Ensayo de sensibilidad a la insulina resistente al almidón (RESIST)

Visitas a la Clínica:

Los participantes visitarán la clínica un total de 11 veces desde la pantalla hasta la finalización del estudio. Esto incluirá visitas semanales con un dietista y 7 visitas que requieran extracciones de sangre (detección y dos veces después de cada período de dieta). En cada visita, se pesará a los participantes, se medirán las circunferencias de cintura y cadera y se controlará la presión arterial. La cantidad total de sangre recogida es de 450ml.

Visita de selección (V1: 1 hora):

Los reclutadores determinarán inicialmente la elegibilidad mediante la revisión de un cuestionario de selección y una entrevista telefónica o personal. Si un sujeto potencial es elegible e interesado, se le enviará por correo un paquete de orientación que incluirá información escrita sobre los requisitos del estudio. Los sujetos interesados ​​serán programados para una visita de evaluación para determinar la elegibilidad final por parte del personal clínico. En la visita de selección (V1), se obtendrá el consentimiento informado, se obtendrán las medidas antropométricas (altura, peso, circunferencia de la cintura, presión arterial) y se extraerán muestras de sangre (30 ml) para evaluar los criterios de laboratorio para la inscripción (colesterol total, colesterol LDL). , HDL-colesterol, triglicéridos, glucosa e insulina para la determinación de HOMA-IR). Se destruirán las muestras de sangre de las personas que no sean elegibles o que no estén dispuestas a continuar con la intervención. Examinaremos el embarazo y repetiremos las pruebas de embarazo después de todas las visitas "A" (V2a, v3a, v4a). Las mujeres que menstrúan recibirán un calendario para registrar su ciclo menstrual durante la duración del estudio. Se contactará a las personas elegibles dentro de las 2 semanas de esta visita de selección y se les invitará a participar en el estudio. Estamos preparados para inscribir hasta 64 participantes en este estudio para lograr un objetivo de 52 participantes completados (20 % de abandono).

Visitas al dietista (inicial: 1 h, posteriores: 15 min):

Los participantes se reunirán semanalmente con un dietista o un asistente de dietista para recibir asesoramiento, incluido el control del peso y la revisión de la dieta. En estas reuniones, los participantes recibirán entradas congeladas para una semana, menús estandarizados con listas de verificación y listas de compras detalladas. En este momento también se proporcionarán productos horneados y productos que contengan los almidones de prueba. La forma en que se proporcionarán (congelados o frescos) dependerá de la naturaleza del producto y su capacidad para resistir el almacenamiento refrigerado o congelado. Durante el período de lavado (días 28 a 42), los sujetos continuarán absteniéndose del alcohol pero consumirán su dieta habitual en el hogar durante 7 días, seguida de la dieta de referencia durante 7 días adicionales. Anticipamos que dar permiso a los participantes para comer lo que quieran durante 7 días durante el lavado mejorará su cumplimiento durante el resto del protocolo dietético.

Los participantes traerán recibos de supermercado de la semana anterior para que los nutricionistas aseguren la compra de los alimentos prescritos no proporcionados por la Unidad de Bionutrición.

Visitas posteriores a la dieta que requieren extracciones de sangre (visitas A: 2,5 horas, visitas B: 5 horas):

Los participantes visitarán la clínica en dos días separados después de completar cada dieta para proporcionar muestras de sangre. El muestreo duplicado reduce la variabilidad biológica y, por lo tanto, mejora el poder del estudio para detectar cambios significativos en la medición inducidos por la dieta. En el penúltimo día de cada dieta (Visitas 2A, 3A, 4A), los participantes visitarán la clínica en ayunas y proporcionarán una muestra de sangre en ayunas (30 ml) para medir el colesterol total, LDL y HDL, triglicéridos, apolipoproteínas A1 y B, y análisis de subfracción de lipoproteínas por movilidad iónica. Las actividades de lipoproteína lipasa y lipasa hepática también se medirán en plasma (20 ml) obtenido 15 minutos después de la heparina IV (75 unidades/kg). En el último día de cada dieta (Visitas 2B, 3B, 4B), los participantes proporcionarán una segunda muestra de sangre en ayunas (para lípidos y lipoproteínas como se indicó anteriormente) y una aspiración de tejido adiposo para medir la expresión del gen lipogénico. Además, se realizará una comida de tolerancia al almidón de 3 horas en las visitas 3B y 4B, con muestras de sangre para medir la glucosa y la insulina extraídas en ayunas y 30, 60, 120 y 180 minutos después de una comida de almidón (60 ml en total).

