COVID-19 重症患者における回復期血漿療法の有効性

寄付者向け:

マイクロタイター プレートは、4 μg/mL 組換え SARS-CoV-2 RBD (受容体結合ドメイン) タンパク質 (50 μL/ウェル) で 4 °C で一晩コーティングされます。 プレートを、0.1% vol/vol Tween-20(PBST) を含むリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) で 3 回洗浄し、ブロッキング溶液 (2% wt/vol 脱脂粉乳を含む PBS) で 37 ° で 2 時間ブロックします。 C. 次にプレートをＰＢＳＴで洗浄する。 血清サンプルは初期濃度として PBS で 200 倍に希釈し、血清の連続 3 倍希釈液をウェルに加え、37 °C で 60 分間インキュベートします。 3 回の洗浄後、100 μL の西洋わさびペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒト IgG (IgG 抗体価検出用) および IgM (IgM 抗体価検出用) 抗体溶液を各プレートにそれぞれ添加し、37 °C でインキュベートします。 60分。 5回洗浄した後、暗所で室温でテトラメチルベンジジン基質100μLを加える。 １５分後、２ＭＨ２ＳＯ４溶液（硫酸）で反応を停止する。 吸光度は 450nm で測定されます。 すべてのサンプルは 3 通で実行されます。 終点希釈によってＩｇＧ力価を決定する。

血清中和アッセイ Ｖｅｒｏ細胞（１０４）を感染の２４時間前に９６ウェルプレートに播種する。 感染当日、細胞を2回洗浄します。 患者の血清サンプルを 56 °C で 30 分間インキュベートした後、細胞培養培地 (改変イーグル培地) で 2 倍に希釈します。 希釈した血清サンプル (2 倍から 2056 倍まで) のアリコート (40 μL) を、96 ウェルプレート上のウイルス株の組織培養感染量 (TCID50) の 50 倍を含む細胞培養培地 50 μL に加え、 CO2 5% vol/vol 中、37 °C で 2 時間インキュベートします。 ウイルス抗体混合物を 96 ウェル プレートの細胞に加え、プレートを 37 °C でインキュベートし、5 日間のインキュベーション後に細胞変性効果について顕微鏡検査を行います。 SARS-CoV-2 の阻害活性を示した血清の最高希釈率を中和抗体価として記録します。 アッセイは、健康なボランティアからの陰性対照サンプルを使用して 3 通で実行されます。

受信者の場合:

各レシピエントの血清を採取し、酵素免疫測定法（ELISA）および中和抗体力価を、回復期血漿輸血の1日前に試験する。 患者の回復期血漿輸血前後の受容体結合ドメイン特異的IgG力価および中和抗体力価の変化は、可能であれば0日目、1日目、3日目、および7日目に取得されます。

含まれるすべての患者は、無作為のドナー血漿と回復期血漿を使用した標準的な医学療法（支持療法）と標準的な医学療法のいずれかを受けるように無作為に割り付けられます。記録されます。 併存疾患のチャールソン指数および Acute Physiology and Chronic Health Evaluation II (APACHE II) によって測定される併存疾患の詳細。 断面画像、胸部X線、細菌または真菌の同時感染の詳細、および抗生物質治療の詳細が記録されます。 急性腎障害、急性冠症候群、心筋炎、急性呼吸窮迫症候群、および院内感染を含む合併症の発症が記録される。 高流量酸素、非侵襲的および侵襲的換気の使用は、標準ガイドラインに従い、記録されます。 経口オセルタミビル、ヒドロキシクロロキン、および静脈内ステロイドの使用を含む抗ウイルス治療の詳細は、登録されたすべての患者について記録されます。