Испытание резистентного крахмала на чувствительность к инсулину (RESIST)

Посещения клиники:

Участники посетят клинику в общей сложности 11 раз от экрана до завершения исследования. Это будет включать еженедельные посещения диетолога и 7 посещений, требующих забора крови (скрининг и два раза после каждого периода диеты). При каждом посещении участники будут взвешиваться, измеряться окружность талии и бедер, а также контролироваться артериальное давление. Общий объем взятой крови составляет 450 мл.

Скрининговый визит (V1: 1 час):

Первоначально рекрутеры определяют соответствие требованиям путем рассмотрения анкеты и телефонного или личного собеседования. Если потенциальный субъект имеет право и заинтересован, по почте будет отправлен ознакомительный пакет, который будет включать письменную информацию о требованиях к обучению. Заинтересованные субъекты будут запланированы для скринингового визита, чтобы определить окончательное право на участие в клиническом персонале. Во время скринингового визита (V1) будет получено информированное согласие, получены антропометрические измерения (рост, вес, окружность талии, артериальное давление) и кровь (30 мл) будет взята для оценки лабораторных критериев включения (общий холестерин, холестерин ЛПНП). , холестерин ЛПВП, триглицериды, глюкоза и инсулин для определения HOMA-IR). Скрининговые образцы крови от лиц, которые либо не имеют права, либо не желают продолжать вмешательство, будут уничтожены. Мы проведем скрининг на беременность и повторим тесты на беременность после всех посещений категории «А» (V2a, v3a, v4a). Менструирующим женщинам будет предоставлен календарь для записи их менструального цикла на время исследования. В течение 2 недель после этого визита на экран свяжутся с подходящими лицами и пригласят принять участие в исследовании. Мы готовы зарегистрировать до 64 участников в этом исследовании, чтобы достичь цели в 52 завершенных участника (отсев 20%).

Визиты диетолога (первоначально: 1 час, последующие: 15 мин):

Участники будут еженедельно встречаться с диетологом или помощником диетолога, чтобы получить консультацию, включая управление весом и пересмотр диеты. На этих встречах участники получат замороженные закуски на неделю, стандартизированные меню с контрольными списками и подробные списки продуктов. В это время также будут предоставлены хлебобулочные изделия и продукты, содержащие тестовые крахмалы. Форма, в которой они будут поставляться (замороженные или свежие), будет зависеть от характера продукта и его способности выдерживать хранение в холодильнике или в замороженном виде. В течение периода вымывания (дни 28-42) субъекты будут продолжать воздерживаться от алкоголя, но будут придерживаться своей обычной домашней диеты в течение 7 дней, а затем еще 7 дней будут придерживаться исходной диеты. Мы ожидаем, что предоставление участникам разрешения есть то, что они хотят, в течение 7 дней во время вымывания улучшит их соблюдение в течение оставшейся части диетического протокола.

Участники принесут чеки из продуктовых магазинов за предыдущую неделю, чтобы диетологи могли обеспечить покупку предписанных продуктов, не предоставленных Отделом биопитания.

Визиты после диеты, требующие забора крови (посещения A: 2,5 часа, посещения B: 5 часов):

Участники будут посещать клинику в два отдельных дня после завершения каждой диеты, чтобы сдать образцы крови. Двойная выборка снижает биологическую изменчивость и, следовательно, повышает эффективность исследования для выявления значительных изменений в измерениях, вызванных диетой. В предпоследний день каждой диеты (посещения 2А, 3А, 4А) участники посещают клинику натощак и сдают образец крови натощак (30 мл) для измерения общего холестерина, холестерина ЛПНП и ЛПВП, триглицеридов, аполипопротеинов А1 и B, и анализ субфракций липопротеинов по ионной подвижности. Активность липопротеинлипазы и печеночной липазы также измеряют в плазме (20 мл), полученной через 15 минут после внутривенного введения гепарина (75 единиц/кг). В последний день каждой диеты (посещения 2B, 3B, 4B) участники сдадут второй образец крови натощак (на липиды и липопротеины, как указано выше) и аспирацию жировой ткани для измерения экспрессии липогенного гена. Кроме того, во время посещений 3B и 4B будет проводиться 3-часовой прием пищи, обеспечивающей толерантность к крахмалу, с забором образцов крови для измерения уровня глюкозы и инсулина натощак и через 30, 60, 120 и 180 минут после приема крахмальной пищи (всего 60 мл).

Клинические процедуры:

Клинические измерения: Артериальное давление будет измеряться 3 раза в положении сидя, а последние 2 значения усредняются. Антропометрические измерения включают рост, вес, окружность талии и бедер, а также % жира в организме по биоимпедансу (шкала Танита). Окружность талии измеряется два раза по гребню подвздошной кости, а окружность бедер измеряется в самом широком месте бедер.

Стандартный забор крови: образцы крови будут взяты у участников после 12-14-часового голодания с использованием стандартных процедур сбора крови. Кровь собирают в пробирки, содержащие следующий консервирующий раствор: 3,0 г ЭДТА (дикалий), 1,7 мг P-Pack, 0,15 г сульфата гентамицина, 0,15 г хлорамфеникола, 5,96 мл апротинина (Sigma A-6279) и 0,30 г азида натрия. все они разбавлены до 20 мл дважды деионизированной водой. Плазму отделяют немедленным центрифугированием при 4°С. Выполняются измерения липидов и липопротеинов, аликвоты плазмы замораживаются для будущих анализов.

Забор крови после введения гепарина:

Образец крови (20 мл) будет взят через 15 минут после внутривенного введения болюса гепарина (75 ЕД/кг, см. раздел «Риски» для обоснования) для анализа активности липазы в плазме. Перед введением участники будут опрошены на предмет семейного анамнеза нарушений свертывания крови или личных противопоказаний, включая использование антикоагулянтов, истории кровотечений или кровоподтеков или других заболеваний, аллергии или недавней стоматологической помощи. После введения участники останутся в клинике на 2 часа под наблюдением. Им также будет предоставлен информационный лист о гепарине и процедуре.

Биопсия жировой ткани:

Жировая биопсия будет взята из подкожной фланкирующей области врачом Р.Н. с использованием стандартизированной стерильной процедуры. Участники будут проинструктированы не принимать какие-либо препараты в течение 2 дней после процедуры, которые могут нарушить свертываемость крови. Эта процедура будет проводиться не менее чем через 24 часа после анализа гепариновой липазы. Поскольку период полувыведения гепарина составляет 2 часа, этого времени достаточно для обеспечения клиренса. После обработки области над ягодицами участника бетадином в подкожную кожу будет вводиться лидокаина гидрохлорид 1% (10 мг/мл). С помощью иглы номер 14G аспирируют 1-1,5 см3 жира. На месте будет проводиться холодное давление, а затем рана будет перевязана. Участникам будет предложено менять повязку один раз в день в течение двух дней. Им будут предоставлены две повязки, инструкции по содержанию раны в чистоте и номер телефона, по которому можно будет связаться с медицинским персоналом.

Тест крахмальной муки:

Сразу после биопсии жировой ткани и забора крови натощак участникам дадут крахмалистую пищу, которая обеспечивает 1/3 дневной нормы калорий, которые нужно потреблять за 15 минут. По составу макронутриентов она будет аналогична тестовой диете, на которую назначен участник, и будет содержать либо много амилозы, либо амилопектина. Кровь будет взята через 30, 60, 120 и 180 минут после приема пищи через капельницу. Для этой процедуры в антекубитальную вену вводят внутривенную канюлю или иглу. Обычный физиологический раствор будет вводиться с постоянной скоростью в антекубитальном участке.