Odpowiedź komórek odpornościowych na bodźce
Transdukcja sygnału odporności wrodzonej w ludzkich leukocytach
Celem tego badania będzie zbadanie odpowiedzi komórek odpornościowych (neutrofili, monocytów) na różne sygnały w probówce, aby określić, w jaki sposób wyczuwają one sygnały w organizmie i jakie substancje wytwarzają w odpowiedzi na nie. Określi, w jaki sposób komórki mogą w pewnych okolicznościach przyczyniać się do stanu zapalnego, oraz zmierzy substancje w osoczu krwi (płynnej, niekomórkowej części krwi), które mogą stymulować białe krwinki, aby zrozumieć, w jaki sposób krew reaguje na możliwe warunki związane z chorobą.
Zdrowi, normalni ochotnicy w wieku 18 lat i starsi, którzy ważą co najmniej 110 funtów, mogą kwalifikować się do tego badania. Uczestnicy oddają około 320 mililitrów (ml) krwi (około 1 1/3 szklanki) lub mniej przy każdym oddaniu. Oddają nie częściej niż raz na 8 tygodni i nie częściej niż sześć razy w roku. W niektórych przypadkach można pobrać mniej niż 320 ml krwi. Pobrana krew jest rozdzielana na jej składniki, a określone komórki są wystawiane na działanie substancji w celu zbadania ich odpowiedzi....
Przegląd badań
Status
Warunki
Szczegółowy opis
Cel tego badania jest wieloraki. Chcemy określić reakcję krwinek białych (neutrofili, monocytów, eozynofili, limfocytów) na różne sygnały w probówce, sprawdzić, jak odbierają sygnały w organizmie i jakie substancje wytwarzają. Chcemy określić, w jaki sposób komórki te mogą w pewnych okolicznościach przyczyniać się do stanu zapalnego. Chcemy mierzyć substancje w osoczu krwi, które mogą przyczyniać się do stymulacji białych krwinek, aby zrozumieć reakcję krwi pełnej na potencjalne stany chorobowe.
Celem jest zdefiniowanie szlaków sygnalizacyjnych aktywowanych przez lipopolisacharyd (LPS) i inne wybrane bodźce odporności wrodzonej oraz dalszych funkcjonalnych konsekwencji zapalnych w ludzkich leukocytach in vitro. Dorosły (18-65 lat stary), zdrowe ochotniczki niebędące w ciąży będą miały pobierane 320 ml krwi pełnej przez nakłucie żyły w warunkach monitorowanych nie częściej niż raz na 8 tygodni. Żadne dalsze interwencje nie będą wykonywane na obiektach. Krew pełna zostanie frakcjonowana na frakcje neutrofili, krwinek czerwonych, komórek jednojądrzastych i osocza przy użyciu nieciągłego wirowania osocza-Percoll. Leukocyty zostaną poddane in vitro bodźcom zapalnym (np. LPS) i wybrane wyniki sygnalizacji (np. aktywacja kinazy białkowej aktywowanej mitogenem, aktywacja GTPazy Rho, interakcje białko-białko) i pomiary funkcjonalne (np. chemotaksja, anion nadtlenkowy i cytokina produkcji) oznaczano ilościowo w nieobecności iw obecności odpowiednich inhibitorów chemicznych (np. SB203580, inhibitor p38 MAPK). W każdym takim eksperymencie komórki od codziennego dawcy będą używane jako sparowane kontrole do eksperymentalnej interwencji in vitro (np. inhibitor SB203580 vs. nośnik DMSO). W razie potrzeby zostaną przeprowadzone trzy lub więcej powtórzeń (na różnych dawcach) każdego konkretnego wyniku eksperymentu w celu ustalenia istotności statystycznej wyników.
