慢性閉塞性肺疾患（COPD）患者における気管支拡張症：予防の役割

研究の目的

前述のように、研究プログラムの目的は次のとおりです。

• 慢性閉塞性肺疾患に罹患した患者における気管支拡張症の有病率の定義。
• 気管支拡張症患者を特定した後、非気管支拡張症患者と比較して、このサブグループの病態生理学的意味、微生物学的および炎症性の特徴を評価します。
• 最後に、この研究は、吸入ステロイドと抗生物質による長期治療が疾患の自然史とその病態生理学的意味に及ぼす影響に対処します。 これらの目的のために、調査は 2 つのセクションに分けられます。 第 1 セクションでは、400 人の COPD 患者が募集されます。 これらの患者では、CT スパイラル スキャンを使用して気管支拡張症の有病率を評価する予定です。 また、リアルタイム PCR および ELIspot 技術による細菌のコロニー形成、および気管支拡張症のある患者とない患者を比較する非侵襲的方法 (呼気凝縮液) による気道炎症も検出します。

気管支拡張症のCOPD患者：

この集団では、さまざまな「予防」、つまりマクロライドと吸入ステロイドの効果を研究します。

提案された介入の詳細 STABLE COPD 患者は、登録のために午前中にクリニックに出席し、書面によるインフォームドコンセントを提供します。 訪問中、病歴が記録され、被験者はベースライン時およびサルブタモール200 mcg後の身体検査および肺機能検査を受けます。 CTスキャン、呼気凝縮液、静脈穿刺も行われます。 喀痰サンプルは、細菌の定着評価のために取得されます。

呼吸器の評価:

肺機能検査は、Fleish No. 3 加熱気流計を使用して実行されます。プレチスモグラフ測定値、胸部ガス量 (TGV)、残気量 (RV)、総肺気量 (TLC) は、一定量 (850L) での電子 BTPS 補償を備えた体プレチスモグラフ (Werner Gut、バーゼル、スイス) を使用して評価されます。 . DLCO判定を行います。

CT スキャン 実行されたすべてのマルチスライス CT (MSCT) スキャンは、UO 4 によって集中的に分析されます。 次のプロトコルに従います

1. 3 つの所定のレベル (大動脈弓、気管分岐部、右基底共通静脈) を使用して、RV で 10 + 3 呼気スライスごとに 1 mm のスライスで TLC で吸気中の MSCT
2. 技術パラメータ: 120 kV、220 mA、フィルター ボーン、両方の肺を含む FOV、肺実質ウィンドウ (-600/1600 HU)
3. すべての CT は CD-ROM に保存されます 2 人の放射線科医が同じ CT を分析し、すべての不一致はコンセンサスによって解決されます

気管支拡張症の診断と評価は Webb らに従って行われます。 (1):

評価は、舌を含む葉ごとに行われます（合計葉= 6）

1. 肺葉基部の気管支拡張: 0、1 (肺葉の < 25%)、2 (25-50%)、3 (>50%) - MAX TOT 18
2. 気管支拡張症の重症度と種類、および隣接する動脈の直径と比較した半定量的: 0、1 (気管支の直径は動脈の直径の 100 ～ 200% に等しい)、2 (200 ～ 300%)、3 (> 300%) - MAX TOT 18
3. 気管支壁の厚さ: 0、1 (厚さ < 動脈直径の 50%)、2 (50-100%)、3 (管腔またはハイドロエア レベルの完全な閉塞) - MAX TOT 18
4. 肺気腫の評価（3段階（吸気）（大動脈弓、気管分岐部、静脈）の目視スコア）
5. 呼気中のエアトラッピングの評価（同上）
6. ブッレ
7. すりガラスエリア（視覚スコアによる拡張）
8. 細気管支炎: 流行部位、大葉病変、重症度 ( 0,1,2,3)
9. 肺動脈の直径 (> 2.9 cm の場合は病的)
10. その他の機能

呼気凝縮液：

呼気凝縮液は、呼気の非気体成分の非侵襲的収集を可能にする凝縮器を使用して収集されます（EcoScreen、Jaeger、ドイツ）。 被験者は、ノーズクリップを装着した状態で、入口に接続されたマウスピースから 8 分間呼吸します。 マウスピースは唾液トラップとしても使用されます。 呼気凝縮液約１ｍｌを収集し、－７０℃で保存する。ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－αおよびシステイニル－ロイコトリエン（ｃｙｓ－ＬＴ）を特異的酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）（ケイマン・ケミカル、ミシガン州アナーバー）。 さらに、以前に報告されたように、UO1 に登録された患者のサブセットに対してプロテオーム解析が行われます (2)。手短に言えば、一次元および二次元電気泳動が行われ、定性評価および質量分析分析のために、感作工程でグルタルアルデヒドおよび含浸溶液でホルムアルデヒドの有無にかかわらず、ゲルが硝酸銀で染色されます。 スポット ボリュームは、イメージ J 1.29x (W. Rasband、National Institutes of Health、Bethesda、Maryland) を 1 次元ゲルに使用し、PDQUEST (Biorad、Hercules、California) を使用して 2 次元ゲルを使用します。

血清サンプル:

