Farmacogenómica de la trombocitopenia inducida por heparina (PHIT)

Criterios de inclusión: 18 años de edad o más; Participantes con pruebas de anticuerpos heparina/PF4 y SRA para HIT, que incluyen:

participantes con anticuerpos heparina/PF4 negativos y SRA negativos (controles), participantes con anticuerpos heparina/PF4 positivos y SRA negativos (casos de seroconversión), participantes con anticuerpos heparina/PF4 positivos y SRA positivos (casos HIT); Tratamiento con heparina no fraccionada o heparina de bajo peso molecular (enoxaparina, dalteparina, tinzaparina) dentro de los 7 días posteriores a la extracción de sangre Criterios de exclusión: Menos de 18 años de edad; Incapacidad para dar consentimiento informado No hay aleatorización involucrada en este estudio. Los participantes se inscribirán en igual número de tres categorías: (1) participantes sin HIT con resultado negativo para anticuerpos contra heparina/PF4 (controles); (2) participantes sin HIT con resultado positivo para anticuerpos heparina/PF4 (casos de seroconversión); (3) participantes con pruebas HIT positivas para ambos anticuerpos heparina/PF4 (casos HIT).

El reclutamiento se facilitará a través de colaboradores en el Laboratorio de Coagulación y a través del personal clave del estudio en el Centro Médico Banner Univerisyt - Tucson. Los pacientes con resultados positivos y negativos en el ensayo de liberación de serotonina y anticuerpos contra la heparina/PF4 se identificarán en el laboratorio de coagulación y se hablará con el proveedor del paciente sobre la posible participación en estudios de investigación. Si el posible participante está interesado, el personal del estudio se pondrá en contacto con él para obtener una descripción del estudio y un posible consentimiento. Alternativamente, los colaboradores clínicos que son consultados y que participan directamente en la atención de un paciente pueden comunicarse directamente con un participante potencial para conocer su disposición a participar en el estudio.

A los pacientes que den su consentimiento para el estudio se les pedirá que proporcionen una muestra de sangre de aproximadamente 150 mililitros. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislarán de esta muestra y se almacenarán a -80 °C antes de su uso en los experimentos propuestos. El ADN genómico también se aislará de la muestra para realizar la secuenciación HLA.

La HIT se confirmará con un ensayo de liberación de serotonina funcional y la probabilidad de HIT según el curso clínico. Se recopilarán datos detallados sobre la hospitalización del participante, la dosis y la duración de la heparina, los recuentos de plaquetas, el historial quirúrgico y las comorbilidades. Después del consentimiento de los participantes, se obtendrá una muestra de sangre periférica, se clasificarán las células T CD positivas mediante citometría de flujo y se aislará el ADN genómico como se describió anteriormente.

El repertorio de TCR y la proporción de variantes de TCR específicas para una muestra en particular se determinarán utilizando una combinación de tecnologías novedosas disponibles en el laboratorio del investigador y en las instalaciones centrales. El repertorio de TCR de una muestra se determinará utilizando tecnología de secuenciación de próxima generación. Es probable que se utilice el nuevo kit ImmunoSEQ TCR de Adaptive Technologies, ya que este kit ha sido optimizado para obtener un perfil cuantitativo imparcial de alelos TCR reorganizados de una muestra de ADN genómico. Actualmente, este kit se encuentra en la fase de prueba beta y VANTAGE es uno de los sitios de prueba.

La secuenciación de TCR se realizará utilizando un sistema de PCR multiplex para amplificar el ADN de TCRbeta reorganizado utilizando cebadores específicos para un segmento TCR Vbeta funcional como se describió anteriormente. Las plantillas genómicas se amplificarán y la abundancia relativa observada de los clonotipos TCR de la familia Vbeta 5.1 se deducirá de los datos de secuencia utilizando un algoritmo de maximización de expectativas. Los motivos CDR3 definidos por el sistema de información internacional ImMunoGeneTics (IMGT) se predecirán en función de las secuencias de ADN. Para cada lectura, se calculará la mejor alineación de secuencias con las secuencias de referencia y se descartarán las lecturas con puntajes de calidad bajos. Para excluir las células T inespecíficas debido a la clasificación de impurezas o al fondo de estimulación, se ignorarán los clones específicos de antígeno con frecuencias inferiores al 1 por ciento.

Los alelos de TCR que se sabe que son importantes en DHS específico se tratarán mediante PCR digital de gotas (ddPCR). La ddPCR es una nueva tecnología que proporciona una cuantificación absoluta (la PCR en tiempo real proporciona una cuantificación relativa) de la plantilla de destino basada en reacciones de PCR de gotas de emulsión de aceite. El laboratorio del investigador tiene experiencia con esta nueva tecnología y los ensayos para varios alelos importantes de TCR ya se han optimizado en la ddPCR en el laboratorio del investigador.

Para minimizar el riesgo, se recolectará sangre adicional para este estudio al mismo tiempo que se extraen los laboratorios de atención primaria siempre que sea posible. Se pedirá a los participantes que proporcionen 150 ml de sangre para evaluar las respuestas inmunitarias cualitativas. Los riesgos asociados con la participación en este estudio se relacionan con complicaciones poco comunes de la venopunción y podrían incluir molestias, hematomas, infecciones y/o formación de coágulos sanguíneos. Los pacientes serán monitoreados por seguridad y comodidad por personal clínico capacitado.

Los sujetos serán monitoreados durante el transcurso del estudio para detectar cualquier evento adverso. Los eventos adversos graves se informarán al IRB dentro de los 10 días posteriores a la notificación del evento por parte del PI. Los eventos adversos no graves o los casos de incumplimiento del protocolo se informarán en el momento de la revisión continua. El juicio será monitoreado de manera continua. No hay DSMB ni se planean análisis intermedios.