インプラント周囲炎に対する喫煙の影響

この横断研究は、スイスのベルン大学歯学部歯周病学科、ハタイ・ムスタファ・ケマル大学、ドクズ・エイルル大学、ガジ大学、トルコのエーゲ大学と協力して実施される。 研究の第一段階はトルコで、第二段階はスイスで実施される。 ハタイは、2023年のトルコ地震で最も大きな被害を受けた3つの県の1つであり、ハタイ・ムスタファ・ケマル大学歯学部も甚大な被害を受けたため、ハタイの患者からサンプルを採取することは不可能である。 したがって、このプロジェクトはマルチセンターとして計画されており、患者サンプルはドクズ・エイリュル、ガジ大学、エーゲ大学歯学部歯周病学科から募集されます。 サンプルはスイスのベルン大学歯周病学部口腔微生物学研究室で分析されます。 研究プロトコルは、ドクズ・エイルル大学の研究におけるヒト被験者の使用に関する倫理委員会によって承認されました（プロトコル番号：2023/GOA-8246）。

この研究には96人の患者が含まれ、以下の4つのグループに均等に分けられます。

• インプラント周囲炎を患っている喫煙者
• 非喫煙者でインプラント周囲炎のある人
• インプラント周囲組織が健康な喫煙者
• インプラント周囲組織が健康な非喫煙者

喫煙状況は、喫煙者と非喫煙者（喫煙したことがない人）の 2 つのグループに分類されます。 非喫煙者のグループには、少なくとも6年前に禁煙した元喫煙者が含まれる。

1 日に喫煙するタバコの本数、喫煙指数 (1 日あたりの自己申告の平均タバコ本数 x タバコの使用年数)、および喫煙ポケット年 (1 日あたりの自己申告の平均タバコ本数 x タバコの使用年数 / 1 回あたりのタバコの本数) が計算されます。ポケット）。 喫煙状況は自己申告により把握されます。 喫煙状況は後で唾液のコチニンレベルによって検証されます。 喫煙時の唾液コチニン濃度は 5 ～ 7 ng/ml が許容されます。 喫煙の重症度は、より高い濃度によって決定されます。

歯周パラメータ 臨床歯周測定は、歯周診断のために以下を使用して評価されます。 測定は、Williams 歯周プローブ (Hu-Friedy、シカゴ、イリノイ州、米国) を使用して実行され、プロービングポケット深さ (PPD)、臨床付着レベル (CAL)、プラーク指数 (PI) 26、歯肉指数 (GI) 27、各歯の６つの部位（近心頬側、頬側、遠心頬側、近心舌側、舌側および遠心舌側）におけるプロービング時出血率（ＢＯＰ）２８。

歯周病および歯周病状態の診断は、2017 年歯周病およびインプラント周囲の疾患および状態の分類に関する世界ワークショップによって提案された X 線撮影および臨床診断基準に従って行われます 29。インプラント周囲の健康状態は、歯周病の視覚的兆候の欠如によって評価されます。炎症、プロービング時の出血、および初期治癒後のさらなる骨損失が考えられますが、これは 2 mm 以上であってはなりません。 インプラント周囲炎患者の基準は、大量の出血および 3 mm 以上の骨損失を伴う PPD ≧ 6 mm となります。

患者の人口統計と臨床歯周/インプラント周囲検査

次の変数が収集されます。

• 性別
• 年
• BMI
• インプラントの年齢
• インプラントの数と位置
• 手術段階のステップ
• インプラント治療に伴う合併症
• インプラントの位置異常
• インプラントの可動性と不快感 (ペリオテスト値の違い - PTV)
• インプラントの装填から現在の検査までの時間（機能時間）
• 修復デザイン
• プロテーゼの保持
• X線撮影による骨レベル
• 骨欠損の種類と大きさ
• 角質化した粘膜の存在
• 歯磨きの頻度
• 歯間フロス/ブラッシング
• 歯科受診の頻度
• 歯周炎の病歴
• 歯を失う理由
• アルコールの使用

唾液の採取

唾液サンプルは、刺激されていない状態で患者から採取されます。 サンプルは、参加者が着席してから 10 分間かけて取得されます。 サンプルは、分析のためにベルン大学歯学部歯周病科にドライアイスで移送されるまで、-80°C で保管されます。

