Próba wrażliwości na insulinę oporną na skrobię (RESIST)

Wizyty w klinice:

Uczestnicy odwiedzą klinikę łącznie 11 razy od ekranu do zakończenia badania. Obejmuje to cotygodniowe wizyty u dietetyka oraz 7 wizyt wymagających pobrania krwi (przesiewowe i dwa razy po każdym okresie diety). Podczas każdej wizyty uczestnicy będą ważeni, mierzone będą obwody talii i bioder oraz mierzone będzie ciśnienie krwi. Łączna ilość pobranej krwi wynosi 450 ml.

Wizyta przesiewowa (V1: 1 godzina):

Osoby rekrutujące początkowo określą kwalifikowalność poprzez przegląd kwestionariusza przesiewowego oraz rozmowę telefoniczną lub osobistą. Jeśli potencjalny przedmiot kwalifikuje się i jest zainteresowany, zostanie wysłany pakiet orientacyjny, który będzie zawierał pisemne informacje o wymaganiach dotyczących badania. Zainteresowane osoby zostaną zaplanowane na wizytę przesiewową w celu ustalenia ostatecznego uprawnienia przez personel kliniczny. Podczas wizyty przesiewowej (V1) zostanie uzyskana świadoma zgoda, wykonane zostaną pomiary antropometryczne (wzrost, masa ciała, obwód talii, ciśnienie krwi) oraz krew (30 ml) w celu oceny kryteriów laboratoryjnych kwalifikujących do włączenia (cholesterol całkowity, cholesterol LDL) , HDL-cholesterolu, trójglicerydów, glukozy i insuliny do oznaczania HOMA-IR). Badania przesiewowe próbek krwi od osób, które nie kwalifikują się lub nie chcą przystąpić do interwencji, zostaną zniszczone. Po wszystkich wizytach „A” (V2a, v3a, v4a) powtórzymy testy ciążowe. Kobiety w okresie menstruacji otrzymają kalendarz, w którym będą zapisywać swój cykl menstruacyjny na czas trwania badania. Z kwalifikującymi się osobami skontaktujemy się w ciągu 2 tygodni od wizyty na ekranie i zaprosimy ich do udziału w badaniu. Jesteśmy gotowi zarejestrować do 64 uczestników w tym badaniu, aby uzyskać docelową liczbę 52 uczestników (20% rezygnacji).

Wizyta dietetyka (początkowa: 1 godz., następna: 15 min):

Uczestnicy będą spotykać się co tydzień z dietetykiem lub doradcą dietetyka, aby otrzymać poradę, w tym kontrolę wagi i przegląd diety. Na tych spotkaniach uczestnicy otrzymają tygodniowe mrożone przystawki, standardowe menu z listami kontrolnymi i szczegółowe listy zakupów. W tym czasie dostarczane będą również wypieki i produkty zawierające badane skrobie. Forma, w jakiej będą dostarczane (mrożona lub świeża), będzie zależała od charakteru produktu i jego zdolności do wytrzymania przechowywania w lodówce lub w zamrażarce. Podczas okresu wypłukiwania (dni 28-42) badani będą nadal powstrzymywać się od alkoholu, ale będą spożywać swoją zwykłą dietę domową przez 7 dni, a następnie dietę wyjściową przez dodatkowe 7 dni. Przewidujemy, że udzielenie uczestnikom pozwolenia na jedzenie tego, na co mają ochotę przez 7 dni podczas wypłukiwania, poprawi ich przestrzeganie przez pozostałą część protokołu żywieniowego.

Uczestnicy przynoszą ze sobą paragony ze sklepu spożywczego z poprzedniego tygodnia, aby dietetycy mogli zapewnić sobie zakup przepisanych produktów spożywczych, których nie zapewnia Zakład Biożywienia.

Wizyty po diecie wymagające pobrania krwi (wizyty A: 2,5 godz., wizyty B: 5 godz.):

Uczestnicy odwiedzą klinikę w dwa oddzielne dni po zakończeniu każdej diety w celu pobrania próbek krwi. Podwójne pobieranie próbek zmniejsza zmienność biologiczną, a tym samym poprawia moc badania w celu wykrycia istotnych zmian w pomiarach wywołanych dietą. W przedostatnim dniu każdej diety (Wizyty 2A, 3A, 4A) uczestnicy zgłaszają się do poradni na czczo i oddają na czczo próbkę krwi (30 ml) w celu oznaczenia cholesterolu całkowitego, LDL i HDL, trójglicerydów, apolipoprotein A1 i B i analiza podfrakcji lipoprotein na podstawie ruchliwości jonów. Aktywności lipazy lipoproteinowej i lipazy wątrobowej będą również mierzone w osoczu (20 ml) uzyskanym 15 minut po IV heparynie (75 jednostek/kg). Ostatniego dnia każdej diety (wizyty 2B, 3B, 4B) uczestnicy pobiorą drugą próbkę krwi na czczo (dla lipidów i lipoprotein jak wyżej) oraz aspirację tkanki tłuszczowej w celu zmierzenia ekspresji genów lipogenicznych. Ponadto podczas wizyt 3B i 4B zostanie przeprowadzony 3-godzinny posiłek tolerancji skrobi, z pobraniem próbek krwi do pomiaru glukozy i insuliny na czczo oraz 30, 60, 120 i 180 minut po posiłku skrobiowym (łącznie 60 ml).

