado por placebo. Os entrevistados, atletas profissionais, durante as 4 semanas, um grupo recebeu prebióticos, fibras NUTRIOSE ou placebo na quantidade de 20g divididos em duas doses de 10g cada. Análises da microbiota intestinal foram realizadas em diversas ocasiões durante a intervenção descrita. Os resultados desta pesquisa serão comparados especificamente com os resultados da análise da microbiota intestinal em dois momentos: após 2 semanas da intervenção e 8 semanas do início da intervenção, quando os sujeitos ficaram 4 semanas sem prebióticos ou placebo após o intervenção em si.

Métodos de processamento de dados:

As diferenças entre as variáveis ​​​​categóricas serão testadas por meio do teste do qui-quadrado. As diferenças entre variáveis ​​​​não categóricas serão examinadas, dependendo da distribuição e número de grupos, teste t pareado, bem como teste U de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney e depois teste de Bonferoni para análise post hoc.

Para examinar possíveis correlações, será utilizado o cálculo dos coeficientes de correlação de Pearson entre parâmetros do estado nutricional, composição corporal e dieta. Os questionários serão validados pelo cálculo do coeficiente alfa de Cronbach para cada um de seus itens e por meio de análise exploratória unifatorial, e a consistência interna será determinada pelo cálculo dos coeficientes de correlação de Pearson entre os itens individuais do questionário. As participações relativas das categorias taxonômicas individuais serão utilizadas para calcular o índice de diversidade de Shannon-Wiener, a fim de comparar a diversidade entre o grupo de amostras antes e depois da intervenção. A análise de cluster será realizada usando o programa BioNumerics (Applied Maths, Bélgica) com base nos padrões de endonuclease de restrição I de Haemophilus haemolyticus e padrões de polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição T MSPi. Valores de P abaixo de 0,05 serão considerados estatisticamente significativos. Para o tratamento estatístico dos dados será realizado utilizando o programa SPSS 19.0 (IBM, Chicago, EUA).