Farmacogenomica van door heparine geïnduceerde trombocytopenie (PHIT)

Inclusiecriteria: 18 jaar of ouder; Deelnemers met heparine/PF4-antilichaam en SRA-testen voor HIT, waaronder:

deelnemers met negatieve heparine/PF4-antilichamen en negatieve SRA (controles), deelnemers met positieve heparine/PF4-antilichamen en negatieve SRA (seroconversiegevallen), deelnemers met positieve heparine/PF4-antilichamen en positieve SRA (HIT-gevallen); Behandeling met ongefractioneerde heparine of laagmoleculaire heparine (enoxaparine, dalteparine, tinzaparine) binnen 7 dagen na bloedafname Uitsluitingscriteria: jonger dan 18 jaar; Onvermogen om geïnformeerde toestemming te geven Er is geen randomisatie betrokken bij deze studie. Er zullen evenveel deelnemers uit drie categorieën worden ingeschreven: (1) deelnemers zonder HIT die negatief testen op heparine/PF4-antilichamen (controles); (2) deelnemers zonder HIT die positief testen op heparine/PF4-antilichamen (seroconversiegevallen); (3) deelnemers met HIT die positief testen op zowel heparine/PF4-antilichamen (HIT-gevallen).

Werving zal worden vergemakkelijkt door medewerkers in het coagulatielaboratorium en door belangrijk studiepersoneel in het Banner Univerisyt Medical Center - Tucson. Patiënten met positieve en negatieve heparine/PF4-antilichaam- en serotonine-afgiftetestresultaten zullen worden geïdentificeerd in het coagulatielaboratorium en de leverancier van de patiënt zal worden benaderd over mogelijke deelname aan onderzoeksstudies. Als de potentiële deelnemer geïnteresseerd is, zal hij/zij door het studiepersoneel worden benaderd voor een studiebeschrijving en mogelijke toestemming. Als alternatief kunnen klinische medewerkers die worden geraadpleegd en die rechtstreeks deelnemen aan de zorg voor een patiënt, rechtstreeks contact opnemen met een potentiële deelnemer om bereid te zijn deel te nemen aan het onderzoek.

Patiënten die instemmen met het onderzoek zullen worden gevraagd om één bloedmonster van ongeveer 150 milliliter te verstrekken. Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) zullen uit dit monster worden geïsoleerd en bij -80°C worden bewaard voordat ze in voorgestelde experimenten worden gebruikt. Genomisch DNA zal ook uit het monster worden geïsoleerd om HLA-sequencing uit te voeren.

HIT zal worden bevestigd met een functionele serotonine-afgiftetest en HIT-waarschijnlijkheid op basis van het klinisch beloop. Er zullen gedetailleerde gegevens worden verzameld over de ziekenhuisopname van de deelnemer, de dosis en duur van de heparine, het aantal bloedplaatjes, de chirurgische geschiedenis en comorbiditeiten. Na toestemming van de deelnemers wordt een perifeer bloedmonster afgenomen, worden CD-positieve T-cellen gesorteerd met behulp van flowcytometrie en wordt genomisch DNA geïsoleerd zoals eerder beschreven.

Het TCR-repertoire en het aandeel van specifieke TCR-varianten voor een bepaald monster zullen worden bepaald met behulp van een combinatie van nieuwe technologieën die beschikbaar zijn in het laboratorium en de kernfaciliteiten van de onderzoeker. Het TCR-repertoire van een sample zal worden bepaald met behulp van sequencingtechnologie van de volgende generatie. De nieuwe Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR-kit zal waarschijnlijk worden gebruikt, aangezien deze kit is geoptimaliseerd om een ​​onbevooroordeeld kwantitatief profiel te verkrijgen van herschikte TCR-allelen uit een genomisch DNA-monster. Momenteel bevindt deze kit zich in de bètatestfase en VANTAGE is een van de testsites.

TCR-sequencing zal worden uitgevoerd met behulp van een multiplex PCR-systeem om herschikt TCRbeta-DNA te amplificeren met behulp van primers die specifiek zijn voor een functioneel TCR Vbeta-segment, zoals eerder beschreven. Genomische templates zullen worden geamplificeerd en de waargenomen relatieve hoeveelheid van Vbeta 5.1-familie TCR-klonotypes zal worden afgeleid uit sequentiegegevens met behulp van een verwachtingsmaximaliserend algoritme. CDR3-motieven zoals gedefinieerd door het internationale ImMunoGeneTics-informatiesysteem (IMGT) zullen worden voorspeld op basis van DNA-sequenties. Voor elke uitlezing wordt de beste sequentie-uitlijning ten opzichte van referentiesequenties berekend en worden uitlezingen met lage kwaliteitsscores weggegooid. Om niet-specifieke T-cellen uit te sluiten vanwege sorterende onzuiverheden en/of stimulatieachtergrond, zullen antigeenspecifieke klonen met frequenties onder 1 procent worden verwaarloosd.

TCR-allelen waarvan bekend is dat ze belangrijk zijn in specifieke DHS, zullen worden getarget met behulp van droplet digital PCR (ddPCR). De ddPCR is een nieuwe technologie die absolute kwantificering biedt (real-time PCR biedt relatieve kwantificering) van doeltemplate op basis van olie-emulsiedruppel-PCR-reacties. Het laboratorium van de onderzoeker heeft ervaring met deze nieuwe technologie en voor een aantal belangrijke TCR-allelen zijn in het laboratorium van de onderzoeker al op de ddPCR de assays geoptimaliseerd.

Om het risico tot een minimum te beperken, zal voor dit onderzoek extra bloed worden afgenomen op hetzelfde moment dat de laboratoria in de eerste lijn waar mogelijk worden afgenomen. Deelnemers wordt gevraagd om 150 ml bloed te verstrekken om kwalitatieve immuunresponsen te testen. De risico's verbonden aan deelname aan dit onderzoek houden verband met ongebruikelijke complicaties van venapunctie en kunnen bestaan ​​uit ongemak, blauwe plekken, infectie en/of vorming van bloedstolsels. Patiënten worden gecontroleerd op veiligheid en comfort door getraind klinisch personeel.

Proefpersonen zullen tijdens de studie worden gecontroleerd op eventuele bijwerkingen. Ernstige ongewenste voorvallen worden binnen 10 dagen na de melding van de gebeurtenis door de PI aan de IRB gemeld. Niet-ernstige ongewenste voorvallen of gevallen van niet-naleving van het protocol zullen worden gerapporteerd op het moment van de voortdurende beoordeling. De proef zal doorlopend worden gevolgd. Er is geen DSMB en er zijn ook geen tussentijdse analyses gepland.