歯周病の治療における抗炎症性サイトカインと抗菌性ペプチド LL-37 バイオマーカーの役割。

「歯周病の治療における抗炎症性サイトカインと抗菌ペプチドLL-37バイオマーカーの役割。

1. 序章

   歯周病は、歯肉縁下の細菌性プラークの病原性活性に対する炎症反応の結果として、歯の支持解剖学的構造の破壊からなる感染プロセスであり、先天性、炎症性および適応免疫反応につながります。

   この疾患の臨床症状は、宿主および環境要因、ならびに関与する特定の微生物学的因子に依存します。 細菌間の相互関係と宿主の免疫防御メカニズムは、疾患につながる免疫病理学的メカニズムの基盤を構成します。 健康な状態では、歯周微生物叢の活動と宿主の免疫応答の間にバランスがあります。

   口腔の自然防御システムには、いくつかの抗菌ペプチドが関与しており、そのうちの 1 つであるヒト カテリシジン LL-37 です。

   歯肉溝における LL-37 などの抗菌ペプチドの活性は、歯周組織の最大の防御メカニズムの 1 つと考えられています。 歯肉上皮は、細菌の侵入を防ぐ物理的な障壁を構成するだけではありません。 好中球は接合上皮に移動し、細菌プラークとその下にある上皮の間にバリアを作成します。 それらはまた、18 kDa (hCAP18) の抗菌ペプチドも生成します。 細菌の攻撃に反応して好中球が活性化されると、広域抗生物質と同様の活性を持つLL-37が放出されます。

   このペプチド (LL-37) がまったくないことは、特にモルファン コスマン症候群に苦しむ患者などの好中球欠乏症の患者において、進行性の歯周炎に関連しています。

   この研究の性質は、歯周病に罹患している患者の歯槽膿漏サンプルなどの非侵襲的技術の使用を、基本的な歯周治療のコースを受ける前と受けた後に比較することによって、歯周病におけるLL-37の役割を解明することを目的としています。スケーリングとプレーニング)。 上記に加えて、炎症誘発性サイトカインおよび抗炎症性サイトカイン（特にIL-6、IL-4、IL-10）も、歯周治療の前後に評価されます。 得られたサンプルは、免疫組織化学分析（ELISA）によって分析されます。 観察された臨床所見に関連する歯周治療前後のLL-37の定量化は、歯周病に固有の免疫病理学的反応の診断バイオマーカーとして役立つ可能性があります。

2. リサーチクエスチョンの正当化。 現在のステータス

   過去数年間、歯周病に関連する複雑な免疫病理学的プロセス、および歯周微生物叢の活動と宿主防御メカニズムとの関係を理解し​​ようとするために、科学界による多大な努力がなされてきました。

   この研究の関連性は、歯周病における抗菌ペプチドLL-37の役割を、その殺菌効果によるだけでなく、宿主の免疫応答の調節および歯周治療前後のその活性においてより詳細に理解するのに役立つ可能性があります。 . この問題に関する研究の欠如は、このトピックに関するさらなる研究の必要性を反映しています。

   最終的に、この研究の発見は、従来の歯周治療と組み合わせて宿主の免疫応答を調節するのに役立つLL-37の使用に基づく新しい治療アプローチの基礎を形成する可能性があります. これは、歯周疾患またはインプラント周囲疾患を発症しやすい患者、または従来の代替治療法に耐性がある特定のケースに特に関連する可能性があります。

3. 研究対象の概要

この研究の主な目的は、歯周組織の免疫病理学的反応における LL-37 の役割を調査することです。 その後の目的は、この微生物ペプチドを使用して、歯周病の治療における診断薬、予後薬、および治療薬として機能する可能性を調査することです。

研究仮説: 歯周治療の前後で LL-37 のレベルに有意な量的差異があり、再評価時 (基本的な歯周治療 - 根のスケーリングとプレーニングのコースの 4-6 週間後) に LL-37 が大幅に減少しました。 ）。

