Pharmakogenomik der Heparin-induzierten Thrombozytopenie (PHIT)

Einschlusskriterien: 18 Jahre oder älter; Teilnehmer mit Heparin/PF4-Antikörper und SRA-Tests für HIT, einschließlich:

Teilnehmer mit negativen Heparin/PF4-Antikörpern und negativer SRA (Kontrollen), Teilnehmer mit positiven Heparin/PF4-Antikörpern und negativer SRA (Serokonversionsfälle), Teilnehmer mit positiven Heparin/PF4-Antikörpern und positiver SRA (HIT-Fälle); Behandlung mit unfraktioniertem Heparin oder niedermolekularem Heparin (Enoxaparin, Dalteparin, Tinzaparin) innerhalb von 7 Tagen nach der Blutabnahme Ausschlusskriterien: Weniger als 18 Jahre alt; Unfähigkeit, eine Einverständniserklärung abzugeben Diese Studie beinhaltet keine Randomisierung. Die Teilnehmer werden zu gleichen Teilen aus drei Kategorien eingeschrieben: (1) Teilnehmer ohne HIT-Test negativ auf Heparin/PF4-Antikörper (Kontrollen); (2) Teilnehmer ohne HIT, die positiv auf Heparin/PF4-Antikörper getestet wurden (Serokonversionsfälle); (3) Teilnehmer mit positivem HIT-Test auf beide Heparin/PF4-Antikörper (HIT-Fälle).

Die Rekrutierung wird durch Mitarbeiter im Gerinnungslabor und durch wichtiges Studienpersonal im Banner University Medical Center - Tucson erleichtert. Patienten mit positiven und negativen Heparin/PF4-Antikörper- und Serotonin-Freisetzungstestergebnissen werden im Gerinnungslabor identifiziert und der Arzt des Patienten wird bezüglich einer möglichen Teilnahme an Forschungsstudien angesprochen. Wenn der potenzielle Teilnehmer interessiert ist, wird er vom Studienpersonal für eine Studienbeschreibung und eine mögliche Zustimmung angesprochen. Alternativ können klinische Mitarbeiter, die konsultiert werden und direkt an der Patientenversorgung teilnehmen, einen potenziellen Teilnehmer direkt kontaktieren, um seine Bereitschaft zur Teilnahme an der Studie zu erfragen.

Patienten, die der Studie zustimmen, werden gebeten, eine Blutprobe von ungefähr 150 Millilitern abzugeben. Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) werden aus dieser Probe isoliert und vor der Verwendung in vorgeschlagenen Experimenten bei -80 °C gelagert. Genomische DNA wird auch aus der Probe isoliert, um eine HLA-Sequenzierung durchzuführen.

HIT wird mit einem funktionellen Serotonin-Freisetzungstest und HIT-Wahrscheinlichkeit basierend auf dem klinischen Verlauf bestätigt. Es werden detaillierte Daten zum Krankenhausaufenthalt des Teilnehmers, zur Heparindosis und -dauer, zur Thrombozytenzahl, zur chirurgischen Vorgeschichte und zu Komorbiditäten erhoben. Nach Zustimmung der Teilnehmer wird eine periphere Blutprobe entnommen, CD-positive T-Zellen mittels Durchflusszytometrie sortiert und genomische DNA wie zuvor beschrieben isoliert.

Das TCR-Repertoire und der Anteil spezifischer TCR-Varianten für eine bestimmte Probe werden mithilfe einer Kombination neuartiger Technologien bestimmt, die im Labor und in den zentralen Einrichtungen des Prüfers verfügbar sind. Das TCR-Repertoire einer Probe wird mit Next-Generation-Sequencing-Technologie bestimmt. Das neue ImmunoSEQ TCR-Kit von Adaptive Technologies wird wahrscheinlich verwendet, da dieses Kit optimiert wurde, um ein unvoreingenommenes quantitatives Profil von umgeordneten TCR-Allelen aus einer genomischen DNA-Probe zu erhalten. Derzeit befindet sich dieses Kit in der Beta-Testphase und VANTAGE ist eine der Testseiten.

Die TCR-Sequenzierung wird unter Verwendung eines Multiplex-PCR-Systems durchgeführt, um umgeordnete TCRbeta-DNA unter Verwendung von Primern zu amplifizieren, die für ein funktionelles TCR-Vbeta-Segment spezifisch sind, wie zuvor beschrieben. Genomische Vorlagen werden amplifiziert und die beobachtete relative Häufigkeit von TCR-Klontypen der Vbeta 5.1-Familie wird aus den Sequenzdaten unter Verwendung eines Erwartungsmaximierungsalgorithmus abgeleitet. CDR3-Motive, wie sie vom internationalen ImMunoGeneTics-Informationssystem (IMGT) definiert sind, werden basierend auf DNA-Sequenzen vorhergesagt. Für jeden Read wird das beste Sequenz-Alignment gegen Referenzsequenzen berechnet und Reads mit niedrigen Qualitätswerten werden verworfen. Um unspezifische T-Zellen aufgrund von Sortierverunreinigungen und/oder Stimulationshintergrund auszuschließen, werden antigenspezifische Klone mit Häufigkeiten unter 1 Prozent vernachlässigt.

TCR-Allele, von denen bekannt ist, dass sie bei bestimmten DHS wichtig sind, werden mit Tröpfchen-Digital-PCR (ddPCR) angegriffen. Die ddPCR ist eine neue Technologie, die eine absolute Quantifizierung (Echtzeit-PCR bietet eine relative Quantifizierung) der Zielvorlage basierend auf Öl-Emulsionströpfchen-PCR-Reaktionen ermöglicht. Das Labor des Prüfarztes hat Erfahrung mit dieser neuen Technologie und Assays für eine Reihe wichtiger TCR-Allele wurden bereits auf der ddPCR im Labor des Prüfarztes optimiert.

Um das Risiko zu minimieren, wird für diese Studie zusätzliches Blut gesammelt, wann immer dies möglich ist, gleichzeitig mit der Entnahme von Primärversorgungslabors. Die Teilnehmer werden gebeten, 150 ml Blut bereitzustellen, um qualitative Immunantworten zu testen. Die mit der Teilnahme an dieser Studie verbundenen Risiken beziehen sich auf gelegentliche Komplikationen der Venenpunktion und können Beschwerden, Blutergüsse, Infektionen und/oder die Bildung von Blutgerinnseln umfassen. Die Patienten werden von geschultem klinischem Personal auf Sicherheit und Komfort überwacht.

Die Probanden werden im Verlauf der Studie auf unerwünschte Ereignisse überwacht. Schwerwiegende unerwünschte Ereignisse werden dem IRB innerhalb von 10 Tagen nach Benachrichtigung des PI über das Ereignis gemeldet. Nicht schwerwiegende unerwünschte Ereignisse oder Fälle der Nichteinhaltung des Protokolls werden zum Zeitpunkt der fortlaufenden Überprüfung gemeldet. Die Studie wird laufend überwacht. Es gibt weder ein DSMB noch sind Zwischenanalysen geplant.