プラークサンプルの収集

プラークサンプルは、インプラント周囲炎グループではインプラント周囲炎および歯周炎の歯肉縁下領域から採取され、インプラント周囲健康グループでは歯周の健康領域とインプラント周囲の健康な歯肉縁下領域から採取されます。 歯肉縁下インプラントおよび歯垢サンプルは、エッペンドルフチューブ中の200μl RNAlater内の2つの最も深い歯周ポケットおよびインプラント周囲ポケットから収集されます。 サンプリング部位は唾液から隔離され、わずかに空気乾燥されます。 サンプルは、滅菌 Gracey キュレット (HuFriedy、オランダ、ロッテルダム) を使用して収集されます。 サンプルは、インプラント周囲の健康グループと同じ方法でインプラント周囲の健康領域から採取されます。 エッペンドルフ微量遠心管は、分析のためにベルン大学歯学部に移送されるまで、ドライアイス中で -80 °C で保管されます。

歯肉溝液 (GCF) およびインプラント周囲溝液 (PISF) サンプルの収集

サンプルは、インプラント周囲炎患者の 2 つの最も深いインプラント周囲ポケットと 2 つの最も深い歯周ポケットから採取されます。 綿のロールで各領域を隔離し、空気で軽く脱水することで、唾液の汚染を回避できます。 歯周キュレットを使用してプラークを丁寧に除去します。 オリフィス法を使用すると、標準化された紙ストリップ (Periopaper、Oraflow Inc.、ニューヨーク州プレーンビュー) を使用して 30 秒以内にサンプルが取得されます。 体積は、事前に校正された電子歯肉液測定装置 (Oraflow Inc.、ニューヨーク州プレインビュー) で測定されます。 40 電子デバイスからの読み取り値は、標準曲線を参照して実際の体積 (μl) に変換されます。 血液や唾液で汚染されたサンプルは除外されます。 6 つの Periopaper ストリップはすべてプラスチックのエッペンドルフ微量遠心管にプールされ、分析のためにベルン大学歯学部にドライアイスで移送されるまで -80 °C で保管されます。

実験室分析

唾液と歯垢のサンプルはベルン大学歯学部歯周病学部口腔微生物学研究室に転送され、すべての臨床検査分析は同大学歯周病学部口腔微生物学研究室のアイセグル・サリ博士によって行われます。物質移転契約が締結された後、スイスのベルン大学歯学部に入学。

生化学分析

患者の喫煙状況は、唾液サンプル中の酵素免疫測定キットを使用したコチニン分析によって決定されます。

微生物学的分析

フソバクテリウム・ヌクレアタム、カンピロバクター・レクトゥス、プレボテラ・インターメディア、アグリガティナクター・アクチノミセテムコミタンス、ポルフィロモナス・ジンジバリス、タンネレラ・レンギョウ、トレポネーマ・デンティコラ、サッカリバクテリア（TM7）、黄色ブドウ球菌、および放線菌の存在と存在量がプラークサンプルで分析されます。 これらの細菌の標的特定は、リアルタイム Q-PCR によって行われます。 16sRNA シークエンシングは、公平で標的を絞らない微生物学的分析に使用されます。 全ゲノム DNA が抽出され、16S rRNA の増幅が実行されます。

GCF分析

GCF 解析は 2 番目の研究として計画されています。 Luminex ビーズベースのマルチプレックスイムノアッセイを使用して、GCF および唾液サンプルの分析を実行します。 GCF および唾液マーカーは、以前の文献に従って、酸化ストレス マーカー 8-OHdG、PARK7/DJ-1、および NADPH オキシダーゼ炎症マーカー IL-1beta、IL-17A/E、オステオプロテゲリン (OPG) として広く選択されました。結合組織分解マーカー MMP-8、MMP-3。修復/再生マーカー 骨形成タンパク質 (BMP)-2、上皮成長因子 (EGF)、および血管内皮成長因子 (VEGF)。

統計分析

同様の研究が文献にないため、効果量をサンプル計算しました。 4 つのグループ間の効果サイズ (大きな効果サイズ) 0.4、検出力レベル 90%、信頼水準 95% で有意差を検出するために必要なサンプル サイズは、各グループで 24 でした。 サンプルサイズの計算には、Gpower パッケージ バージョン 3.1 を使用しました。 連続変数の正規性は、Shapiro-Wilk 検定によって評価されます。 偏った分布を持つ値に対しては、ノンパラメトリック統計手法が実行されます。 クラスカル・ウォリス検定は 2 つ以上の非正規分布変数を比較するために実行され、ダン多重比較検定は事後的なペアごとの多重比較分析のために実行されます。 一元配置 ANOVA 検定は 2 つ以上の正規分布グループを比較するために実行され、Tukey 検定は事後的なペアごとの多重比較分析のために実行されます。 一般的な線形モデルは、インプラント周囲および歯周病に対する喫煙の重症度の影響を決定するために実行されます。