レジスタントスターチインスリン感受性試験 (RESIST)

クリニックの訪問:

参加者はスクリーニングから研究完了までに合計11回クリニックを訪れることになります。 これには、毎週の栄養士による訪問と、採血が必要な 7 回の訪問 (スクリーニングと各ダイエット期間後の 2 回) が含まれます。 訪問のたびに、参加者の体重が測定され、ウエストとヒップの周囲径が測定され、血圧が監視されます。 採血総量は450mlです。

スクリーニング訪問 (V1: 1 時間):

採用担当者は最初に、スクリーニングアンケートの検討と電話または個人面接を通じて適格性を判断します。 潜在的な対象者に資格があり、興味がある場合は、研究要件に関する書面による情報を含むオリエンテーション パッケージが郵送されます。 興味のある被験者は、臨床スタッフによって最終的な適格性を判断するためにスクリーニング訪問の予定が立てられます。 スクリーニング訪問 (V1) では、インフォームドコンセントが得られ、身体測定値 (身長、体重、腹囲、血圧) が得られ、登録のための臨床検査基準 (総コレステロール、LDL コレステロール) を評価するために血液 (30ml) が採取されます。 HOMA-IR の測定には、HDL コレステロール、トリグリセリド、グルコース、およびインスリン）。 介入の資格がない、または介入を続行する意思がない個人からのスクリーニング血液サンプルは破棄されます。 私たちは妊娠のスクリーニングを行い、すべての「A」訪問（V2a、v3a、v4a）後に妊娠検査を繰り返します。 月経中の女性には、研究期間中の月経周期を記録するためのカレンダーが渡されます。 適格な個人には、このスクリーニング訪問から 2 週間以内に連絡され、研究への参加が招待されます。 この研究には最大 64 人の参加者を登録して、52 人の参加者（20% が脱落者）を完了するという目標を達成する準備ができています。

栄養士の訪問 (最初: 1 時間、その後: 15 分):

参加者は毎週栄養士または栄養士補助者と会い、体重管理や食事の見直しなどのカウンセリングを受けます。 これらの会議では、参加者は1週間分の冷凍メインディッシュ、チェックリスト付きの標準化されたメニュー、品目別の食料品リストを受け取ります。 焼き菓子や試験澱粉を含む製品もこの時点で提供されます。 提供される形態 (冷凍または生) は、製品の性質と、冷蔵保存と冷凍保存のどちらに耐えられるかによって異なります。 休薬期間中（28～42日目）、被験者は引き続きアルコールを控えるが、7日間は通常の家庭の食事を摂取し、その後さらに7日間はベースラインの食事を摂取する。 ウォッシュアウト期間中の7日間、参加者に好きなものを食べる許可を与えることで、残りの食事プロトコルの遵守が向上すると予想されます。

参加者は、栄養士が生物栄養ユニットから提供されていない処方された食品を確実に購入できるように、前週の食料品店のレシートを持参します。

採血を必要とする食事後の訪問 (A 訪問: 2.5 時間、B 訪問: 5 時間):

参加者は、各食事の完了後、2 日に分けてクリニックを訪れ、血液サンプルを採取します。 重複サンプリングにより生物学的変動が減少するため、食事によって誘発される測定値の重大な変化を検出する研究の能力が向上します。 各食事療法の最後から 2 日目 (訪問 2A、3A、4A) に、参加者は絶食状態でクリニックを訪れ、総コレステロール、LDL コレステロール、HDL コレステロール、トリグリセリド、アポリポタンパク質 A1 およびB、およびイオンモビリティによるリポタンパク質サブフラクション分析。 リポタンパク質リパーゼおよび肝リパーゼ活性も、IVヘパリン(75単位/kg)の15分後に得られた血漿(20ml)において測定される。 各食事療法の最終日 (訪問 2B、3B、4B) に、参加者は 2 回目の空腹時血液サンプル (上記の脂質およびリポタンパク質用) と脂肪生成遺伝子発現を測定するための脂肪組織吸引を提供します。 さらに、訪問 3B および 4B では 3 時間のデンプン耐性食事が実行され、絶食状態およびデンプン食事 (合計 60 ml) の 30、60、120、および 180 分後にグルコースおよびインスリンを測定するための血液サンプルが採取されます。

臨床手順:

臨床測定: 血圧は座位で 3 回測定され、最後の 2 つの値が平均されます。 人体測定値には、身長、体重、ウエストおよびヒップ周囲径、生体インピーダンスによる体脂肪率 (タニタスケール) が含まれます。 ウエスト周囲径は腸骨稜で 2 回測定され、ヒップ周囲径はヒップの最も広い点で測定されます。

標準的な採血: 標準的な採血手順を使用して、12 ～ 14 時間の絶食後に参加者から血液サンプルが収集されます。 血液は、以下の保存液を含むチューブに採取されます: 3.0 gms EDTA (二カリウム)、1.7 mg P-Pack、0.15 gms 硫酸ゲンタマイシン、0.15 gms クロラムフェニコール、5.96 mls アプロチニン (Sigma A-6279)、および 0.30 gms アジ化ナトリウムこれらはすべて二重脱イオン水で 20ml に希釈されます。 血漿は、4℃で直ちに遠心分離することにより分離されます。 脂質およびリポタンパク質の測定が行われ、血漿のアリコートが将来の分析のために凍結されます。

ヘパリン後の血液サンプリング:

血漿リパーゼ活性の分析のために、ヘパリンボーラス静脈内投与（75U/kg、正当化についてはリスクセクションを参照）の15分後に血液サンプル（20ml）を採取する。 投与前に、参加者は凝固障害の家族歴や、抗凝固剤の使用を含む個人的な禁忌、出血や打撲の異常やその他の病気の病歴、アレルギー、最近の歯科治療などについて面接を受けます。 投与後、参加者は観察下で2時間クリニックに留まります。 ヘパリンとその手順に関する情報シートも提供されます。

脂肪組織生検:

脂肪生検は、R.N. によって皮下の隣接領域から収集されます。標準化された無菌手順を使用します。 参加者には、凝固を阻害する可能性のある処置後 2 日以内に薬物を服用しないよう指示されます。 この手順は、ヘパリン リパーゼ分析後少なくとも 24 時間後に行われます。 ヘパリンの半減期は 2 時間であるため、これはクリアランスを確保するには十分な時間です。 参加者の臀部の上の領域をベタジンで洗浄した後、塩酸リドカイン 1% (10mg/ml) が皮下皮膚に注射されます。 14G の針を使用して、1 ～ 1.5 c.c. の脂肪を吸引します。 冷圧をその場で保持し、傷に包帯を巻きます。 参加者は、2 日間にわたって 1 日 1 回包帯を交換するように指示されます。 彼らには包帯2枚、傷を清潔に保つための説明書、臨床スタッフに連絡できる電話番号が提供される。

でんぷん粉試験:

脂肪組織生検と空腹時採血の直後に、参加者には1日のカロリーの1/3を15分で摂取できるデンプン食が与えられます。 主要栄養素の組成は、参加者に割り当てられた試験食と同様であり、アミロースまたはアミロペクチンのいずれかが多く含まれます。 食事の30分、60分、120分、180分後に点滴により血液が採取されます。 この手順では、静脈内カニューレまたは針が肘前静脈に配置されます。 通常の生理食塩水を肘前部で一定の開口率で流します。