肝素诱导的血小板减少症的药物基因组学 (PHIT)

入选标准：18岁或以上；接受肝素/PF4 抗体和 HIT SRA 检测的参与者，包括：

肝素/PF4抗体阴性和SRA阴性的参与者（对照），肝素/PF4抗体阳性和SRA阴性的参与者（血清转化病例），肝素/PF4抗体阳性和SRA阳性的参与者（HIT病例）；抽血后 7 天内接受普通肝素或低分子肝素（依诺肝素、达肝素、亭扎肝素）治疗 排除标准：18 岁以下；无法给予知情同意 本研究不涉及随机化。 参与者将从三个类别中以相同数量被招募：(1) 没有 HIT 的参与者肝素/PF4 抗体检测呈阴性（对照）； (2) 非HIT参与者肝素/PF4抗体检测呈阳性（血清转化病例）； (3) HIT 参与者肝素/PF4 抗体检测均呈阳性（HIT 病例）。

将通过凝血实验室的合作者和 Banner Univerisyt 医学中心 - 图森的主要研究人员促进招募。 肝素/PF4 抗体和 5-羟色胺释放试验结果呈阳性和阴性的患者将在凝血实验室进行鉴定，并且将与患者的提供者联系以了解参与研究的可能性。 如果潜在参与者有兴趣，研究人员将联系他们进行研究描述和可能的同意。 或者，接受咨询并直接参与患者护理的临床合作者可以直接联系潜在参与者以征询参与研究的意愿。

同意该研究的患者将被要求提供一份大约 150 毫升的血液样本。 外周血单核细胞 (PBMC) 将从该样本中分离出来，并在用于拟议实验之前储存在 -80°C。 还将从样品中分离基因组 DNA 以进行 HLA 测序。

HIT 将通过功能性血清素释放测定和基于临床过程的 HIT 可能性来确认。 将收集有关参与者住院、肝素剂量和持续时间、血小板计数、手术史和合并症的详细数据。 参与者同意后，将采集外周血样本，使用流式细胞术对 CD 阳性 T 细胞进行分类，并如前所述分离基因组 DNA。

将使用研究人员实验室和核心设施中可用的新技术组合来确定特定样本的 TCR 库和特定 TCR 变体的比例。 样本的 TCR 库将使用下一代测序技术确定。 新的 Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR 试剂盒可能会被使用，因为该试剂盒已经过优化，可以从基因组 DNA 样本中获得重排 TCR 等位基因的无偏定量图谱。 目前该套件处于 beta 测试阶段，VANTAGE 是测试站点之一。

TCR 测序将使用多重 PCR 系统进行，以使用对功能性 TCR Vbeta 区段特异的引物扩增重排的 TCRbeta DNA，如前所述。 基因组模板将被放大并观察到 ​​Vbeta 5.1 家族 TCR 克隆型的相对丰度将使用期望最大化算法从序列数据中推断出来。 国际 ImMunoGeneTics 信息系统 (IMGT) 定义的 CDR3 基序将根据 DNA 序列进行预测。 对于每次读取，将计算与参考序列的最佳序列比对，并丢弃质量分数较低的读取。 为了排除由于分选杂质和/或刺激背景导致的非特异性 T 细胞，频率低于 1% 的抗原特异性克隆将被忽略。

已知在特定 DHS 中重要的 TCR 等位基因将使用液滴数字 PCR (ddPCR) 进行靶向。 ddPCR是一种基于油乳液滴PCR反应对目标模板进行绝对定量（real-time PCR提供相对定量）的新技术。 研究人员的实验室拥有这项新技术的经验，并且已经在研究人员实验室的 ddPCR 上优化了许多重要的 TCR 等位基因的检测。

为了尽量减少风险，将尽可能在抽取初级保健实验室的同时为这项研究收集额外的血液。 参与者将被要求提供 150 毫升血液以测试定性免疫反应。 参与这项研究的相关风险与静脉穿刺的罕见并发症有关，可能包括不适、瘀伤、感染和/或血块形成。 受过训练的临床人员将监测患者的安全性和舒适度。

在研究过程中将监测受试者的任何不良事件。 严重不良事件将在 PI 通知事件后 10 天内报告给 IRB。 非严重不良事件或不遵守协议的情况将在持续审查时报告。 试验将以持续的方式进行监测。 没有 DSMB 也没有任何中期分析计划。