Procedimientos Clínicos:

Mediciones clínicas: la presión arterial se medirá 3 veces en una posición sentada y los últimos 2 valores se promediarán. Las medidas antropométricas incluyen altura, peso, circunferencia de cintura y cadera, y % de grasa corporal por bioimpedancia (escala Tanita). La circunferencia de la cintura se mide dos veces en la cresta ilíaca y la circunferencia de la cadera se mide en el punto más ancho de las caderas.

Muestreo de sangre estándar: utilizando procedimientos estándar de recolección de sangre, se recolectarán muestras de sangre de los participantes después de un ayuno de 12 a 14 horas. La sangre se recogerá en tubos que contengan la siguiente solución conservante: 3,0 g de EDTA (dipotásico), 1,7 mg de P-Pack, 0,15 g de sulfato de gentamicina, 0,15 g de cloranfenicol, 5,96 ml de aprotinina (Sigma A-6279) y 0,30 g de azida sódica. todos los cuales se diluyen a 20 ml con agua doblemente desionizada. El plasma se separa por centrifugación inmediata a 4°C. Se realizan mediciones de lípidos y lipoproteínas y se congelan alícuotas de plasma para futuros análisis.

Muestreo de sangre después de la heparina:

Se extraerá una muestra de sangre (20 ml) 15 minutos después de la administración intravenosa de un bolo de heparina (75 U/kg, consulte la sección de Riesgo para obtener la justificación) para el análisis de la actividad de la lipasa plasmática. Antes de la administración, se entrevistará a los participantes en busca de antecedentes familiares de trastornos de la coagulación o contraindicaciones personales, incluido el uso de anticoagulantes, antecedentes de sangrado o hematomas anormales u otras enfermedades, alergias o trabajo dental reciente. Después de la administración, los participantes permanecerán en la clínica durante 2 horas bajo observación. También se les proporcionará una hoja informativa sobre la heparina y el procedimiento.

Biopsia de tejido adiposo:

Las biopsias adiposas serán recolectadas de la región flanqueante subcutánea por un R.N. mediante un procedimiento estéril y estandarizado. Se indicará a los participantes que no tomen ningún medicamento dentro de los 2 días posteriores al procedimiento que pueda afectar la coagulación. Este procedimiento se realizará al menos 24 horas después del análisis post-heparina lipasa. Debido a que la vida media de la heparina es de 2 horas, este es tiempo suficiente para asegurar la eliminación. Después de limpiar el área sobre la nalga del participante con betadine, se inyectará clorhidrato de lidocaína al 1 % (10 mg/ml) en la piel subcutánea. Con una aguja número 14G se aspirarán 1-1,5 c.c. de grasa. Se mantendrá presión fría en el sitio y luego se vendará la herida. Se indicará a los participantes que cambien el vendaje una vez al día durante dos días. Se les proporcionarán dos vendajes, instrucciones para mantener limpia la herida y un número de teléfono donde se puede localizar al personal clínico.

Prueba de harina de almidón:

Inmediatamente después de la biopsia de tejido adiposo y la extracción de sangre en ayunas, los participantes recibirán una comida con almidón que proporciona 1/3 de las calorías diarias que se consumirán en 15 minutos. Será similar en composición de macronutrientes a la dieta de prueba a la que se asigna el participante y tendrá un alto contenido de amilosa o amilopectina. Se extraerá sangre 30, 60, 120 y 180 minutos después del consumo de la comida a través de una vía intravenosa. Para este procedimiento, se colocará una cánula o aguja intravenosa en la vena antecubital. Se administrará una solución salina normal a una velocidad mantenida abierta en el sitio antecubital.