A heparin által kiváltott thrombocytopenia farmakogenomikája (PHIT)

Bevételi kritériumok: 18 éves vagy idősebb; Heparin/PF4 antitesttel és SRA-teszttel rendelkező résztvevők HIT-re, beleértve:

negatív heparin/PF4 antitesttel és negatív SRA-val (kontroll), pozitív heparin/PF4 antitesttel és negatív SRA-val rendelkező résztvevők (szerokonverziós esetek), pozitív heparin/PF4 antitesttel és pozitív SRA-val rendelkező résztvevők (HIT esetek); Kezelés frakcionálatlan heparinnal vagy kis molekulatömegű heparinnal (enoxaparin, dalteparin, tinzaparin) a vérvételt követő 7 napon belül Kizárási kritériumok: 18 évesnél fiatalabb; Képtelenség a tájékozott beleegyezés megadására Ebben a vizsgálatban nincs véletlen besorolás. A résztvevőket egyenlő számban nevezik be három kategóriában: (1) a heparin/PF4 antitestekre negatív HIT-teszttel nem rendelkező résztvevők (kontroll); (2) a HIT-teszttel nem rendelkező résztvevők heparin/PF4 antitestekre pozitívak (szerokonverziós esetek); (3) olyan résztvevők, akiknél a HIT-teszt mindkét heparin/PF4 antitestre pozitív (HIT-esetek).

A toborzást a Coagulation Laboratory munkatársai és a tucsoni Banner Univerisyt Medical Center kulcsfontosságú tanulmányozói fogják elősegíteni. A pozitív és negatív heparin/PF4 antitest- és szerotoninfelszabadulási vizsgálati eredményekkel rendelkező betegeket a koagulációs laboratóriumban azonosítják, és megkeresik a páciens szolgáltatóját a kutatási vizsgálatokban való esetleges részvételről. Ha a potenciális résztvevő érdeklődik, a vizsgálati személyzet megkeresi a vizsgálat leírása és az esetleges beleegyezés érdekében. Alternatív megoldásként azok a klinikai munkatársak, akikkel konzultálnak és közvetlenül részt vesznek a betegellátásban, közvetlenül felvehetik a kapcsolatot egy potenciális résztvevővel, hogy hajlandóak legyenek részt venni a vizsgálatban.

A vizsgálatba beleegyező betegektől egy körülbelül 150 milliliteres vérmintát kérnek. A perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC) izoláljuk ebből a mintából, és -80 °C-on tároljuk, mielőtt a javasolt kísérletekben felhasználnánk. A genomi DNS-t is izolálják a mintából a HLA szekvenálás elvégzéséhez.

A HIT-t funkcionális szerotoninfelszabadulási teszttel igazolják, és a HIT valószínűségét a klinikai lefolyás alapján. Részletes adatokat gyűjtünk a résztvevő kórházi kezeléséről, a heparin dózisáról és időtartamáról, a vérlemezkeszámról, a műtéti előzményekről és a társbetegségekről. A résztvevők beleegyezését követően perifériás vérmintát vesznek, a CD-pozitív T-sejteket áramlási citometriával válogatják, és a korábban leírtak szerint genomiális DNS-t izolálnak.

A TCR-repertoárt és a specifikus TCR-változatok arányát egy adott mintában a vizsgáló laboratóriumában és központi létesítményeiben elérhető új technológiák kombinációjával határozzák meg. Egy minta TCR repertoárját a következő generációs szekvenálási technológia segítségével határozzák meg. Valószínűleg az új Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR készletet fogják használni, mivel ezt a készletet úgy optimalizálták, hogy egy genomiális DNS-mintából nyerjen elfogulatlan mennyiségi profilt az átrendeződött TCR allélokról. Jelenleg ez a készlet béta tesztelési fázisban van, és a VANTAGE az egyik teszthelyszín.

A TCR szekvenálást multiplex PCR rendszerrel hajtjuk végre az átrendezett TCRbéta DNS amplifikálására, funkcionális TCR Vbéta szegmensre specifikus primerek felhasználásával, a korábban leírtak szerint. A genomi templátokat amplifikáljuk, és a Vbeta 5.1 család TCR klonotípusainak megfigyelt relatív bőségére a szekvenciaadatokból egy várakozásmaximalizáló algoritmus segítségével következtetünk. A nemzetközi ImMunoGeneTics információs rendszer (IMGT) által meghatározott CDR3 motívumokat DNS-szekvenciák alapján jósolják meg. Minden leolvasásnál kiszámítják a referenciaszekvenciákhoz viszonyított legjobb szekvencia-illesztést, és az alacsony minőségi pontszámú leolvasásokat elvetik. A szortírozó szennyeződések és/vagy stimulációs háttér miatti nem specifikus T-sejtek kizárásához az 1 százalék alatti gyakoriságú antigén-specifikus klónokat figyelmen kívül hagyjuk.

A specifikus DHS-ben ismerten fontos TCR alléleket a cseppecske digitális PCR (ddPCR) segítségével célozzák meg. A ddPCR egy új technológia, amely olaj-emulziós csepp PCR-reakciók alapján biztosítja a céltemplát abszolút mennyiségi meghatározását (a valós idejű PCR relatív mennyiségi meghatározását biztosítja). A vizsgáló laboratóriumának tapasztalata van ezzel az új technológiával, és számos fontos TCR allél vizsgálatát már optimalizálták a ddPCR-en a vizsgáló laboratóriumában.

A kockázat minimalizálása érdekében ehhez a vizsgálathoz az alapellátási laboratóriumok levételével egy időben extra vért vesznek, amikor csak lehetséges. A résztvevőktől 150 ml vért kell adniuk a minőségi immunválasz teszteléséhez. A vizsgálatban való részvétel kockázatai a vénapunkció nem gyakori szövődményeihez kapcsolódnak, és magukban foglalhatják a kényelmetlenséget, a véraláfutást, a fertőzést és/vagy a vérrögképződést. A betegek biztonsága és kényelme érdekében képzett klinikai személyzet figyeli.

Az alanyokat a vizsgálat során ellenőrizni fogják bármilyen nemkívánatos esemény szempontjából. A súlyos nemkívánatos eseményeket a PI értesítésétől számított 10 napon belül jelentik az IRB-nek. A nem súlyos nemkívánatos eseményeket vagy a protokollnak való meg nem felelés eseteit a felülvizsgálat folytatásakor jelentik. A tárgyalást folyamatosan ellenőrizni fogják. Nincs DSMB, és nem terveznek időközi elemzéseket.