Ensaio de Sensibilidade à Insulina de Amido Resistente (RESIST)

Visitas clínicas:

Os participantes visitarão a clínica um total de 11 vezes, desde a triagem até a conclusão do estudo. Isso incluirá visitas semanais com um nutricionista e 7 visitas que requerem coleta de sangue (triagem e duas vezes após cada período de dieta). Em cada visita, os participantes serão pesados, as circunferências da cintura e do quadril serão medidas e a pressão arterial será monitorada. A quantidade total de sangue coletado é de 450ml.

Visita de triagem (V1: 1 hora):

Os recrutadores determinarão inicialmente a elegibilidade por meio da análise de um questionário de triagem e de uma entrevista por telefone ou pessoal. Se um assunto em potencial for elegível e estiver interessado, um pacote de orientação será enviado pelo correio, incluindo informações por escrito sobre os requisitos do estudo. Os indivíduos interessados ​​serão agendados para uma visita de triagem para determinar a elegibilidade final pela equipe clínica. Na visita de triagem (V1), será obtido o consentimento informado, medidas antropométricas obtidas (altura, peso, circunferência da cintura, pressão arterial) e sangue (30ml) serão coletados para avaliar os critérios laboratoriais para inscrição (colesterol total, colesterol LDL , HDL-colesterol, triglicerídeos, glicose e insulina para determinação de HOMA-IR). As amostras de sangue de triagem de indivíduos que não são elegíveis ou não desejam prosseguir com a intervenção serão destruídas. Faremos a triagem de gravidez e repetiremos os testes de gravidez após todas as visitas "A" (V2a, v3a, v4a). As mulheres menstruadas receberão um calendário para registrar seu ciclo menstrual durante o estudo. Os indivíduos elegíveis serão contatados dentro de 2 semanas após esta visita de tela e convidados a participar do estudo. Estamos preparados para inscrever até 64 participantes neste estudo para produzir uma meta de 52 participantes concluídos (20% de desistência).

Visitas do nutricionista (inicial: 1 hora, subsequente: 15 min):

Os participantes se encontrarão semanalmente com um nutricionista ou nutricionista para receber aconselhamento, incluindo controle de peso e revisão da dieta. Nessas reuniões, os participantes receberão uma semana de entradas congeladas, cardápios padronizados com listas de verificação e listas de compras detalhadas. Produtos de panificação e produtos contendo os amidos de teste também serão fornecidos neste momento. A forma como serão fornecidos (congelados ou frescos) dependerá da natureza do produto e da sua capacidade de resistir ao armazenamento refrigerado vs. congelado. Durante o período de washout (dias 28-42), os indivíduos continuarão a se abster de álcool, mas consumirão sua dieta caseira habitual por 7 dias, seguida pela dieta de base por mais 7 dias. Prevemos que dar aos participantes permissão para comer o que quiserem por 7 dias durante a lavagem melhorará sua adesão durante o restante do protocolo dietético.

Os participantes levarão as receitas da mercearia da semana anterior para que os nutricionistas possam garantir a compra dos alimentos prescritos e não fornecidos pela Unidade de Bionutrição.

Visitas pós-dieta que requerem coleta de sangue (visitas A: 2,5 horas, visitas B: 5 horas):

Os participantes visitarão a clínica em dois dias separados após a conclusão de cada dieta para fornecer amostras de sangue. A amostragem duplicada reduz a variabilidade biológica e, portanto, melhora o poder do estudo para detectar mudanças significativas induzidas pela dieta na medição. No penúltimo dia de cada dieta (Visitas 2A, 3A, 4A), os participantes visitarão a clínica em jejum e fornecerão uma amostra de sangue em jejum (30ml) para medição do colesterol total, LDL e HDL, triglicerídeos, apolipoproteínas A1 e B, e análise de subfração de lipoproteínas por mobilidade iônica. As atividades da lipoproteína lipase e da lipase hepática também serão medidas no plasma (20ml) obtido 15 minutos após heparina IV (75 unidades/kg). No último dia de cada dieta (visitas 2B, 3B, 4B), os participantes fornecerão uma segunda amostra de sangue em jejum (para lipídios e lipoproteínas como acima) e uma aspiração de tecido adiposo para medir a expressão gênica lipogênica. Além disso, uma refeição de tolerância de amido de 3 horas será realizada nas visitas 3B e 4B, com amostras de sangue para medição de glicose e insulina colhidas em jejum e 30, 60, 120 e 180 minutos após uma refeição de amido (60ml no total).

