Farmakogenomika trombocytopenii indukowanej heparyną (PHIT)

Kryteria włączenia: 18 lat lub więcej; Uczestnicy z badaniem przeciwciał heparyny/PF4 i SRA w kierunku HIT, w tym:

uczestnicy z ujemnymi przeciwciałami heparyny/PF4 i ujemnymi SRA (kontrole), uczestnicy z dodatnimi przeciwciałami heparyny/PF4 i ujemnymi SRA (przypadki serokonwersji), uczestnicy z dodatnimi przeciwciałami heparyna/PF4 i dodatnimi SRA (przypadki HIT); Leczenie heparyną niefrakcjonowaną lub heparyną drobnocząsteczkową (enoksaparyną, dalteparyną, tinzaparyną) w ciągu 7 dni od pobrania krwi Kryteria wykluczenia: Wiek poniżej 18 lat; Brak możliwości wyrażenia świadomej zgody W tym badaniu nie zastosowano randomizacji. Uczestnicy zostaną zapisani w równej liczbie z trzech kategorii: (1) uczestnicy bez negatywnego wyniku testu HIT na obecność przeciwciał przeciwko heparynie/PF4 (grupa kontrolna); (2) uczestnicy bez pozytywnego wyniku testu HIT na obecność przeciwciał przeciwko heparynie/PF4 (przypadki serokonwersji); (3) uczestnicy z pozytywnym wynikiem testu HIT na oba przeciwciała przeciwko heparynie/PF4 (przypadki HIT).

Rekrutację ułatwią współpracownicy w Laboratorium Koagulacji oraz kluczowy personel badawczy w Banner Univerisyt Medical Center - Tucson. Pacjenci z dodatnimi i ujemnymi wynikami testu na przeciwciała przeciwko heparynie/PF4 i testowi uwalniania serotoniny będą identyfikowani w Laboratorium Koagulacyjnym, a lekarz prowadzący pacjenta zostanie poproszony o potencjalny udział w badaniach naukowych. Jeśli potencjalny uczestnik jest zainteresowany, zostanie poproszony przez personel badawczy o opis badania i ewentualną zgodę. Alternatywnie, współpracownicy kliniczni, którzy są konsultowani i bezpośrednio uczestniczą w opiece nad pacjentem, mogą kontaktować się bezpośrednio z potencjalnym uczestnikiem w celu wyrażenia chęci udziału w badaniu.

Pacjenci wyrażający zgodę na badanie zostaną poproszeni o dostarczenie jednej próbki krwi o objętości około 150 mililitrów. Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) zostaną wyizolowane z tej próbki i przechowywane w temperaturze -80°C przed użyciem w proponowanych eksperymentach. Genomowe DNA zostanie również wyizolowane z próbki w celu przeprowadzenia sekwencjonowania HLA.

HIT zostanie potwierdzony funkcjonalnym testem uwalniania serotoniny i prawdopodobieństwem HIT na podstawie przebiegu klinicznego. Zostaną zebrane szczegółowe dane dotyczące hospitalizacji uczestnika, dawki i czasu trwania heparyny, liczby płytek krwi, historii operacji i chorób współistniejących. Za zgodą uczestników zostanie pobrana próbka krwi obwodowej, limfocyty T CD dodatnie zostaną posortowane metodą cytometrii przepływowej i wyizolowane genomowe DNA, jak opisano wcześniej.

Repertuar TCR i proporcja określonych wariantów TCR dla konkretnej próbki zostaną określone przy użyciu kombinacji nowych technologii dostępnych w laboratorium badacza i podstawowych obiektach. Repertuar TCR próbki zostanie określony przy użyciu technologii sekwencjonowania nowej generacji. Prawdopodobnie zostanie wykorzystany nowy zestaw ImmunoSEQ TCR firmy Adaptive Technologies, ponieważ zestaw ten został zoptymalizowany w celu uzyskania obiektywnego profilu ilościowego rearanżowanych alleli TCR z próbki genomowego DNA. Obecnie ten zestaw jest w fazie testów beta, a VANTAGE jest jedną z witryn testowych.

Sekwencjonowanie TCR zostanie przeprowadzone przy użyciu multipleksowego systemu PCR w celu amplifikacji rearanżowanego DNA TCRbeta przy użyciu starterów specyficznych dla funkcjonalnego segmentu TCR Vbeta, jak opisano wcześniej. Matryce genomowe zostaną zamplifikowane, a obserwowana względna obfitość klonotypów TCR rodziny Vbeta 5.1 zostanie wywnioskowana z danych sekwencji przy użyciu algorytmu maksymalizacji oczekiwań. Motywy CDR3 zdefiniowane przez międzynarodowy system informacyjny ImMunoGeneTics (IMGT) będą przewidywane na podstawie sekwencji DNA. Dla każdego odczytu zostanie obliczone najlepsze dopasowanie sekwencji do sekwencji referencyjnych, a odczyty o niskiej jakości zostaną odrzucone. Aby wykluczyć niespecyficzne limfocyty T z powodu sortowania zanieczyszczeń i/lub tła stymulacji, klony swoiste dla antygenu o częstościach poniżej 1 procenta zostaną pominięte.

Allele TCR, o których wiadomo, że są ważne w określonym DHS, będą celowane za pomocą cyfrowej PCR kropelkowej (ddPCR). ddPCR to nowa technologia, która zapewnia bezwzględną kwantyfikację (PCR w czasie rzeczywistym zapewnia względną kwantyfikację) docelowej matrycy na podstawie reakcji PCR kropelek emulsji olejowej. Laboratorium badacza ma doświadczenie z tą nową technologią, a testy wielu ważnych alleli TCR zostały już zoptymalizowane na ddPCR w laboratorium badacza.

Aby zminimalizować ryzyko, do tego badania zostanie pobrana dodatkowa krew w tym samym czasie, gdy pobierane będą laboratoria podstawowej opieki zdrowotnej, gdy tylko będzie to możliwe. Uczestnicy zostaną poproszeni o oddanie 150 ml krwi w celu zbadania jakościowych odpowiedzi immunologicznych. Ryzyko związane z udziałem w tym badaniu dotyczy rzadkich powikłań wkłucia dożylnego i może obejmować dyskomfort, siniaki, infekcje i/lub tworzenie się skrzepów krwi. Pacjenci będą monitorowani pod kątem bezpieczeństwa i komfortu przez przeszkolony personel kliniczny.

Pacjenci będą monitorowani w trakcie badania pod kątem wszelkich zdarzeń niepożądanych. Poważne zdarzenia niepożądane zostaną zgłoszone do IRB w ciągu 10 dni od powiadomienia o zdarzeniu przez PI. Niepoważne zdarzenia niepożądane lub przypadki niezgodności z protokołem będą zgłaszane w czasie kontynuacji przeglądu. Proces będzie monitorowany na bieżąco. Nie ma DSMB ani nie planuje się żadnych analiz pośrednich.