Procedury kliniczne:

Pomiary kliniczne: Ciśnienie krwi zostanie zmierzone 3 razy w pozycji siedzącej, a ostatnie 2 wartości zostaną uśrednione. Pomiary antropometryczne obejmują wzrost, wagę, obwód talii i bioder oraz procent tkanki tłuszczowej na podstawie bioimpedancji (skala Tanita). Obwód talii mierzy się dwukrotnie na wysokości grzebienia biodrowego, a obwód bioder mierzy się w najszerszym miejscu bioder.

Standardowe pobieranie krwi: Stosując standardowe procedury pobierania krwi, próbki krwi będą pobierane od uczestników po 12-14 godzinach postu. Krew zostanie pobrana do probówek zawierających następujący roztwór konserwujący: 3,0 g EDTA (dipotas), 1,7 mg P-Pack, 0,15 g siarczanu gentamycyny, 0,15 g chloramfenikolu, 5,96 ml aprotyniny (Sigma A-6279) i 0,30 g azydku sodu z których wszystkie są rozcieńczane do 20 ml wodą podwójnie dejonizowaną. Osocze oddziela się przez natychmiastowe odwirowanie w temperaturze 4°C. Wykonuje się pomiary lipidów i lipoprotein, a porcje osocza zamraża się do przyszłych analiz.

Pobieranie krwi po heparynie:

Próbka krwi (20 ml) zostanie pobrana 15 minut po dożylnym podaniu bolusa heparyny (75 j./kg, patrz uzasadnienie w części dotyczącej ryzyka) w celu analizy aktywności lipazy w osoczu. Przed podaniem, uczestnicy zostaną przesłuchani pod kątem historii zaburzeń krzepnięcia w rodzinie lub osobistych przeciwwskazań, w tym stosowania antykoagulantów, historii krwawień lub nieprawidłowych siniaków lub innych chorób, alergii lub niedawnych zabiegów dentystycznych. Po podaniu uczestnicy pozostaną w klinice przez 2 godziny pod obserwacją. Otrzymają również ulotkę informacyjną dotyczącą heparyny i procedury.

Biopsja tkanki tłuszczowej:

Biopsje tkanki tłuszczowej zostaną pobrane z podskórnego obszaru flankującego przez R.N. stosując wystandaryzowaną, sterylną procedurę. Uczestnicy zostaną poinstruowani, aby w ciągu 2 dni od zabiegu nie przyjmować żadnych leków, które mogłyby zaburzać krzepnięcie. Ta procedura będzie miała miejsce co najmniej 24 godziny po analizie lipazy poheparynowej. Ponieważ okres półtrwania heparyny wynosi 2 godziny, jest to czas wystarczający do zapewnienia klirensu. Po oczyszczeniu miejsca nad pośladkiem uczestnika za pomocą betadyny, w skórę podskórną zostanie wstrzyknięty 1% chlorowodorek lidokainy (10 mg/ml). Za pomocą igły nr 14G zostanie odessane 1-1,5 cm3 tłuszczu. Na miejscu będzie utrzymywany zimny ucisk, a następnie rana zostanie zabandażowana. Uczestnicy zostaną poinstruowani, aby zmieniać bandaż raz dziennie przez dwa dni. Otrzymają dwa bandaże, instrukcję utrzymania rany w czystości oraz numer telefonu, pod którym można skontaktować się z personelem klinicznym.

Test posiłku skrobiowego:

Bezpośrednio po biopsji tkanki tłuszczowej i pobraniu krwi na czczo uczestnicy otrzymają posiłek skrobiowy, który dostarcza 1/3 dziennej dawki kalorii do spożycia w ciągu 15 minut. Będzie ona podobna pod względem składu makroskładników do diety testowej, do której przydzielono uczestnika, i będzie bogata w amylozę lub amylopektynę. Krew zostanie pobrana 30, 60, 120 i 180 minut po spożyciu posiłku przez IV. W przypadku tej procedury kaniula lub igła dożylna zostaną umieszczone w żyle przedłokciowej. Zwykły roztwór soli fizjologicznej będzie prowadzony z utrzymywaną szybkością otwierania w miejscu odłokciowym.