刺激に対する免疫細胞の反応

この研究の目的はいくつかあります。 試験管内のさまざまな信号に対する白血球（好中球、単球、好酸球、リンパ球）の反応を調べ、体内で信号をどのように感知し、どのような物質を生成するかを調べたいと考えています。 これらの細胞が特定の状況下でどのように炎症に寄与するかを明らかにしたいと考えています。 白血球の刺激に寄与する可能性のある血漿中の物質を測定して、潜在的な疾患関連状態に対する全血の反応を理解したいと考えています。

目的は、リポ多糖 (LPS) および他の選択された自然免疫刺激によって活性化されるシグナル伝達経路、および in vitro でヒト白血球における下流の炎症機能的結果を定義することです。 大人（18～65歳） 古い)、妊娠していない健康なボランティアは、8 週間に 1 回以下の頻度で、監視設定で静脈穿刺によって 320 ml の全血を採取します。 被験者に対してこれ以上の介入は行われません。 全血は、血漿パーコール不連続遠心分離を使用して、好中球、赤血球、単核細胞、および血漿画分に分画されます。 白血球は、in vitro で炎症性刺激 (LPS など)、選択されたシグナル伝達の結果 (マイトジェン活性化プロテインキナーゼ活性化、Rho GTPase 活性化、タンパク質間相互作用など) および機能的測定 (走化性、スーパーオキシドアニオン、サイトカインなど) にさらされます。関連する化学阻害剤 (例えば、SB203580、p38 MAPK 阻害剤) の非存在下および存在下で定量化されます。 このような各実験では、毎日のドナーからの細胞を、インビトロ実験的介入に対する対の対照として使用する(例えば、SB203580阻害剤対DMSOビヒクル)。 調査結果の統計的有意性を確立するために、必要に応じて、各特定の実験結果を（異なるドナーで）3回以上繰り返します。

計画された研究の具体的な焦点は、ヒト白血球におけるLPSシグナルの伝達における脂質ラフト膜マイクロドメインの役割を定義することです。 脂質ラフトは細胞膜内のコレステロールが豊富なマイクロドメインであり、その中に LPS 受容体である Toll-like Receptor 4 (TLR4) が存在することが記載されています。 LPS シグナル伝達は、ラフト コレステロール含有量に敏感であることが報告されています。 ラフトは、近位アダプタータンパク質、キナーゼ、およびその他のシグナル伝達タンパク質の共分離のための動的シグナル伝達プラットフォームとして機能すると考えられています。 興味深いことに、LPS はラフト コレステロール含有量を決定するタンパク質 (卵、肝臓 X 受容体、ABCA1) の活性を調節することが記載されていますが、以下を明らかにする研究はほとんど行われていません。さらに重要なのは、2) コレステロールの細胞内再分布が LPS によって引き起こされるシグナル伝達イベントの原因であるかどうか、または 3) 自然免疫シグナル伝達がラフト コレステロール含有量の被験者間の変動に依存しているかどうかです。

さらに、炎症の調節における腫瘍抑制遺伝子p53の役割を調査します。 炎症とがんの発生が相互に関連していることは、現在広く受け入れられています。 Menendez 博士は、腫瘍抑制遺伝子 p53 の研究における国際的なリーダーの 1 人です。 彼のグループは、発がん性刺激への曝露による p53 の活性化が、いくつかの toll-like-receptor 遺伝子など、炎症反応に直接影響を与える遺伝子の異なる発現につながることを発見しました。 メネンデス博士は、全血から分離されるヒト白血球を使用します。 彼はこれらの細胞を、ドキソルビシン (化学療法剤) や放射線などの p53 を活性化する刺激にさらし、toll-like-receptor 遺伝子の発現と、LPS やその他の炎症性物質に対する反応を in vitro で調べます。

最後に、炎症細胞の遺伝子発現における亜鉛フィンガータンパク質の役割を調査します。 ZFP36 は、TNFα を含むいくつかの臨床的に重要なサイトカインをコードする mRNA の代謝回転に関与する RNA 結合ジンクフィンガータンパク質です。 いくつかのミスセンス、プロモーター、および 3' 非翻訳変異体がヒトで同定されています。場合によっては、これらのバリアントとそのハプロタイプがヒトの炎症性疾患に関連しています。 末梢血マクロファージを分離し、LPSなどのサイトカインで刺激し、サイトカインmRNAの挙動や遺伝子発現を評価します。