Farmakogenomi af heparin-induceret trombocytopeni (PHIT)

Inklusionskriterier: 18 år eller ældre; Deltagere med heparin/PF4-antistof og SRA-test for HIT, herunder:

deltagere med negative heparin/PF4-antistoffer og negative SRA (kontroller), deltagere med positive heparin/PF4-antistoffer og negative SRA (serokonversionstilfælde), deltagere med positive heparin/PF4-antistoffer og positive SRA (HIT-tilfælde); Behandling med ufraktioneret heparin eller lavmolekylært heparin (enoxaparin, dalteparin, tinzaparin) inden for 7 dage efter blodudtagning. Eksklusionskriterier: Under 18 år; Manglende evne til at give informeret samtykke Der er ingen randomisering involveret i denne undersøgelse. Deltagerne vil blive indskrevet i lige mange fra tre kategorier: (1) deltagere uden HIT-test negativ for heparin/PF4-antistoffer (kontroller); (2) deltagere uden HIT testet positive for heparin/PF4-antistoffer (serokonversionstilfælde); (3) deltagere med HIT testet positiv for begge heparin/PF4-antistoffer (HIT-tilfælde).

Rekruttering vil blive faciliteret gennem samarbejdspartnere i koagulationslaboratoriet og gennem nøgleundersøgelsespersonale i Banner Univerisyt Medical Center - Tucson. Patienter med positive og negative heparin/PF4-antistof- og serotoninfrigivelsesassayresultater vil blive identificeret i koagulationslaboratoriet, og patientens leverandør vil blive kontaktet om potentiel deltagelse i forskningsstudier. Hvis den potentielle deltager er interesseret, vil de blive kontaktet af undersøgelsens personale for undersøgelsesbeskrivelse og eventuelt samtykke. Alternativt kan kliniske samarbejdspartnere, der konsulteres og deltager direkte i en patientbehandling, kontakte en potentiel deltager direkte for at være villig til at deltage i undersøgelsen.

Patienter, der giver samtykke til undersøgelsen, vil blive bedt om at give en enkelt blodprøve på ca. 150 milliliter. Perifere blodmononukleære celler (PBMC'er) vil blive isoleret fra denne prøve og opbevaret ved -80C før brug i foreslåede eksperimenter. Genomisk DNA vil også blive isoleret fra prøven for at udføre HLA-sekventering.

HIT vil blive bekræftet med en funktionel serotoninfrigivelsesanalyse og HIT-sandsynlighed baseret på klinisk forløb. Der vil blive indsamlet detaljerede data vedrørende deltagerens hospitalsindlæggelse, heparindosis og varighed, blodpladetal, kirurgisk historie og følgesygdomme. Efter samtykke fra deltagerne vil en perifer blodprøve blive erhvervet, CD-positive T-celler sorteret ved hjælp af flowcytometri og genomisk DNA isoleret som tidligere beskrevet.

TCR-repertoiret og andelen af ​​specifikke TCR-varianter for en bestemt prøve vil blive bestemt ved hjælp af en kombination af nye teknologier, der er tilgængelige i investigatorens laboratorium og kernefaciliteter. TCR-repertoiret for en prøve vil blive bestemt ved hjælp af næste generations sekventeringsteknologi. Det nye Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR-kit vil sandsynligvis blive brugt, da dette kit er blevet optimeret til at opnå en uvildig kvantitativ profil af omarrangerede TCR-alleler fra en genomisk DNA-prøve. I øjeblikket er dette kit i beta-testfasen, og VANTAGE er et af teststederne.

TCR-sekventering vil blive udført under anvendelse af multipleks PCR-system til at amplificere omarrangeret TCRbeta DNA under anvendelse af primere, der er specifikke for et funktionelt TCR Vbeta segment som tidligere beskrevet. Genomiske skabeloner vil blive amplificeret, og observeret relativ overflod af Vbeta 5.1-familie TCR-klonotyper vil blive udledt fra sekvensdata ved hjælp af en forventningsmaksimeringsalgoritme. CDR3-motiver som defineret af det internationale ImMunoGeneTics informationssystem (IMGT) vil blive forudsagt baseret på DNA-sekvenser. For hver læsning vil den bedste sekvensjustering mod referencesekvenser blive beregnet, og læsninger med lav kvalitetsscore vil blive kasseret. For at udelukke uspecifikke T-celler på grund af sorteringsurenheder og/eller stimuleringsbaggrund, vil antigenspecifikke kloner med frekvenser under 1 procent blive forsømt.

TCR-alleler, der vides at være vigtige i specifik DHS, vil blive målrettet ved hjælp af droplet digital PCR (ddPCR). ddPCR er en ny teknologi, der giver absolut kvantificering (real-time PCR giver relativ kvantificering) af target template baseret på olie-emulsion dråbe PCR reaktioner. Investigatorens laboratorium har erfaring med denne nye teknologi, og assays for en række vigtige TCR-alleler er allerede blevet optimeret på ddPCR i investigatorens laboratorium.

For at minimere risikoen vil der blive indsamlet ekstra blod til denne undersøgelse, samtidig med at der udtages primære laboratorier, når det er muligt. Deltagerne vil blive bedt om at give 150 ml blod for at teste kvalitative immunresponser. Risici forbundet med deltagelse i denne undersøgelse relaterer sig til ualmindelige komplikationer ved venepunktur og kan omfatte ubehag, blå mærker, infektion og/eller dannelse af blodprop. Patienter vil blive overvåget for sikkerhed og komfort af uddannet klinisk personale.

Forsøgspersoner vil blive overvåget i løbet af undersøgelsen for eventuelle uønskede hændelser. Alvorlige uønskede hændelser vil blive rapporteret til IRB inden for 10 dage efter PI's underretning om hændelsen. Ikke-alvorlige uønskede hændelser eller tilfælde af manglende overholdelse af protokollen vil blive rapporteret på tidspunktet for den fortsatte gennemgang. Retssagen vil blive overvåget løbende. Der er ingen DSMB, og der er heller ikke planlagt foreløbige analyser.