자극에 대한 면역 세포 반응

이 연구의 목적은 여러 가지입니다. 우리는 시험관의 다양한 신호에 대한 백혈구(호중구, 단핵구, 호산구, 림프구)의 반응을 확인하고 체내에서 신호를 감지하는 방법과 생성하는 물질을 테스트하고자 합니다. 특정 상황에서 이러한 세포가 어떻게 염증에 기여하는지 알아보고자 합니다. 잠재적인 질병 관련 상태에 대한 전혈의 반응을 이해하기 위해 백혈구 자극에 기여할 수 있는 혈장 내 물질을 측정하고자 합니다.

목표는 지질다당류(LPS) 및 기타 선택된 선천성 면역 자극에 의해 활성화된 신호 경로 및 시험관 내 인간 백혈구에서 다운스트림 염증 기능 결과를 정의하는 것입니다. 성인(18~65세. 노인), 임신하지 않은 건강한 지원자는 8주에 한 번 이상 모니터링되는 환경에서 정맥 천자에 의해 320ml의 전혈을 수집합니다. 피험자에게 더 이상 개입하지 않습니다. 전혈은 혈장-Percoll 불연속 원심분리를 사용하여 호중구, 적혈구, 단핵구 및 혈장 분획으로 분획됩니다. 백혈구는 시험관 내에서 염증 자극(예: LPS) 및 선택된 신호 결과(예: 미토겐 활성화 단백질 키나아제 활성화, Rho GTPase 활성화, 단백질-단백질 상호작용) 및 기능 측정(예: 화학주성, 슈퍼옥사이드 음이온 및 사이토카인)에 노출됩니다. 관련 화학적 억제제(예: p38 MAPK 억제제인 ​​SB203580)의 부재 및 존재 시 정량화됨). 이러한 각 실험에서 매일 기증자의 세포는 시험관 내 실험 개입(예: SB203580 억제제 대 DMSO 비히클)에 대한 짝을 이루는 대조군으로 사용됩니다. 결과의 통계적 유의성을 확립하기 위해 필요에 따라 각 특정 실험 결과를 3회 이상(서로 다른 기증자에 대해) 반복 수행합니다.

계획된 연구의 특정 초점은 인간 백혈구에서 LPS 신호의 전달에서 지질 뗏목 막 마이크로도메인의 역할을 정의하는 것입니다. 지질 뗏목은 LPS 수용체인 Toll-like Receptor 4(TLR4)가 상주하는 원형질막의 콜레스테롤이 풍부한 마이크로도메인입니다. LPS 신호는 아마도 뗏목에 있는 단백질의 특정 레퍼토리가 뗏목 콜레스테롤 함량에 민감하기 때문에 뗏목 콜레스테롤 함량에 민감한 것으로 보고되었습니다. 뗏목은 근위 어댑터 단백질, 키나아제 및 기타 신호 단백질의 공동 분리를 위한 동적 신호 플랫폼 역할을 하는 것으로 생각됩니다. 흥미롭게도, LPS는 뗏목 콜레스테롤 함량을 결정하는 단백질(계란, Liver X Receptor, ABCA1)의 활성을 조절하는 것으로 기술되었지만 다음을 명확히 하기 위한 작업은 사실상 수행되지 않았습니다. 그리고 더 중요한 것은 2) 이러한 콜레스테롤의 세포내 재분포가 LPS에 의해 유발되는 신호 이벤트의 원인인지, 또는 3) 선천성 면역 신호가 뗏목 콜레스테롤 함량의 피험자 간 변화에 의존하는지 여부입니다.

또한, 우리는 염증 조절에서 종양 억제 유전자 p53의 역할을 조사할 것입니다. 이제 염증과 암 발생이 서로 연결되어 있다는 것이 널리 받아들여지고 있습니다. Menendez 박사는 종양 억제 유전자 p53 연구의 국제적 리더 중 한 명입니다. 그의 그룹은 발암성 자극에 대한 노출을 통한 p53의 활성화가 염증 반응에 직접적인 영향을 미치는 여러 유전자(toll-like-receptor gene)의 차등 발현을 유도한다는 사실을 발견했습니다. Menendez 박사는 전혈에서 분리될 인간 백혈구를 사용할 것입니다. 그는 이들 세포를 독소루비신(화학요법제) 또는 방사선과 같은 p53을 활성화시키는 자극에 노출시키고 시험관 내에서 LPS 및 기타 염증 인자에 대한 반응뿐만 아니라 toll-like-receptor 유전자의 발현을 조사할 것입니다.

마지막으로 우리는 염증 세포의 유전자 발현에서 징크핑거 단백질의 역할을 조사할 것입니다. ZFP36은 TNFα를 포함하여 몇 가지 임상적으로 중요한 사이토카인을 암호화하는 mRNA의 전환에 관여하는 RNA 결합 징크 핑거 단백질입니다. 몇몇 미스센스, 프로모터 및 3'-비번역 변이체가 인간에서 확인되었다; 어떤 경우에는 이러한 변이체와 그 일배체형이 인간의 염증성 질환과 연관되어 있습니다. 우리는 말초 혈액 대식세포를 분리하고 LPS 및 기타 사이토카인으로 자극한 다음 사이토카인 mRNA 및 유전자 발현의 행동을 평가할 것입니다.