Specyficznym celem planowanych badań będzie określenie roli mikrodomen błonowych tratw lipidowych w transdukcji sygnału LPS w ludzkich leukocytach. Tratwy lipidowe to bogate w cholesterol mikrodomeny w błonie plazmatycznej, w których opisano receptor LPS, Toll-like Receptor 4 (TLR4). Doniesiono, że sygnalizacja LPS jest wrażliwa na zawartość cholesterolu w tratwach, prawdopodobnie dlatego, że specyficzny repertuar białek w tratwach jest wrażliwy na zawartość cholesterolu w tratwach. Uważa się, że tratwy działają jako dynamiczne platformy sygnalizacyjne do kosegregacji proksymalnych białek adaptorowych, kinaz i innych białek sygnalizacyjnych. Co ciekawe, chociaż opisano, że LPS moduluje aktywność białek, które określają zawartość cholesterolu w tratwie (jaja, receptor wątroby X, ABCA1), praktycznie nie wykonano żadnej pracy w celu wyjaśnienia: 1) mechanizmów leżących u podstaw redystrybucji wewnątrzkomórkowej cholesterolu indukowanej przez LPS, i, co ważniejsze, 2) czy taka wewnątrzkomórkowa redystrybucja cholesterolu jest przyczyną zdarzeń sygnalizacyjnych wyzwalanych przez LPS, lub 3) czy wrodzona sygnalizacja odporności zależy od różnic międzyosobniczych w zawartości cholesterolu tratwy.
Ponadto zbadamy rolę genu supresorowego guza p53 w regulacji stanu zapalnego. Obecnie powszechnie przyjmuje się, że zapalenie i rozwój raka są ze sobą powiązane. Dr Menendez jest jednym z międzynarodowych liderów w badaniach nad genem supresorowym p53. Jego grupa odkryła, że aktywacja p53 poprzez ekspozycję na bodźce rakotwórcze prowadzi do zróżnicowanej ekspresji genów, które mają bezpośredni wpływ na odpowiedź zapalną, takich jak kilka genów receptorów podobnych do toll. Dr Menendez użyje ludzkich leukocytów, które zostaną wyizolowane z pełnej krwi. Wyeksponuje te komórki na bodźce aktywujące p53, takie jak doksorubicyna (środek stosowany w chemioterapii) czy promieniowanie, a także zbada ekspresję genów receptora toll-like, a także odpowiedź na LPS i inne czynniki zapalne in vitro.
Na koniec zbadamy rolę białek palca cynkowego w ekspresji genów w komórkach zapalnych. ZFP36 jest białkiem palca cynkowego wiążącym RNA, które bierze udział w obrocie mRNA kodujących kilka ważnych klinicznie cytokin, w tym TNFa. U ludzi zidentyfikowano kilka wariantów zmiany sensu, promotora i 3'-nieulegających translacji; w niektórych przypadkach te warianty i ich haplotypy były związane z ludzką chorobą zapalną. Wyizolujemy makrofagi z krwi obwodowej i pobudzimy je LPS i innymi cytokinami, a następnie ocenimy zachowanie mRNA cytokin i ekspresję genów.
Typ studiów
Zapisy (Szacowany)
Kontakty i lokalizacje
Kontakt w sprawie studiów
- Nazwa: NIEHS Join A Study Recruitment Group
- Numer telefonu: (855) 696-4347
- E-mail: myniehs@nih.gov
Kopia zapasowa kontaktu do badania
- Nazwa: Michael B Fessler, M.D.
