O efeito de células-tronco e exossomos de células-tronco nas funções visuais em pacientes com retinite pigmentosa

A retinite pigmentosa (RP) é uma das principais causas de perda de visão e cegueira irreversível. Afirma-se que 1,4 milhões de pessoas são afetadas no mundo e sua prevalência é de 1:4000. Aplicações de células-tronco são métodos que estão ganhando cada vez mais importância no campo da medicina regenerativa e oftalmologia. Além de muitos estudos experimentais em doenças da retina, incluindo retinite pigmentosa, também existem estudos clínicos relatando resultados bem-sucedidos em humanos. O grupo de células-tronco mais utilizado na prática clínica atual é o das células-tronco mesenquimais. As vantagens são que eles são relativamente fáceis de obter e não induzem respostas imunes severas. Estudos clínicos em terapias com células-tronco para o olho sugerem que as células-tronco beneficiam o tecido circundante ao secretar suporte, como fatores de crescimento e vesículas extracelulares, principalmente devido aos seus efeitos tróficos e parácrinos. Em aplicações intraoculares, tem havido uma tendência de aplicar células-tronco mesenquimais ao redor/fora do olho, incluindo aplicação subtenonal e supracoroidal devido a efeitos colaterais, como descolamento da retina e membrana epirretiniana.

Outros produtos celulares que foram estudados em estudos com animais e pesquisas clínicas nos últimos anos são os exossomos. Os exossomos são um subgrupo de vesículas extracelulares liberadas das células. Os exossomos são vesículas extracelulares com tamanho de 30-150 nm e carregam pelo menos uma das proteínas exossomais CD63, CD9, CD81, sintenina-1 e TSG101. Os exossomos são secretados por diferentes células do organismo e também são encontrados nos fluidos corporais. Os exossomos desempenham um papel no transporte de biomoléculas como lipídios, carboidratos, ácidos nucléicos e proteínas de uma célula para outra e, dessa forma, atuam na transferência de informações genéticas e na reprogramação da célula oposta e na comunicação intercelular. Uma das fontes de exossomos são as células-tronco mesenquimais que secretam grande quantidade de exossomos. Foi relatado que exossomos derivados de células-tronco mesenquimais têm efeitos terapêuticos, assim como as células-tronco mesenquimais. Acredita-se que as células-tronco também exerçam seus efeitos clínicos por meio de fatores parácrinos que elas secretam, em vez de serem implantadas no tecido. No entanto, o mecanismo de ação das células-tronco mesenquimais não foi totalmente compreendido e acredita-se que os exossomos contribuam para o efeito. O armazenamento e a durabilidade dos exossomos podem fornecer vantagens em aplicações terapêuticas em comparação com células-tronco mesenquimais e podem fornecer mais vantagens imunológicas em aplicações alogênicas em comparação com tratamentos celulares, uma vez que não contêm células.

Uma das fontes de obtenção de células-tronco mesenquimais é a geleia de Wharton, que é o tecido mesenquimal do cordão umbilical. As células-tronco provenientes do gel de Wharton são uma boa fonte de células-tronco devido à sua alta capacidade de diferenciação, alta capacidade de regeneração, tempo de duplicação constante, alta capacidade de proliferação, baixa imunogenicidade e sem problemas éticos devido a métodos não invasivos e fácil disponibilidade.

Este ensaio clínico incluirá pacientes diagnosticados com retinite pigmentosa. O diagnóstico de PR é feito por exame de fundo de olho clínico, exames em nossa clínica e análise genética.

No início do estudo, todos os voluntários serão submetidos a um exame oftalmológico completo, incluindo acuidade visual com melhor correção, exame do segmento anterior e fundo de olho com lâmpada de fenda, OCT (tomografia de coerência óptica), VF (campo visual), ERG (eletrorretinograma), mfERG (ERG multifocal), OCTA (tomografia de coerência óptica). Espessura da retina e coróide e largura de banda do elipsóide em OCT, valor MD (desvio médio) mostrando sensibilidade em VF, amplitude e tempos de latência em ERG e mf-ERG, densidade vascular e taxas de fluxo vascular em OCTA serão registrados.

Os voluntários serão randomizados em três. O 1º grupo será o grupo placebo (45 voluntários) e 0,5 cc de soro fisiológico será aplicado no espaço subtenonal. O 2º grupo de pacientes (45 voluntários) será submetido a uma injeção subtenoniana de suspensão de células-tronco mesenquimais derivadas do gel de Wharton. Uma suspensão contendo exossomos de células-tronco mesenquimais da geleia de Wharton será aplicada na distância subtenonal ao 3º grupo de pacientes (45 voluntários). Um único olho de cada voluntário será incluído. O consentimento informado será obtido dos voluntários.

Células-tronco mesenquimais alogênicas de gel de Wharton humano e seus exossomos serão obtidas de voluntárias saudáveis, maiores de 18 anos, em condições estéreis, após testes de HBV, HCV, HIV e "Treponema Pallidum" (VDRL). O tecido do cordão umbilical obtido desde o nascimento será transportado em uma solução de transferência estéril e será processado para obter células-tronco nos laboratórios certificados Erciyes University Genome e Stem Cell GMP (boas práticas de fabricação). Os exossomos serão obtidos pelo método de ultracentrifugação na mesma instalação.

Para injeção na distância subtenonal, a conjuntiva e o tenon serão abertos com uma pequena incisão a cerca de 10 mm de distância da área temporal inferior, então uma cânula subtenonal curva de calibre 20 será avançada paralelamente à esclera e injetada na área subtenonal posterior. Todos os voluntários receberão antibióticos e gotas de esteroides após o procedimento cirúrgico.

Exame oftalmológico completo e exames no início do estudo serão realizados e registrados novamente no 1º dia, 1º mês, 2º mês, 3º mês e 6º meses do segmento anterior e exame de fundo de olho, OCT (tomografia de coerência óptica), VF ( serão realizados exames de campo visual), ERG (eletrorretinograma), mfERG (ERG multifocal), OCTA (tomografia de coerência óptica).

Além disso, um questionário avaliando subjetivamente as funções visuais será aplicado nas visitas do 1º, 3º e 6º mês. (Questionário de Função Visual do National Eye Institute - 25 / Questionário de Função Visual do National Eye Institute (EUA)). Dois investigadores mascarados farão análises.

Os dados do 1º dia, 1º mês, 2º mês, 3º mês e 6º mês pós-procedimento serão comparados entre os grupos de estudo e dentro dos grupos.