不妊症の女性の卵巣を再生するための自己エキソソームと血小板成長因子の使用 (Exosomas2024-1) (Exosom2024-1)

方法論と研究開発

この研究は、2024年1月から2024年9月までベネズエラのカラカスにある不妊治療クリニックで実施された、観察的、前向き、無作為化、比較、二重盲検、分析的調査です。 この研究には、自分の卵子を使って妊娠することを希望し卵子提供を拒否した、卵巣予備能が低い38～46歳の患者30人を対象に、卵巣生体刺激または生体再生処置が行われた。

患者選択基準は、研究開始時の卵巣予備能の減少を示すパラメータに基づいた。 これらには、各患者の月経周期の 3 日目に測定されたホルモンレベルが含まれます: 卵胞刺激ホルモン (FSH) が 12 mIU/mL 以上、エストラジオールが 35 pg/mL 未満、抗ミュラー管ホルモン (AMH) が 0.7 ng/mL 未満mL。 さらに、患者はドナー卵子の使用を拒否する文書とともに、両方の卵巣の卵胞総数が5個未満であることを提示し、卵巣予備能または卵巣抵抗性が低いことを確認する必要があった。

卵巣内注射プロトコルは、3 つの異なる治療グループに基づいて実施されました。

患者の血小板から得られた自己エキソソーム、活性化血小板成長因子、および生理学的溶液（対照群）。

この手順は、月経の 7、8、または 9 日目に、1 か月に 1 回、4 サイクルにわたって実行されました。 患者は、到着順に基づいて割り当てを決定する訓練を受けた看護師が管理するランダム化リストを使用して、3 つのグループのうちの 1 つにランダムに割り当てられました。 グループは次のように分散されました。

グループ 1: 自分の血小板に由来する自己エクソソームを投与されている患者。

グループ 2: 活性化血小板成長因子の投与を受けている患者。 グループ 3: 生理学的溶液をプラセボとして投与されている患者。

包含基準と除外基準

包含基準:

• 38～46歳の女性患者。
• 妊娠を希望される患者様。
• BMI（Body Mass Index）が 23 ～ 30 の患者。
• 指定されたパラメーターに基づいて、卵巣不全と診断された患者。
• 卵子提供を拒否する患者。
• 研究を十分に理解した上でインフォームドコンセントを行った患者。
• 活動性の卵巣または他の腫瘍学的病状、子宮内膜腫、または腫瘍の疑いがない患者。
• 血小板数が250,000を超え、血液疾患の既往がない患者。
• 抗凝固療法を受けていない患者、または活動性感染症を呈している患者。

除外基準:

• 指定された年齢範囲（38～46歳）以外の患者。
• 妊娠する意思のない患者。
• BMIが23～30の範囲外の患者。
• 卵巣不全のない患者、または参加を拒否しインフォームドコンセントを提供しなかった患者。
• 腫瘍性疾患または腫瘍の疑いのある患者。
• 血小板数が250,000未満の患者。
• 血液疾患の病歴、進行中の抗凝固療法、または活動性感染症のある患者。

初期評価の後、インフォームドコンセントが得られ、ベースライン臨床検査が実施されました。 各卵巣の FSH、LH、エストラジオール、AMH、および胞状卵胞数を測定するために、最初の生体刺激の前に、月経周期の 3 日目に各患者から血液サンプルを採取しました。 これらの同じ検査は、4 回目の生体刺激の後、妊孕性処置を開始する前に繰り返されました。

偏りを最小限に抑えるために、すべての血液サンプルは凍結され、カラカスの臨床検査室で同時に分析されました。 患者には、各処置の前後5日間、乳製品と加工炭水化物を含まない食事をとることが推奨された。 さらに、血小板の質を高めるために、風味のないゼラチンを1日2回摂取することが奨励されました。

手術はクリニックの手術室で鎮静管理下で行われた。 末梢血は、セパレーターゲルを備えた PRP キットを使用してすべての患者から収集され、すべてのグループにわたって同一の収集および処理プロトコルが保証されました。 血液サンプルを、穏やかな圧迫下で（止血帯の使用を避けて）バキュテナーシステムを使用して肘静脈から採取し、270gで10分間遠心分離した。

治療グループ:

自己エキソソーム グループ: EXOSMART キットを使用して PRP を処理し、血小板エキソソームを分離しました。 1 ミリリットルあたり 5 ～ 6 兆個のエキソソームを含む 6 cc の濃縮液が得られ、3 cc を各卵巣に注射しました。

血小板増殖因子群：活性型PRPを調製し、各卵巣に3cc注入した。

対照群: 患者は各卵巣に 3 cc の生理学的溶液を注射されました。

注射は、経膣超音波によって誘導された卵胞吸引針を使用して経膣的に行われた。 この手順は、卵胞期初期（7～9日目）に外科的鎮静下で行われました。