Procedimentos Clínicos:

Medições clínicas: A pressão arterial será medida 3 vezes na posição sentada e os últimos 2 valores serão calculados. As medidas antropométricas incluem altura, peso, circunferência da cintura e do quadril e % de gordura corporal por bioimpedância (escala Tanita). A circunferência da cintura é medida duas vezes na crista ilíaca e a circunferência do quadril é medida no ponto mais largo dos quadris.

Amostragem de sangue padrão: Usando procedimentos de coleta de sangue padrão, as amostras de sangue serão coletadas dos participantes após um jejum de 12 a 14 horas. O sangue será coletado em tubos contendo a seguinte solução conservante: 3,0 gms EDTA (dipotássio), 1,7 mg P-Pack, 0,15 gms sulfato de gentamicina, 0,15 gms cloranfenicol, 5,96 mls aprotinina (Sigma A-6279) e 0,30 gms azida sódica todos os quais são diluídos para 20mls com água duplamente deionizada. O plasma é separado por centrifugação imediata a 4°C. Medições de lipídios e lipoproteínas são realizadas e alíquotas de plasma são congeladas para análises futuras.

Amostra de sangue pós-heparina:

Uma amostra de sangue (20ml) será coletada 15 minutos após a administração intravenosa de um bolus de heparina (75U/kg, ver seção de risco para justificativa) para a análise da atividade da lipase plasmática. Antes da administração, os participantes serão entrevistados quanto ao histórico familiar de distúrbios de coagulação ou contra-indicações pessoais, incluindo uso de anticoagulantes, histórico de sangramento ou hematomas anormalidades ou outras doenças, alergias ou tratamento dentário recente. Após a administração, os participantes permanecerão na clínica por 2 horas sob observação. Eles também receberão uma folha de informações sobre a heparina e o procedimento.

Biópsia de tecido adiposo:

Biópsias adiposas serão coletadas da região subcutânea flanqueadora por um R.N. usando um procedimento padronizado e estéril. Os participantes serão instruídos a não tomar nenhum medicamento dentro de 2 dias após o procedimento que prejudique a coagulação. Este procedimento ocorrerá pelo menos 24 horas após a análise da lipase pós-heparina. Como a meia-vida da heparina é de 2 horas, esse tempo é suficiente para garantir a depuração. Após a limpeza da área acima da nádega do participante com betadine, cloridrato de lidocaína 1% (10mg/ml) será injetado na pele subcutânea. Usando uma agulha número 14G, 1-1,5 c.c. de gordura serão aspirados. A pressão fria será realizada no local e, em seguida, a ferida será enfaixada. Os participantes serão instruídos a trocar o curativo uma vez por dia durante dois dias. Eles receberão dois curativos, instruções para manter a ferida limpa e um número de telefone para contato com a equipe clínica.

Teste de Refeição de Amido:

Imediatamente após a biópsia de tecido adiposo e coleta de sangue em jejum, os participantes receberão uma refeição de amido que fornece 1/3 das calorias diárias a serem consumidas em 15 minutos. Será semelhante em composição de macronutrientes à dieta de teste à qual o participante é designado e será rico em amilose ou amilopectina. O sangue será coletado 30, 60, 120 e 180 minutos após o consumo da refeição por via intravenosa. Para este procedimento, uma cânula ou agulha intravenosa será colocada na veia antecubital. Uma solução salina normal será executada a uma taxa de manutenção aberta no local antecubital.