- Numer telefonu: (984) 287-4081
- E-mail: fesslerm@niehs.nih.gov
Lokalizacje studiów
-
-
North Carolina
-
Research Triangle Park, North Carolina, Stany Zjednoczone, 27709
- Rekrutacyjny
- NIEHS Clinical Research Unit (CRU)
-
Kontakt:
- NIEHS Join A Study Recruitment Group
- Numer telefonu: 855-696-4347
- E-mail: myniehs@nih.gov
-
-
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
Akceptuje zdrowych ochotników
Metoda próbkowania
Badana populacja
Opis
- KRYTERIA PRZYJĘCIA:
- Normalni, zdrowi dorośli dawcy, oceniani na podstawie kwestionariusza przesiewowego
- nie w ciąży
- Ważący co najmniej 110 funtów
- 18-65 lat
- HIV-negatywny (wymagany dowód co 6 miesięcy będziemy przeprowadzać test)*
Antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B i badanie serologiczne zapalenia wątroby typu C ujemne (sprawdzane co 6 miesięcy będziemy przeprowadzać test)*
- Uzasadnieniem testów na obecność wirusa HIV i wirusowego zapalenia wątroby jest to, że przewlekła infekcja wirusowa może zmienić i prawdopodobnie unieważnić nasze wyniki eksperymentalne. Wyniki HIV i wirusowego zapalenia wątroby będą uzyskiwane w sposób poufny. Testy zostaną zlecone zewnętrznemu certyfikowanemu laboratorium i zostaną opłacone przez grupę badawczą. Wyniki będą dostępne tylko dla lekarza prowadzącego badanie/PI (Fessler), koordynatora badania, dyrektora CRU (Garantziotis, LAI) i dawcy, z kilkoma następującymi zastrzeżeniami
Wszystkie pozytywne wyniki w kierunku HIV, zapalenia wątroby typu B i zapalenia wątroby typu C zostaną niezwłocznie przekazane dawcy przez lekarza prowadzącego badanie/PI lub dyrektora CRU. Uczestnik zostanie skierowany do swojego lekarza i/lub do N.C. Departamentu Zdrowia w celu przeprowadzenia testów potwierdzających i poradnictwa. Jak wyjaśniono szczegółowo w załączonym Suplemencie opisującym N.C. Kodeks Stanowego Departamentu Zdrowia będzie przestrzegany. Kodeks stanowy nakazuje zgłaszanie pozytywnych wyników wraz z imieniem i nazwiskiem uczestnika oraz informacjami identyfikującymi do N.C. Departament Zdrowia Publicznego. Po zawarciu umowy z laboratorium badawczym zostanie uzyskane i udokumentowane wyjaśnienie, czy laboratorium, z którym została zawarta umowa, czy też lekarz prowadzący badania będą odpowiedzialni za zgłaszanie pozytywnych wyników państwu, aby uniknąć powielania sprawozdań. Po otrzymaniu wyników badań N.C. Departament Zdrowia skontaktuje się z uczestnikiem, aby poinformować go o pozytywnym wyniku, o tym, jak znaleźć opiekę, jak uniknąć zarażenia innych osób, w jaki sposób zgłaszane jest nowo zdiagnozowane zakażenie wirusem HIV i/lub wirusowym zapaleniem wątroby oraz o znaczeniu informowania partnerów o możliwym ryzyku, ponieważ ich zakażenia wirusem HIV i/lub zapaleniem wątroby. Jeśli wyniki testu na obecność wirusa HIV, wirusowego zapalenia wątroby typu B i typu C są ujemne, uczestnik nie zostanie powiadomiony. Jednak uczestnik może skontaktować się z pielęgniarką badawczą w celu uzyskania wyników.
Wyniki testu na obecność wirusa HIV i wirusowego zapalenia wątroby typu B/C, niereaktywne i reaktywne, zostaną poufnie udokumentowane przez PI lub koordynatora badania w aktach pacjenta i przechowywane w zamykanej szafce w Pokoju Dokumentacji Medycznej CRU. procedury raportowania i czasu związanego z procesem raportowania, stworzono dokument i umieszczono w podręczniku dotyczącym danego badania (Proces zgłaszania wirusowego zapalenia wątroby typu B/C i HIV dla formularza wyników reaktywnych)
KRYTERIA WYŁĄCZENIA:
Według kwestionariusza:
Złe samopoczucie w ciągu ostatnich 24 godzin.
Spożycie alkoholu w ciągu ostatnich 24 godzin.
Wizyta u dentysty w ciągu ostatnich 24 godzin.
Wizyta u lekarza z powodu choroby lub szczepienia w ciągu ostatnich 2 tygodni.
Biegunka w ciągu ostatnich 2 tygodni.
Nawracająca gorączka (4 tygodnie).
Ciąża lub podejrzenie ciąży w ciągu ostatnich 6 tygodni.
Oddanie krwi lub osocza, które spowoduje przekroczenie przez uczestnika 550 ml krwi w ciągu ostatnich 8 tygodni.
Otrzymanie krwiodawstwa w ciągu ostatnich 12 miesięcy.
Zaburzenie krwawienia.
