ヘパリン誘発性血小板減少症の薬理ゲノミクス (PHIT)

包含基準：18歳以上。以下を含む、ヘパリン/PF4抗体およびHITのSRA検査を受けた参加者:

ヘパリン/PF4 抗体が陰性で SRA が陰性の参加者 (コントロール)、ヘパリン/PF4 抗体が陽性で SRA が陰性の参加者 (セロコンバージョン症例)、ヘパリン/PF4 抗体が陽性で SRA が陽性の参加者 (HIT 症例); -採血から7日以内の未分画ヘパリンまたは低分子量ヘパリン（エノキサパリン、ダルテパリン、チンザパリン）による治療 除外基準：18歳未満。インフォームドコンセントを与えることができない この研究には無作為化は含まれていません。 参加者は、次の 3 つのカテゴリから同数で登録されます。 (2) ヘパリン/PF4抗体陽性のHIT検査を受けていない参加者(セロコンバージョン症例); (3)HIT試験でヘパリン/PF4抗体の両方が陽性である参加者(HIT症例)。

リクルートは、Coagulation Laboratory の協力者と、Banner Univerisyt Medical Center - Tucson の主要な研究担当者を通じて促進されます。 陽性および陰性のヘパリン/PF4抗体およびセロトニン放出アッセイ結果を有する患者は、凝固検査室で特定され、研究への参加の可能性について患者の医療提供者にアプローチされます。 潜在的な参加者が興味を持っている場合は、研究担当者から研究の説明と同意の可能性についてアプローチされます。 あるいは、相談を受けて患者のケアに直接参加している臨床協力者は、潜在的な参加者に直接連絡して、研究に参加する意思を確認することができます。

研究に同意する患者は、約 150 ミリリットルの 1 つの血液サンプルを提供するよう求められます。 このサンプルから末梢血単核細胞（PBMC）を分離し、提案された実験で使用するまで-80℃で保存します。 ゲノム DNA もサンプルから分離され、HLA シーケンスが実行されます。

HITは、機能的セロトニン放出アッセイおよび臨床経過に基づくHIT可能性で確認されます。 参加者の入院、ヘパリンの投与量と期間、血小板数、手術歴、合併症に関する詳細なデータが収集されます。 参加者の同意後、末梢血サンプルを取得し、フローサイトメトリーを使用して CD 陽性 T 細胞を選別し、前述のようにゲノム DNA を分離します。

TCR レパートリーと特定のサンプルの特定の TCR バリアントの割合は、研究者の研究室とコア施設で利用可能な新しい技術の組み合わせを使用して決定されます。 サンプルのTCRレパートリーは、次世代シーケンシング技術を使用して決定されます。 新しい Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR キットは、ゲノム DNA サンプルから再構成された TCR 対立遺伝子の偏りのない定量的プロファイルを取得するように最適化されているため、利用される可能性があります。 現在、このキットはベータ テスト段階にあり、VANTAGE はテスト サイトの 1 つです。

マルチプレックス PCR システムを使用して TCR 配列決定を行い、前述のように、機能的な TCR Vbeta セグメントに特異的なプライマーを使用して、再構成された TCRbeta DNA を増幅します。 ゲノム テンプレートが増幅され、Vbeta 5.1 ファミリー TCR クロノタイプの相対存在量が観察され、期待値最大化アルゴリズムを使用して配列データから推測されます。 国際的な ImMunoGeneTics 情報システム (IMGT) によって定義された CDR3 モチーフは、DNA 配列に基づいて予測されます。 すべての読み取りについて、参照配列に対する最適な配列アラインメントが計算され、品質スコアの低い読み取りは破棄されます。 選別不純物および/または刺激バックグラウンドによる非特異的 T 細胞を除外するために、頻度が 1% 未満の抗原特異的クローンは無視されます。

特定の DHS で重要であることが知られている TCR 対立遺伝子は、ドロップレット デジタル PCR (ddPCR) を使用してターゲットにされます。 ddPCR は、油エマルジョン液滴 PCR 反応に基づくターゲット テンプレートの絶対定量 (リアルタイム PCR は相対定量を提供) を提供する新しい技術です。 研究者の研究室はこの新しい技術の経験があり、多くの重要な TCR 対立遺伝子のアッセイは、研究者の研究室の ddPCR で既に最適化されています。

リスクを最小限に抑えるために、可能な限りプライマリケア検査室が採取されると同時に、この研究のために追加の血液が収集されます。 参加者は、定性的な免疫反応をテストするために、150ml の血液を提供するよう求められます。 この研究への参加に関連するリスクは、静脈穿刺のまれな合併症に関連しており、不快感、あざ、感染、および/または血栓形成を含む可能性があります。 患者は、訓練を受けた臨床担当者によって安全性と快適性が監視されます。

被験者は、有害事象について研究の過程で監視されます。 重篤な有害事象は、PI による事象の通知から 10 日以内に IRB に報告されます。 重大ではない有害事象またはプロトコルの不遵守の事例は、審査を継続する際に報告されます。 治験は継続的に監視されます。 DSMB はなく、中間分析も予定されていません。