帰無仮説: 歯周治療の前後で LL-37 のレベルに有意な量的差異はありません

本研究の目的は次のとおりです。

1. 健康な患者と歯周病の患者が、ベースラインで歯槽膿漏液中の LL-37、IL-6、IL-4、および IL-10 のレベルが異なるかどうかを判断し、それらを歯周病の段階/重症度に関連付けます。
2. 基本的な歯周治療のコースの後、ベースラインでのこれらのレベルの LL-37、IL-6、IL-4、および IL-10 が、ベースラインでの健康な患者の定量化されたレベルと同様であるかどうかを評価します。
3. 歯槽膿漏液サンプルに関して、歯周病に冒された歯のLL-37、IL-6、IL-4、およびIL-10のレベルが同じ個人の健康な部位と異なるかどうか、または上記に有意差がないかどうかを評価します歯周治療コースの前後。
4. 予後因子として歯周治療前後の患者の免疫学的状態を評価するための非侵襲的プロトコルを確立します。

4.材料と方法

マドリッドの大学レイ フアン カルロス (URJC) の倫理委員会からの倫理的承認が付与されています。 FCU-URJCの「高度なインプラント学、組織再生およびインプラント支援プロテーゼのマスター」の選択基準を満たし、研究に参加することに同意した患者の選択が行われます。

参加基準は、18 歳以上で、過去 6 か月以内に歯周病の治療歴がなく、歯周病治療の禁忌となるような病歴または歯科歴がないことです。 除外基準には、現在の妊娠または授乳、免疫疾患、過去 6 か月以内の歯周治療、過去 3 か月以内の経口避妊薬および抗生物質の使用、感染症 (HIV、肝炎、結核など) が含まれていました。 さらに、第三大臼歯は、しばしば埋伏または抜去されるため、GCF サンプリングから除外されました。

喫煙者の患者は除外されず、軽い喫煙者 (1 日 10 本未満のタバコ) または重い喫煙者 (1 日 10 本以上のタバコ) に分類されます。

糖尿病患者も除外されませんが、特定され、説明されます。

研究に含まれるすべての患者は、次の段階を経ます。

1. 完全な歯周検査 (プロービング深度 (PD)、クリニカル アタッチメント レベル (CAL)、プラーク インデックス (PI)、プロービング時の血液 (BOP))。

2. 患者は2つのグループに分けられます：

   • 30人の健康な患者（コントロール）
   • 30名の歯周病患者（テスト-歯周病ステージI-II（15名）、歯周病ステージIII-IV（15名））。

in vivo 研究が不足しているため、保守的な検出力分析 (G*Power 3.1.9.4 プログラム、2009 年) を使用して単純なサンプル サイズを計算しました。 単純なサイズ (被験者 27 人) は、有効サイズ 0.05、アルファベット順の誤差確率 0.05、平均値の差 50%、標準偏差が平均値の最大 80% である両側検定に基づいています。 0.90 の力。

これらのパラメーターを考慮して、グループあたり 21 ～ 30 人の患者の単純なサンプル サイズが推定されます。

クレビクル液サンプルは、製造業者のプロトコルに従って、ペリオ紙 (Periopaper、Applied Biosystems, Inc、カリフォルニア州フォスターシティ) を使用して取得することもできます。 検査する歯はコットンロールで分離し、風乾します。 紙片を歯肉溝に約 30 秒間挿入します。 試験群の患者のサンプルは、歯周病原性部位および健康な部位から採取されます。 唾液や血液でひどく汚染されたサンプルは廃棄されます。

サンプルは、Departamento de Ciencias Básicas de la Salud、Edificio Departamental I、Fundación Clínica Universitaria、URJC (Alcorcon) の研究室で -80 C で保存されます。 すべてのサンプルが取得されると、すべてのサンプルの ELISA 分析は、ヒト LL-37 用に市販されている特定の ELISA キット (HyCult Biotechnology、Uden、オランダ) および IL-4、IL-4、IL 用の市販のキットを使用して実行されます。 -6 および IL-10 ((ダイアクロン SAS、フランス、ブザンソン、それぞれ 850.890、950.035、および 850.880)。

テストグループの患者は、最初のサンプル収集後に基本的な歯周治療（ルートスケーリングとプレーニング）のコースと口腔衛生の指示を受けます。

ベースラインとの関連でLL-37の量に関して統計的に有意な差を評価するために、4〜6週間で再評価の予約が行われ、両方のグループの新しい隙間液サンプルが取得されます（テストとコントロール）。測定値が記録されます。 その後、サンプルは、上記のプロトコルに従って ELISA アッセイを実行することによって再度精査されます。

すべての結果が得られたら、サンプルの統計分析が実行されます。