Niedokrwistość.
Problemy sercowe.
Cukrzyca insulinozależna.
Problemy z oddaniem krwi.
Ryzyko lub dowód choroby Creutzfeldta-Jacoba w rodzinie.
Status HIV-dodatni, status wirusa zapalenia wątroby typu B/C lub inne potwierdzone lub podejrzewane stany immunosupresyjne lub niedobory odporności.
Stosowanie leków immunosupresyjnych lub innych leków modyfikujących odporność.
Zażywanie wybranych leków w ciągu ostatnich 5 dni, chyba że PI lub AI otrzymujący próbki stwierdzi inaczej (NLPZ/aspiryna/tylenol, leki przeciwdepresyjne, przeciwhistaminowe, kortykosteroidy, inhibitory reduktazy HMG-CoA, leki hipotensyjne).
przez egzamin:
Temperatura powyżej 99,5 F.
Ciśnienie krwi poniżej 90/50.
Ciśnienie krwi wyższe niż 170/95 mm Hg.
Tętno mniejsze niż 50 lub większe niż 100 uderzeń na minutę.
Jeśli oddana krew przekracza 200 ml:
- Hematokryt mniejszy niż 34% dla kobiet lub mniejszy niż 36% dla mężczyzn lub większy niż 56% dla obu płci.
- Pacjenci zostaną poinformowani o dyskwalifikujących parametrach życiowych i wartościach hematokrytu, a przeszkolony personel doradzi im, aby zwrócili się o pomoc do swojego lekarza.
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
- Modele obserwacyjne: Inny
- Perspektywy czasowe: Przekrojowe
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
|---|
|
1
Wszyscy zdrowi dawcy spełniający kryteria włączenia/wyłączenia
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Celem jest zdefiniowanie szlaków sygnalizacyjnych aktywowanych przez lipopolisacharyd (LPS) i inne wybrane bodźce odporności wrodzonej oraz dalszych funkcjonalnych konsekwencji zapalnych w ludzkich leukocytach in vitro.
Ramy czasowe: analiza badania
|
Celem jest zdefiniowanie szlaków sygnalizacyjnych aktywowanych przez lipopolisacharyd (LPS) i inne wybrane bodźce odporności wrodzonej oraz dalszych funkcjonalnych konsekwencji zapalnych w ludzkich leukocytach in vitro.
|
analiza badania
|
Współpracownicy i badacze
Śledczy
- Główny śledczy: Michael B Fessler, M.D., National Institute of Environmental Health Sciences (NIEHS)
Publikacje i pomocne linki
Publikacje ogólne
- Walker TS, Tomlin KL, Worthen GS, Poch KR, Lieber JG, Saavedra MT, Fessler MB, Malcolm KC, Vasil ML, Nick JA. Enhanced Pseudomonas aeruginosa biofilm development mediated by human neutrophils. Infect Immun. 2005 Jun;73(6):3693-701. doi: 10.1128/IAI.73.6.3693-3701.2005.
- Fessler MB, Arndt PG, Frasch SC, Lieber JG, Johnson CA, Murphy RC, Nick JA, Bratton DL, Malcolm KC, Worthen GS. Lipid rafts regulate lipopolysaccharide-induced activation of Cdc42 and inflammatory functions of the human neutrophil. J Biol Chem. 2004 Sep 17;279(38):39989-98. doi: 10.1074/jbc.M401080200. Epub 2004 Jul 15.
- Frasch SC, Henson PM, Nagaosa K, Fessler MB, Borregaard N, Bratton DL. Phospholipid flip-flop and phospholipid scramblase 1 (PLSCR1) co-localize to uropod rafts in formylated Met-Leu-Phe-stimulated neutrophils. J Biol Chem. 2004 Apr 23;279(17):17625-33. doi: 10.1074/jbc.M313414200. Epub 2004 Feb 6.
Przydatne linki
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Szacowany)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Słowa kluczowe
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- 070023
- 07-E-0023
Plan dla danych uczestnika indywidualnego (IPD)
Planujesz udostępniać dane poszczególnych uczestników (IPD)?
Opis planu IPD
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .