網膜色素変性症患者の視覚機能に対する幹細胞および幹細胞エクソソームの影響

網膜色素変性症 (RP) は、失明と不可逆的な失明の主な原因の 1 つです。 世界で 140 万人が罹患しており、その有病率は 1:4000 であると言われています。 幹細胞アプリケーションは、再生医療および眼科の分野でますます重要性を増している方法です。 網膜色素変性症を含む網膜疾患に関する多くの実験的研究に加えて、ヒトでの成功を報告する臨床研究もあります。 現在の臨床診療で最も広く使用されている幹細胞群は間葉系幹細胞です。 利点は、入手が比較的容易であり、深刻な免疫反応を誘発しないことです。 眼の幹細胞療法の臨床研究は、幹細胞が成長因子や細胞外小胞などのサポートを分泌することにより、周囲の組織に利益をもたらすことを示唆しています。 眼内適用では、網膜剥離や網膜上膜などの副作用のため、テノン嚢下および脈絡膜上への適用を含む、目の周囲/外側に間葉系幹細胞を適用する傾向があります。

近年、動物研究や臨床研究で研究されてきた他の細胞産物はエクソソームです。 エクソソームは、細胞から放出される細胞外小胞のサブグループです。 エキソソームは、サイズが 30 ～ 150 nm の細胞外小胞であり、エキソソームタンパク質 CD63、CD9、CD81、シンテニン-1、および TSG101 の少なくとも 1 つを運びます。 エキソソームは生物のさまざまな細胞から分泌され、体液にも見られます。 エキソソームは、脂質、炭水化物、核酸、タンパク質などの生体分子をある細胞から別の細胞に輸送する役割を果たしており、このようにして、遺伝情報の伝達、反対側の細胞の再プログラミング、および細胞間コミュニケーションに機能します。 エクソソームの供給源の 1 つは、多量のエクソソームを分泌する間葉系幹細胞です。 間葉系幹細胞由来のエクソソームは、間葉系幹細胞と同様に治療効果があることが報告されています。 幹細胞は、組織に移植されるのではなく、幹細胞が分泌するパラクリン因子によっても臨床効果を発揮すると考えられています。 しかし、間葉系幹細胞の作用機序は完全には解明されておらず、エクソソームがその作用に寄与していると考えられています。 エキソソームの保存と耐久性は、間葉系幹細胞と比較して治療用途に利点を提供する可能性があり、細胞を含まないため、細胞治療と比較して同種異系アプリケーションでより免疫学的な利点を提供する可能性があります。

間葉系幹細胞を得ることができるソースの 1 つは、臍帯の間葉系組織であるウォートン ゼリーです。 ウォートンゲル由来の幹細胞は、分化能力が高く、再生能力が高く、倍加時間が一定で、増殖能力が高く、免疫原性が低く、非侵襲的な方法による倫理的問題がなく、入手が容易なため、幹細胞の優れた供給源です。

この臨床試験では、網膜色素変性症と診断された患者を登録します。 RPの診断は、臨床眼底検査、当院での検査、遺​​伝子解析により行います。

研究の開始時に、すべてのボランティアは、最高矯正視力、スリットランプによる前眼部および眼底検査、OCT（光コヒーレンストモグラフィー）、VF（視野）、ERG（網膜電図）を含む完全な眼科検査を受けます。 mfERG (多焦点 ERG)、OCTA (光コヒーレンストモグラフィー)。 OCTの網膜および脈絡膜の厚さと楕円体帯域幅、VFの感度を示すMD（平均偏差）値、ERGおよびmf-ERGの振幅と潜時、OCTAの血管密度と血管流量比が記録されます。

ボランティアは無作為に3人に分けられます。 第 1 グループはプラセボ グループ (45 人のボランティア) であり、0.5 cc 生理食塩水がテノン嚢下スペースに適用されます。 患者の第2グループ（45人のボランティア）は、ウォートンゲル由来の間葉系幹細胞懸濁液のテノン嚢下注射を受けます。 ウォートンゼリーからの間葉系幹細胞エキソソームを含む懸濁液を、患者の第 3 グループ (45 人のボランティア) までのテノン嚢下の距離に適用します。 各ボランティアの片目が含まれます。 インフォームド コンセントは、ボランティアから取得されます。

同種ヒト ウォートン ゲル組織由来間葉系幹細胞とそのエクソソームは、18 歳以上の健康な女性ボランティアから、HBV、HCV、HIV ウイルス、および「梅毒トレポネマ」（VDRL）検査を行った後、無菌条件下で得られます。 誕生から得られた臍帯組織は、無菌のトランスファー溶液で運ばれ、Erciyes大学のゲノムおよび幹細胞GMP（適正製造基準）認定研究所で幹細胞を得るために処理されます。 同施設内で超遠心法によりエクソソームを取得します。

テノン嚢下の距離に注入するために、結膜とテノンを、側頭部下部から約 10 mm 離れた小さな切開で開き、20 ゲージの湾曲したテノン嚢下カニューレを強膜と平行に進め、テノン後部領域に注入します。 すべてのボランティアは、手術後に抗生物質とステロイド点眼薬を処方されます。

完全な眼科検査および研究開始時の検査が実施され、前眼部および眼底検査、OCT（光コヒーレンストモグラフィー）、VF（視野）、ERG（網膜電図）、mfERG（多焦点ERG）、OCTA（光コヒーレンストモグラフィー）検査を行います。

さらに、視覚機能を主観的に評価するアンケートは、1、3、および6か月目の来院時に実施されます。 (National Eye Institute Visual Function Questionnaire - 25 / National Eye Institute (USA) Visual Function Questionnaire )。 仮面をかぶった二人の捜査官が分析を行います。

手順後の 1 日目、1 か月目、2 か月目、3 か月目、6 か月目のデータは、研究グループ間およびグループ内で比較されます。