血清アリコートを2つ並べ、分析時まで-20°Cで保存します。 ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－αおよびシステイニル－ロイコトリエン（ｃｙｓ－ＬＴ）は、特異的酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）によって測定される。

C反応性タンパク、プロカルシトニンも測定します(3)。 UO 1 ex-vivo Enzyme-Linked ImmunoSPOT (ELISPOT) アッセイは、抗原特異的 T 細胞応答を検出および定量化するための最も感度の高いツールであり、特定の抗原に応答して 1 つまたは複数のサイトカインを産生する T 細胞を検出および列挙できます。 . この技術は、結核菌 などの細胞内病原体に特に重点を置いて、感染症における少数の抗原特異的T細胞を検出するためにすでに使用されています 。 ELISPOT 技術は、HIV 感染を含む多くの感染症のモニタリングの標準的な基準になりつつあり、癌遺伝子ペプチドに対する抗原特異的 T 細胞免疫応答の検出など、高度な臨床免疫学的アプリケーションでますます使用されるようになっています。

提案されたプロジェクトのコンテキストでは、ELISPOT 技術を使用して、非結核性マイコバクテリアおよびその他の細胞内細菌 (Mycoplasma pneumoniae など) のペプチド プールを使用して、全身 (血液) および局所 (気管支肺胞洗浄) 抗原特異的応答の存在を検出します）、細菌（シュードモナス属など）、真菌（アスペルギルス種など）。 ELISPOT テストは、全血 (末梢単核細胞の Ficoll 分離後) および気管支肺胞細胞のサンプルに対して実行され、特定の抗原ペプチド プールと一晩インキュベーションした後、インターフェロン ガンマを産生する T 細胞の数を測定します。 (4-8)

喀痰採取:

自然喀痰のサンプルは、すべての患者から取得されます。 あるいは、Pizzichini ら (9) に従って誘発された喀痰を採取します。 要約すると、誘発喀痰は、超音波ネブライザー (Ultraneb 2000; DeVilbiss Healthcare Inc, Somerset, PS, USA) を使用して 3% の高張食塩水を 20 分間吸入した後に得られます。分類 (10) が処理されます。 喀痰サンプルは、PCR (定性分析) およびリアルタイム PCR (定量分析) 技術を使用した細菌 DNA 検出のために、-70°C で凍結されます。

次の細菌は、UO1 で使用されている標準プロトコルを使用して検出されます: インフルエンザ菌、カタラーリス菌、肺炎球菌、肺炎球菌、P.

緑膿菌、マイコプラズマ肺炎、クラミジア肺炎。 アリコートは、標準的な微生物学的手法を使用して培養されます 患者 400 人の患者が UO 1、2、3 e 5 で募集されます。 すべての CT スキャンは、UO 4 で収集および検査されます。UO2 は、二重盲検方式で 2 番目のオブザーバーとして機能します。不一致はコンセンサスによって解決されます。

安定した COPD 患者のサブグループ (n = 15) と、COPD および気管支拡張症の患者のサブグループ (n = 15) は、生検収集を伴う気管支鏡検査を受けます。 被験者はアトロピンで前投薬され、リドカインで局所麻酔されます。

気管支鏡検査は、柔軟な光ファイバー気管支鏡で行われます。 気管支生検は、右下葉の気管支基底部の気管分岐部から、標準鉗子を使用して気管支鏡を通して採取されます。 この領域から、患者ごとに 2 つの標本が得られます。 得られた気管支生検は、電子および光学顕微鏡分析（UO3およびUO 1）のために準備されます。

サンプルサイズ: 気管支拡張症の有病率が少なくとも 30% であると予想できます。これは、120 人の患者が研究の第 2 ステップに含まれることを意味します (11)。

気管支拡張症のCOPD患者：

この集団では、さまざまな「予防」、つまりマクロライドと吸入ステロイドの効果を研究します。 母集団は 12 か月間追跡されます。

次の手順は、3か月ごとおよび各増悪時に実行されます。

臨床評価、呼気凝縮液、血清サンプリング、喀痰採取。

生物学的サンプルでは、​​前述のすべての技術に加えて、腎および肝機能検査（安全性）が実施されます。

細菌叢と耐性パターンを評価するために喀痰培養が行われます。

研究のデザイン:

120 人の患者が 3 つのグループ (40 点) に無作為に割り付けられます。

1. 標準治療
2. アジスロマイシン 500 mg OD を週 3 日 (月曜日、水曜日、金曜日) 6 か月間、その後吸入ステロイド (フルチカゾン 500 ug 入札) を 6 か月間
3. 吸入ステロイド (フルチカゾン 500 ug 入札) を 6 か月間、次にアジスロマイシン 500 mg OD を週 3 日 (月曜日、水曜日、金曜日) 6 か月間

エンドポイント:

主要な

• 気管支炎症パラメーターに対する治療の効果
• 増悪頻度に対する治療の効果
• 肺機能に対する治療の効果

サンプルサイズ：

TNFα、IL6、IL8、およびシステイニル-ロイコトリエンのうち少なくとも 1 つについて、治療を受けた患者と治療を受けていない患者との間で 40% の差が生じると予想できます。 この場合、0.05 のアルファ エラーと 0.1 のベータに対して、35 人の治療を受けた患者 (各アーム) と 35 人の治療を受けていない患者が必要です。