Фармакогеномика гепарин-индуцированной тромбоцитопении (PHIT)

Критерии включения: 18 лет и старше; Участники с антителами к гепарину/PF4 и тестированием SRA на ГИТ, в том числе:

участники с отрицательными антителами к гепарину/PF4 и отрицательными SRA (контроль), участники с положительными антителами к гепарину/PF4 и отрицательными SRA (случаи сероконверсии), участники с положительными антителами к гепарину/PF4 и положительными SRA (случаи ГИТ); Лечение нефракционированным гепарином или низкомолекулярным гепарином (эноксапарином, далтепарином, тинзапарином) в течение 7 дней после забора крови. Критерии исключения: возраст менее 18 лет; Невозможность дать информированное согласие В этом исследовании не используется рандомизация. Участники будут зачислены в равном количестве из трех категорий: (1) участники без HIT-теста с отрицательным результатом на антитела к гепарину/PF4 (контроль); (2) участники без положительного результата теста на ГИТ на антитела к гепарину/PF4 (случаи сероконверсии); (3) участники с положительным тестом на ГИТ на оба антитела к гепарину/PF4 (случаи ГИТ).

Набору будут способствовать сотрудники лаборатории коагуляции и ключевой исследовательский персонал Медицинского центра Banner Univerisyt в Тусоне. Пациенты с положительными и отрицательными результатами анализа на антитела к гепарину/PF4 и высвобождению серотонина будут идентифицированы в лаборатории коагуляции, и поставщику услуг пациента будет предложено потенциальное участие в научных исследованиях. Если потенциальный участник заинтересован, персонал исследования свяжется с ним для описания исследования и возможного согласия. В качестве альтернативы клинические сотрудники, с которыми проводятся консультации и которые непосредственно участвуют в уходе за пациентами, могут напрямую связаться с потенциальным участником для получения согласия на участие в исследовании.

Пациентов, согласившихся на исследование, попросят предоставить один образец крови объемом примерно 150 миллилитров. Из этого образца будут выделены мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), которые будут храниться при температуре -80°C перед использованием в предлагаемых экспериментах. Геномная ДНК также будет выделена из образца для проведения секвенирования HLA.

ГИТ будет подтверждена анализом функционального высвобождения серотонина и вероятностью ГИТ на основании клинического течения. Будут собраны подробные данные о госпитализации участника, дозе и продолжительности гепарина, количестве тромбоцитов, хирургическом анамнезе и сопутствующих заболеваниях. После согласия участников будет получен образец периферической крови, CD-положительные Т-клетки отсортированы с использованием проточной цитометрии и выделена геномная ДНК, как описано ранее.

Репертуар TCR и доля специфических вариантов TCR для конкретного образца будут определяться с использованием комбинации новых технологий, доступных в исследовательской лаборатории и на основных объектах. Репертуар TCR образца будет определяться с использованием технологии секвенирования следующего поколения. Вероятно, будет использоваться новый набор Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR, поскольку этот набор был оптимизирован для получения объективного количественного профиля реаранжированных аллелей TCR из образца геномной ДНК. В настоящее время этот комплект находится в стадии бета-тестирования, и VANTAGE является одним из тестовых сайтов.

Секвенирование TCR будет выполняться с использованием системы мультиплексной ПЦР для амплификации реаранжированной ДНК TCRbeta с использованием праймеров, специфичных для функционального сегмента TCR Vbeta, как описано ранее. Геномные матрицы будут амплифицированы, и наблюдаемая относительная численность клонотипов TCR семейства Vbeta 5.1 будет выведена из данных о последовательности с использованием алгоритма максимизации ожидания. Мотивы CDR3, определенные международной информационной системой ImMunoGeneTics (IMGT), будут предсказаны на основе последовательностей ДНК. Для каждого считывания будет вычисляться наилучшее выравнивание последовательностей относительно эталонных последовательностей, а считывания с низкими показателями качества будут отброшены. Чтобы исключить неспецифические Т-клетки из-за сортирующих примесей и/или фона стимуляции, антиген-специфические клоны с частотами ниже 1 процента будут игнорироваться.

Аллели TCR, которые, как известно, важны для конкретного DHS, будут нацелены с использованием капельной цифровой ПЦР (ddPCR). ddPCR — это новая технология, которая обеспечивает абсолютное количественное определение (ПЦР в реальном времени обеспечивает относительное количественное определение) целевого шаблона на основе реакций ПЦР с каплями масляной эмульсии. Лаборатория исследователя имеет опыт работы с этой новой технологией, и анализы ряда важных аллелей TCR уже оптимизированы для ddPCR в лаборатории исследователя.

Чтобы свести к минимуму риск, для этого исследования будет собираться дополнительная кровь, когда это возможно, одновременно с забором лабораторий первичной медико-санитарной помощи. Участников попросят сдать 150 мл крови для проверки качественного иммунного ответа. Риски, связанные с участием в этом исследовании, связаны с редкими осложнениями венепункции и могут включать дискомфорт, кровоподтеки, инфекцию и/или образование тромбов. Безопасность и комфорт пациентов будут контролироваться обученным клиническим персоналом.

Субъекты будут находиться под наблюдением в ходе исследования на предмет любых нежелательных явлений. О серьезных нежелательных явлениях будет сообщено в IRB в течение 10 дней с момента уведомления PI о событии. О несерьезных нежелательных явлениях или случаях несоблюдения протокола будет сообщено во время дальнейшего рассмотрения. Судебный процесс будет находиться под постоянным наблюдением. DSMB не планируется, и промежуточные анализы не планируются.